p53轉錄調控靶基因GGT6對人結腸癌的影響

柳子朝，杜文靜，2，李 莉*

1.中國醫學科學院基礎醫學研究所 北京協和醫學院基礎學院 細胞生物學系 醫學分子生物學國家重點實驗室，北京 100005；2.山西醫科大學 基礎醫學院 細胞生理學教育部重點實驗室，山西 太原 030606

結腸癌是全球范圍內常見的惡性腫瘤之一,據2020年的全球癌統計,結腸癌的發病人數及死亡人數在36種癌中均位列第5位,且其發病率和死亡率均較過去有明顯上升[1]。p53是常見的抑癌基因,其通過靶基因控制包括細胞凋亡、細胞周期、DNA修復以及細胞代謝等多種生物過程[2-3]。目前,p53轉錄調控靶基因的尋找仍然是生命科學領域的研究熱點。Nutlin是一種特異性靶向MDM2/p53相互作用的小分子抑制劑,通過穩定p53從而激活癌細胞周期阻滯和凋亡通路,在生物學實驗中常常作為p53的激活劑使用[4]。本研究通過對Nutlin處理HCT116細胞得到的RNA-seq數據進行分析,預測并實驗驗證了GGT6是p53轉錄調控的靶基因。

GGT6是γ-谷氨酰轉移酶(gamma glutamyl transferase,GGT)基因家族中的一員,目前針對其的研究還很少,主要是通過一些組學、生物信息學等研究篩選出了GGT6可能在腫瘤等疾病中有作用[5-7]。GGT6相關的調控基因鮮有報道,也沒有其與結腸癌相關的研究報道,因此本研究就GGT6在結腸癌中的影響進行了生物信息學分析。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細胞:人胚腎細胞系HEK-293T、人結腸癌細胞系HCT116和HCT8(ATCC細胞庫)。

1.1.2 主要試劑:Nutlin-3a(Nutlin)(蘭博利德公司),Lipofectamine?2000、Lipofectamine?RNAiMAX(Invitrogen公司),DMEM培養基、胎牛血清和胰蛋白酶(北京細工生物科技有限公司),BCA蛋白定量試劑盒(上海翊圣生物科技有限公司),雙熒……