應用雙層式蟲卵過濾裝置進行蛔蟲卵檢測的效果

杜艷紅，李佳

九江市潯陽區疾病預防控制中心 （江西九江 332000）

寄生蟲寄生于宿主或附著于體外，通過對被寄生動物造成損害的方式維持生存、發育或繁殖所需的營養，可能由此導致疾病傳播或誘發各種并發癥[1-2]。隨著檢測技術相關理論和方法的不斷完善，以及實時熒光定量聚合酶鏈反應（real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction，qRT-PCR）檢測、環介導等溫擴增、酶聯免疫檢測等技術的創新應用，提升了寄生蟲蟲卵檢測的靈敏度和特異度。但受限于儀器設備和操作要求，其不適于大范圍推廣應用，尤其經濟相對落后的中西部地區，各級疾病預防控制中心依然應用傳統的蟲卵檢測方法[3]。蛔蟲是人體常見且呈世界性分布的寄生蟲，具有感染性強、癥狀不典型、感染后表現隱匿等特征。其在衛生條件相對較差的地區更為流行，同時因主要寄生于小腸部位，可通過檢測糞便樣品中的蟲卵而確診。雖然檢測流程和技術較為簡單，但依然需要配合較為完善的樣品前期處理，才能更好地提升檢測效果[4]。面對較大樣本量的處理和檢測任務，傳統操作較為煩瑣。基于傳統檢測方式的不足，本研究特對蟲卵過濾裝置進行優化設計，使初步去除糞便雜質、收集蟲卵過濾兩步驟同時進行，增強使用的便捷性和適用范圍。為進一步明確雙層式蟲卵過濾裝置的實踐效果，特進行如下對照試驗研究，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2019年2月至2022年8月，對江西省某地948例確診蛔蟲感染患兒（男613 例、女335 例）糞便樣品進行蛔蟲卵檢測，每例患兒均單獨采集樣品，共采集948 份糞便樣品，一式兩份。患兒家長均對研究內容知情同意。

診斷標準：參照《膽道蛔蟲病的診斷和治療（國內文獻綜述）》[5]，根據患者流行病學史、臨床癥狀，結合實驗室檢查進行確診。

納入標準：均為學齡兒童（6～12 歲）蛔蟲感染確診患兒；采集糞便樣品前6 個月未使用驅蟲藥物；取樣前未合并其他感染性疾病；病情可控。排除標準：合并消化系統器質性疾病；合并其他寄生蟲感染。

1.2 儀器和試劑

所用儀器主要包括光學顯微鏡（OLYMPUS 公司，SZX16 型），恒溫水浴箱（滄州鴻浩杰科建筑儀器有限公司，HWY-30 型）。所用試劑主要包括氯化鈉、醋酸，均為試劑純，購自南昌明瑞化工有限公司。所用耗材主要包括149、88、44 μm規格尼龍紗布，塑料定量板，刮片，載玻片，蓋玻片，濾紙等，均由九江市潯陽區疾病預防控制中心提供。

1.3 檢測方法

蛔蟲感染確診患兒糞便樣品一式兩份根據采用不同的前期處理操作方法分為對對照組和實驗組，但由相同的操作人員負責寄生蟲樣品的后期檢測，檢測蟲卵均為蛔蟲卵。具體實施之前，操作人員均完成操作流程培訓、蟲卵鑒別培訓，能根據患兒排出蟲體的形態進行鑒別。

對照組采用紗布燒杯過濾裝置。手工制作簡易過濾裝置，將3 層紗布疊加置于燒杯上方，取2 g 待測糞便樣品溶于0.9%氯化鈉注射液（58 ml）制作懸浮漿液，倒入燒杯進行3 次過濾，分別使用的濾網規格為網眼直徑149、88、44 μm；再使用0.9%氯化鈉注射液對紗布進行3～5 次漂洗，沖洗液再次經濾紙過濾。檢測方法為0.9%氯化鈉注射液直接涂片法：用粗吸管收集表面液體并轉移至載玻片，厚度以能隱約辨認玻片下方字跡為宜，將蓋玻片蓋于樣本上并靜置10 min，再將其置于顯微鏡載玻片上，使用低倍鏡進行觀察，每份樣品重復進行3 張涂片鏡檢，鏡檢時瀏覽全片。

