部分羊場青儲飼料霉菌毒素污染狀況分析

摘要 為了解部分羊場青儲飼料中霉菌毒素污染狀況，本試驗通過量子點熒光競爭法測定43份青儲飼料及其原料中的黃曲霉毒素B1（AFB1）、玉米赤霉烯酮（ZEN）和嘔吐毒素（DON）3種常見霉菌毒素含量。結果表明，全株玉米青貯、青貯玉米秸稈中AFB1的檢出率分別為12.5%、16.6%，陽性最高值分別為2.4、1.9 μg/kg，超標率為0。蠶豆殼（秧）、大蒜皮（秧）、油菜殼（秧）、花生秧、碗豆秧、全株小麥青貯、全株玉米青貯和青貯玉米秸稈中ZEN的檢出率分別為33.3%、50%、75%、14.3%、100%、100%、50%和66.7%，陽性最高值分別為10、10、20、20、30、50、390和80 μg/kg，超標率為0。油菜殼（秧）、小麥秸稈、全株玉米青貯和玉米秸稈青貯中DON的檢出率分別為25%、50%、50%和50%，陽性最高值分別為200、720、500和380 μg/kg，超標率為0。被檢樣品中霉菌毒素檢出率為69.8%，其中，ZEN污染最為嚴重，檢出率為44.2%，DON和AFB1存在輕微污染，3種霉菌毒素的超標率均為0。這說明部分羊場青儲飼料霉菌毒素污染超標率為0，但檢出率較高，需要重視青儲飼料的制備及儲存，加強霉菌毒素實時監測，提高羊場青儲飼料的質量。

關鍵詞 霉菌毒素；青儲飼料；污染狀況

中圖分類號 S816.5+3 文獻標識碼 A

文章編號 1007-7731（2023）23-24-0151-05

Analysis of mycotoxin contamination of green roughage in some sheep farms

HAN Rui1， 2 " "TANG Tao1 " "ZHANG Meng’en1， 2 " "LI Kangle1 " "ZHAO Guohong1 " "WANG Shiqin 1， 2*

（1College of Animal Science， Anhui Science and Technology University， Chuzhou 239000， China;

2Animal nutrition regulation and health Anhui Provincial Key Laboratory， Chuzhou 239000， China）

Abstract In order to understand the mycotoxin pollution situation in some green storage feed of sheep farms. In this experiment， the content of aflatoxin B1 （AFB1）， zealberelone （ZEN） and vomiting toxin （DON） in 43 samples and their raw materials was determined by quantum dot fluorescence competition method. The results showed that the detection rate of AFB1 in whole corn silage and silage was 12.5% and 16.6%， respectively， and the highest positive value was 2.4 and 1.9 μg/kg， respectively， and the exceeding rate was 0. The detection rate of ZEN in broad bean shell （seedling）， garlic skin （seedling）， rape shell （seedling）， peanut seedlings， bowl seedlings， whole wheat silage， whole corn silage and silage corn straw was 33.3%， 50%， 75%， 14.3%， 100%， 100%， 50% and 66.7%.The highest positive value was 10， 10， 20， 20， 30， 50， 390 and 80 μg/kg respectively. The detection rate of DON in rape shell（seedlings）， wheat straw， whole plant corn silage and corn straw silage was 25%， 50%， 50% and 50%， respectively， and the highest positive value was 200， 720， 500 and 380 μg/kg， with the exceeding rate of 0. The detection rate of mycotoxins in the tested samples reached 69.8%， among which ZEN pollution was the most serious， with the detection rate of 44.2%. DON and AFB1 were slightly contaminated， and the exceeding rate of the three mycotoxins was 0. This indicates that the contamination rate of mycotoxin in some sheep stores was 0，but the detection rate was high， so it was still necessary to pay attention to the preparation and storage of green feed， strengthen the real-time monitoring of mycotoxins， and improve the quality of silage in sheep farms.