試驗組采用雙層式蟲卵過濾裝置，其結構特征和使用方法如下。（1）結構特征：矩形塊狀濾液箱頂部設有支架和過濾組件，濾筒底部設有出口、頂部可放置濾液瓶；濾管頂端均為相互貼合的半圓形設置，便于兩個濾管匹配設置于濾筒的圓管；濾管底端分別連接過濾盒，過濾盒連接濾液箱頂部，濾液箱頂板上方的2 個過濾盒位置貫通設置一圓槽，過濾盒均通過圓槽連通于濾液箱；濾液箱底部平行設有2 個滑軌，濾液箱內通過滑軌設有一可抽拉濾液盒，濾液盒的頂部為空置結構；濾筒包括方柱筒和錐形筒，兩者之間開設一貫通的圓管，方柱筒側面向內水平開設第一矩形槽，第一矩形槽的兩側面均設有第一滑槽，第一矩形槽內通過第一滑槽設有一可抽拉第一過濾網[6]，見圖1～2。（2）使用方法：操作前檢查，確保雙層式蟲卵過濾裝置濾筒和過濾組件之間密封性良好，沖刷濾筒、過濾盒、濾液箱，避免雜質影響操作過程，更新并檢查濾網，確保正常使用。檢驗人員將待測樣品溶于0.9%氯化鈉注射液，制作成懸浮漿液，而后倒入過濾裝置，樣品流經第一過濾網時可通過孔徑去除雜質，同時通過2 個濾管和第2 過濾網進行兩份樣品的收集；檢驗人員可通過濾液盒側面設置把手進行過濾后樣品的提取，重復使用0.9%氯化鈉注射液對樣品進行3～5 次漂洗；載玻片和蓋玻片操作、低倍鏡觀察方法同對照組。

圖1 雙層式蟲卵過濾裝置結構示意圖

圖2 雙層式蟲卵過濾裝置實物圖

1.4 指標記錄

研究團隊組建3 人小組，負責采集研究效應指標相關數據。（1）蛔蟲卵檢出情況：檢測948 例蛔蟲感染確診患兒糞便樣品中蛔蟲卵是否檢出及具體計數，計數方法參照麥克馬斯特計數法，每克糞便樣品蛔蟲卵計數=（左計數池內蟲卵數+右計數池內蟲卵數）/2×200[7]。（2）操作人員對操作過程滿意程度：對20 名操作人員進行主觀評定，評定內容包括3 個維度（樣品前期處理效率、樣品前期處理方便程度、樣品前期處理衛生狀況），每個維度均設置3 個選項（滿意、一般、不滿意）。

1.5 統計學處理

采用Epidata 3.0 軟件建立數據庫，采用SPSS 20.0 統計軟件進行數據分析。計量資料以±s表示，采用t檢驗。計數資料以率表示，采用χ2檢驗。等級資料采用Z檢驗。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組樣品蛔蟲卵檢出率與每克樣品蛔蟲卵計數比較

試驗組陽性檢出率高于對照組，每克糞便樣品蛔蟲卵計數大于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05），見表1。

2.2 操作人員對操作過程滿意程度比較

20 名操作人員對樣品前期處理過程的3 個維度進行滿意程度評價，結果顯示，試驗組3 個維度滿意度均高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 操作人員對操作過程滿意程度比較（例）