Keywords mycotoxin; green roughage; contamination status

霉菌毒素是指霉菌在生長過程中產生的一種或多種次級代謝產物[1]，青儲飼料在收獲前和存儲過程中極易被霉菌毒素污染。動物攝入霉菌毒素，會抑制免疫反應，導致生理機能和免疫力下降，還會誘發炎癥，增加機體對病原體的易感性[2]。霉菌毒素的產生取決于霉菌的基因組成和環境因素，與霉菌毒素發生有關的環境條件包括濕度、溫度和高水分活度等[3]。黃曲霉菌素是二氫呋喃香豆素的衍生物，不溶于水，易溶于有機溶劑，如氯仿、甲醇和丙酮等[4]。黃曲霉毒素具有誘變、致癌和致畸的毒性作用[5-6]，是目前公認的天然致癌物，可能存在于變質玉米、豆類和花生等作物產品中[7]。黃曲霉毒素及其代謝物可以保留在動物產品以及一些食品中，污染肉、蛋和奶等動物性產品，并通過食物鏈對人類健康構成威脅[8]。嘔吐毒素主體成分為脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（De-oxynivalenol，DON），屬于單端孢霉烯族化合物[9-10]，攝入低劑量或中等劑量的DON會導致惡心、腹瀉、胃腸道病變、營養效率降低和體重減輕等[11]。玉米赤霉烯酮是一種由鐮刀菌產生的生物毒素，食用含有高劑量玉米赤霉烯酮的谷物和飼料會使懷孕母畜出現流產、死胎等，最終導致癌變[12-13]。

近年來，肉羊畜牧產業發展迅速，為了解羊場粗飼料及飼料原料中霉菌毒素污染程度，從部分羊場中收集了43份樣品，采用量子點熒光競爭法進行玉米赤霉烯酮（ZEN）、嘔吐霉素（DON）和黃曲霉毒素B1（AFB1）的檢測分析，對比《飼料衛生標準》（GB 13078—2017）得出檢測結果，分析不同飼料原料中霉菌毒素的污染情況，為霉菌毒素的防控及羊場持續健康發展提供參考。

1 材料與方法

1.1 飼料樣本

2022年3—8月，于14個鄉鎮代表性羊場共30家，采集羊場青儲飼料43份樣品，包括花生秧、全株玉米青貯、玉米秸稈青貯、小麥秸稈、大蒜皮（秧）、蠶豆殼（秧）、全株小麥青貯、豌豆秧和油菜殼（秧）。用四分法，取1 kg樣品，粉碎后過40目篩，裝瓶并貼上標簽備用；對于含水量高的樣品，置于65 ℃烘箱烘干至恒定重量后，粉碎過篩備用。

1.2 儀器和設備

1.2.1 試驗儀器 "電子天平，飼料粉碎機，渦輪振蕩器，離心機，試管，量筒，恒溫孵育器，熒光讀數儀，黃曲霉毒素B1（AFB1）、玉米赤霉烯酮（ZEN）及嘔吐毒素（DON）檢測試劑盒（天津龍科新域生物技術有限公司），10～100 μL移液器，50 mL離心管或錐形瓶，50～1 000 μL移液器及吸頭。

1.2.2 試驗試劑 "50%乙醇，蒸餾水，樣品稀釋液。

1.3 試驗方法

本試驗采用量子點熒光競爭法定量檢測樣本中AFB1、ZEN和DON的濃度。以AFB1測定為例，具體測定步驟：應用量子點免疫層析技術，以纖維狀色譜材料條為固相，通過毛細管作用使樣品溶液在特定位置發生反應。樣品中的AFB1與標記有量子點的特異性抗體結合，抑制抗體與檢測線（T線）上的B1-BSA偶聯體之間的結合，導致T線的熒光值發生變化。操作步驟如下。

（1）提前30 min打開多功能孵育器預熱。

（2）配制50%乙醇（提取液）。1∶1（v/v）乙醇/水。

（3）稱取5 g樣本加入40 mL提取液，放入50 mL離心管中渦旋振蕩3 min，之后靜置1 min以上。

（4）將450 μL樣品稀釋液加入離心管中，再從靜置后的樣本提取液中吸取50 μL上清液加到500 μL離心管中充分振蕩后，4 000 r/min離心5 min。