3 討論

目前，臨床對阿苯達唑、甲苯達唑、伊維菌素等藥物的廣泛應用，極大程度提升了蛔蟲病的治愈率。但受蛔蟲病傳播途徑廣泛、居民衛生習慣欠佳、雌蟲繁殖能力極強、蟲體生存能力較強等因素的交互影響，蛔蟲病的發病率依然居高不下，甚至在經濟欠發達地區長期流行[8]。就寄生部位而言，通常情況下絕大多數蛔蟲寄生于人體的小腸部位，發生膽內、肺部等位置轉移的比例相對較小，因此檢測重點人群糞便能有效、快速地判定蛔蟲感染情況，而0.9%氯化鈉注射液直接涂片法依然是當前最經濟、便捷且廣泛應用的檢測技術。就檢測結果而言，雖然蛔蟲病患者通過糞便樣品檢測蛔蟲卵的陽性率較高，但糞便樣品前期處理的規范性依然會影響最終檢測結果，尤其是影響蛔蟲卵定量檢測結果[9]。因此，持續加強糞便樣品前期處理過程的規范性，尤其是通過裝置設計優化樣品前期處理過程，同時提升操作過程的便捷性，對于提升操作人員工作效率，并提高蛔蟲卵定量檢測結果至關重要。

本研究結果顯示，試驗組陽性檢出率高于對照組，每克糞便樣品蛔蟲卵計數大于對照組，主要與試驗組所用的裝置極大程度優化了糞便樣品的前期處理過程有關。其原因如下：（1）方柱筒和錐形筒內設有一貫通圓管，內設的第一過濾網、第二過濾網能快速實現糞便樣品懸浮漿液的連續過濾，同時第一過濾網和第二過濾網具有不同的孔徑，可根據實驗檢測要求去除雜質、收集蟲卵等；（2）分別通過兩個濾管和第二過濾網進行兩份樣品的收集，可同時對兩份樣品進行檢查、比較和研究，大大提高了實驗效率并豐富了實驗內容；（3）雙層式蟲卵過濾裝置還可根據實際需要調整濾網的網眼規格，以更好地進行糞便樣品的前期處理，進而提升后期檢測的準確率。兩組糞便樣品蛔蟲卵計數存在差異的原因為，經過雙層式蟲卵過濾裝置處理的糞便樣品初步實現了蛔蟲卵的富集，因此在使用0.9%氯化鈉注射液直接涂片法進行樣品檢測時，蛔蟲卵檢出的數量相對更大[10]。

本研究結果顯示，操作人員對試驗組雙層式蟲卵過濾裝置的使用滿意度更高。其原因為，雙層式蟲卵過濾裝置初步實現了糞便樣品懸浮漿液的連貫性處理，不需要按照傳統的樣品前期處理方法（使用紗布進行過濾，并對紗布進行重復漂洗），極大提升了操作效率。同時，進行室外臨時檢測時也不同于傳統方法（必須攜帶燒杯、尼龍濾網、相關支架等裝置），僅憑借雙層式蟲卵過濾裝置就能實現樣品的快速處理。除此之外，面對多項時效性強的檢測任務時，雙層式蟲卵過濾裝置在完成單項樣品前期處理后，就能使用0.9%氯化鈉注射液對設置內壁進行快速沖洗，免去了后期處理的煩瑣工作。試驗組操作人員認為雙層式蟲卵過濾裝置對樣品前期處理更為衛生，其原因為，雙層式蟲卵過濾裝置實現了糞便樣品懸浮漿液的過濾，全部過程均在濾筒、濾液箱內部實現，即使因操作力度較大而產生空氣懸浮物質，也不會對操作人員產生附加影響。

綜上所述，雙層式蟲卵過濾裝置用于蛔蟲卵檢測，能明顯提升檢測效果，操作人員對樣品前期處理效率、方便程度、衛生狀況也更為滿意。本研究創新之處在于，通過雙層式蟲卵過濾裝置初步實現了樣品的連貫性處理，同時根據實際需要不斷調整尼龍濾網規格，從而實現蛔蟲卵的富集，利于提高蛔蟲卵檢出率及每克糞便樣品的蛔蟲卵計數。但本研究亦存在兩點不足：一是檢測對象均為蛔蟲卵，是否適用于其他寄生蟲蟲卵相關樣品的前期處理，后續研究有待確認；二是雙層式蟲卵過濾裝置使用效果主要通過操作人員主觀評價獲得，客觀指標尚需后續研究進一步采集分析。