（5）將微孔條放至孵育器載架微孔上，吸取離心后上清液200 μL加入微孔中。將裝好試劑條的三聯檢測卡放到孵育器載架上，計時5 min后使用移液器吹打混勻30 s后靜置3 min。

（6）將孵育器載架蓋合準確計時5 min后，將檢測卡取出插入讀數儀1 min內判讀結果。

（7）統計讀數結果，采用Excel軟件進行整理分析。

1.4 霉菌毒素參考標準

判定標準依據《飼料衛生標準》（GB13078—2017）進行，參考標準見表1。根據不同毒素檢測試劑盒檢出限，當樣品毒素濃度超過最低檢出限判定為陽性，即檢出。根據《飼料衛生標準》（GB 13078—2017）上不同霉菌毒素對粗飼料的最高限量為參考，超過最高限量即為超標。

2 結果與分析

2.1 青儲飼料AFB1污染情況

由表2可知，羊場采集的43份樣品中AFB1的陽性樣品有2份，占比4.7%。其中全株玉米青貯8份樣品中有1份樣品檢出AFB1，檢出率為12.5%，陽性最高值為2.4 μg/kg；玉米秸稈青貯的檢出率為16.6%，陽性最高值為1.9 μg/kg。所有被檢測樣品的AFB1含量均未超標，在安全范圍內。

2.2 青儲飼料ZEN污染情況

由表3可知，采集的43份樣品中蠶豆殼（秧）、大蒜皮（秧）、油菜殼（秧）、花生秧、碗豆秧、小麥秸稈、全株小麥青貯、全株玉米青貯和青貯玉米秸稈中ZEN的陽性樣品數為19份，占比44.2%。其中蠶豆殼（秧）的檢出率為33.3%，陽性最高值為10 μg/kg；大蒜皮（秧）的檢出率為50.0%，陽性最高值為10 μg/kg；油菜殼（秧）的檢出率為75.0%，陽性最高值為20 μg/kg；花生秧的檢出率為14.3%，陽性最高值為20 μg/kg；碗豆秧的檢出率為100.0%，陽性最高值為30 μg/kg；小麥秸稈樣品中未檢出ZEN；全株小麥青貯檢出陽性最高值為50 μg/kg；全株玉米青貯的檢出率為50.0%，陽性最高值為390 μg/kg；玉米秸稈青貯的檢出率為66.7%，陽性最高值為80 μg/kg。所有被檢測的樣品的ZEN含量均未超標，在安全范圍內。

2.3 羊場青儲飼料DON污染情況

由表4可知，采集的43份樣品中蠶豆殼（秧）、大蒜皮（秧）、油菜殼（秧）、花生秧、碗豆秧、小麥秸稈、全株小麥青貯、全株玉米青貯和青貯玉米秸稈中DON的陽性樣品數為9份，占比20.9%。其中油菜殼（秧）的檢出率為25.0%，陽性最高值為200 μg/kg；小麥秸稈的檢出率為50.0%，陽性最高值為720 μg/kg；全株玉米青貯的檢出率為50.0%，陽性最高值為500 μg/kg；玉米秸稈青貯的檢出率為50.0%，陽性最高值為380 μg/kg。所有被檢測的樣品的DON含量均未超標，在安全范圍內。

2.4 青儲飼料霉菌毒素污染情況

由表5可知，在檢測的43份樣品中，AFB1的檢出率為4.7%，陽性平均值為2.15 μg/kg，陽性最高值為2.4 μg/kg，ZEN的檢出率為44.2%，陽性平均值為52.70 μg/kg，陽性最高值為390 μg/kg，DON的檢出率為20.9%，陽性平均值為345.10 μg/kg，陽性最高值為720 μg/kg，3種霉菌毒素的超標率為0。即ZEN是部分羊場青儲飼料霉菌毒素的首要風險因子，DON次之，同時要重點關注全株玉米青貯、玉米秸稈青貯的霉菌毒素殘留。

3 結論與討論

在對羊場的43份飼料及飼料原料調查中發現，AFB1、ZEN和DON的霉菌毒素檢測出陽性的樣品數分別占比4.7%、44.2%和20.9%。這表明部分羊場青儲飼料受到霉菌毒素污染，且部分樣品同時被兩種及以上的霉菌毒素污染。賈紀萍等[14]對飼料和飼料原料中霉菌毒素監測分析報告表明，以飼料衛生標準5 mg/kg為標準，植物性飼料原料的超標率為0。王慶偉等[15]對飼料及飼料原料霉菌毒素的調查結果顯示，部分地區青儲飼料陽性率較高，但陽性均值都低于20 μg/kg。張欣昕等[16]對浙江省青儲飼料中霉菌毒素殘留檢測分析，得出飼料中ZEN檢出率最高，本研究結果中，ZEN的檢出率為44.2%，超標率為0。趙巍等[17]的研究表明，AFB1和DON在同一農場不同月份之間有明顯的差異，特別是DON，最高和最低月份之間的差異為2.65 mg/kg。本試驗中，DON的檢出率為20.9%，超標率為0。但本試驗沒有對比不同月份采集的樣品中霉菌毒素污染情況差異，尚需進一步研究確認。

本研究中，玉米秸稈青貯的AFB1、ZEN和DON的檢出率分別為16.6%、66.7%和50%，說明玉米秸稈青貯較易受霉菌毒素污染，為以青貯玉米秸稈為原料的飼料提供參考。霉菌毒素污染受溫度、濕度等環境因素影響較大，暖溫帶半濕潤季風氣候，夏季炎熱且雨水充沛，有利于霉菌毒素的繁殖[18-20]，導致霉菌毒素檢出率高。為了降低霉菌毒素的污染，在青貯前后應采取適當的抑菌措施[21]。霉菌毒素主要污染玉米、小麥、大米和大麥等谷物，樣品中全株玉米青貯、全株小麥青貯和玉米秸稈青貯3類粗飼料受污染最嚴重，原因在于青貯飼料中水分含量高，營養物質豐富，易被霉菌及其毒素侵染[22]。因此在這類飼料利用時要特別注意，避免出現毒素含量超標。部分地區在玉米收獲后采用自然風干方法，糧倉設計簡單，儲藏條件不受控制，霉菌毒素的積累會隨著儲藏時間的延長而增加[23]。在實際生產中，為保障飼料安全，應注意適時采收，合理貯藏，合理使用添加劑抑制霉菌毒素的生成。同時可針對性地使用霉菌毒素吸附劑，建立霉菌毒素的檢測和監督機制[24-25]。飼料處理方式、運輸和其他相關過程可能會導致霉菌毒素的產生，由多種原料加工而成的飼料受污染概率相對較大[26]。霉菌毒素之間的協同作用使得霉菌毒素污染的預防和控制變得更加重要[27]。

對部分羊場青儲飼料霉菌毒素含量的檢測表明，霉菌毒素在青儲飼料中存在輕微侵染現象，收集的43份樣品中3種霉菌毒素均未超標。部分羊場青儲飼料質量安全性總體較好，但仍有潛在的衛生安全隱患，需要重視青儲飼料的加工制備及貯藏管理。

參考文獻

[1] HASSAN M Z，RAHMAN M M，ALI M Z，et al. An overview of mycotoxin contamination of animal feeds[J]. Bangladesh journal of livestock research，2020：1-9.

[2] 王曉敏，常娟，王平，等. 黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素的累加細胞毒性研究[J]. 中國飼料，2021（9）：98-101.

[3] ?OLOVI? R，PUVA?A N，CHELI F，et al. Decontamination of mycotoxin-contaminated feedstuffs and compound feed[J]. Toxins，2019，11（11）：617.

[4] 李民，孔祎頔，張雷，等. 飼料中黃曲霉毒素B1的毒性機制研究進展[J]. 飼料工業，2022，43（8）：54-58.

[5] 魏姜勉. 飼料中黃曲霉毒素檢測及其對牛奶品質的影響[J]. 中國飼料，2021（22）：69-73.

[6] 馬利霞. 飼料中黃曲霉毒素B1的檢測方法研究進展[J]. 現代畜牧獸醫，2023（2）：74-78.

[7] BENKERROUM N. Chronic and acute toxicities of aflatoxins：mechanisms of action[J]. International journal of environmental research and public health，2020，17（2）：423.

[8] 馬浩海，袁正寧，劉靜，等. 黃曲霉毒素B1對動物危害作用研究[J]. 中國畜禽種業，2022，18（11）：3-8.

[9] 王向明，劉則學. 飼料原料中嘔吐毒素靶向降解的研究進展[J]. 廣東飼料，2023，32（2）：37-42.

[10] TWARU?EK M，SKRZYDLEWSKI P，KOSICKI R，et al. Mycotoxins survey in feed materials and feedingstuffs in years 2015–2020[J]. Toxicon，2021，202：27-39.

[11] 王蒙，陳金男，葉金，等. 免疫磁珠高通量自動凈化-超高效液相色譜法快速測定飼料中玉米赤霉烯酮[J]. 中國糧油學報，2023，38（9）：29-34.

[12] 劉林，王昕璐，趙海平，等. 天然酚類化合物對嘔吐毒素誘導毒性損傷保護作用的研究進展[J]. 食品安全質量檢測學報，2023，14（13）：211-220.

[13] 寧春妹，安佳秀，趙穎，等. 玉米赤霉烯酮對動物繁殖性能的毒性作用及其機制[J]. 動物營養學報，2023，35（4）：2166-2174.

[14] 賈紀萍，張杰，陳曉蘭，等. 飼料及動物源性食品中霉菌毒素檢測及防霉脫霉技術研究進展[J]. 中國飼料，2023（2）：9-12.

[15] 王慶偉，安綱，王金勇，等. 2019年中國飼料與原料霉菌毒素檢測報告[J]. 飼料工業，2020，41（24）：52-57.

[16] 張欣昕，張福金，張堯，等. 中國青貯玉米中霉菌毒素的污染情況分析與動物健康風險評估[J]. 中國畜牧獸醫，2021，48（12）：4451-4459.

[17] 趙巍，王蘭惠，甄玉國，等. 2020年國內玉米青貯霉菌毒素普查報告[J]. 中國乳業，2021（8）：56-59.

[18] 鄭會超，胡斌，王海青，等. 貯存溫度影響全株青貯玉米有氧劣變的速度和程度[J]. 糧食與飼料工業，2023（3）：41-45.

[19] 張麗媛，包美麗，包海林，等. 淺談青貯飼料中霉菌毒素的產生和預防措施[J]. 中國微生態學雜志，2022，34（10）：1238-1241.

[20] 沙珊珊，胡瑋琪，黃渤舒，等. 青貯飼料中霉菌毒素的產生、毒性作用及脫毒研究進展[J]. 中國飼料，2021（3）：83-88.

[21] WEAVER A C，WEAVER D M，ADAMS N，et al. Co-occurrence of 35 mycotoxins：a seven-year survey of corn grain and corn silage in the United States[J]. Toxins，2021，13（8）：516.

[22] VANDICKE J，DE VISSCHERE K，AMEYE M，et al. Multi-mycotoxin contamination of maize silages in Flanders，Belgium：monitoring mycotoxin levels from seed to feed[J]. Toxins，2021，13（3）：202.

[23] 黃媛. 青貯方式對全株玉米飼料品質及霉菌毒素的影響[D]. 貴陽：貴州大學，2022.

[24] 雷元培，周建川，鄭文革，等. 2019—2020年中國飼料原料和飼料中霉菌毒素污染調查報告[J]. 飼料工業，2022，43（20）：59-64.

[25] 吳映欣. 兩種霉菌毒素AFB1與T-2對PK15細胞和小鼠肝腎毒性及氧化應激的研究[D]. 長沙：湖南農業大學，2021.

[26] MUELLER D，WISE K，SISSON A，et al. Corn yield loss estimates due to diseases in the United States and Ontario，Canada，from 2016 to 2019[J]. Plant health progress，2020，21（4）：238-247.

[27] 劉青玉，李瑞銀，鄒松巖，等. 霉菌毒素吸附劑對西門塔爾育肥牛瘤胃發酵指標及微生物區系的影響[J]. 飼料研究，2023，46（1）：1-5.

（責編：李 媛）