一氧化氮合酶抑制劑減輕哮喘模型小鼠氣道炎性反應(yīng)

王 斐，李文軒，丁俊瓊，劉 珍，王曉明，楊 菊，王大連*

復(fù)旦大學(xué)附屬上海市第五人民醫(yī)院 1.兒科；2.病理科，上海 200240

哮喘(asthma)是一種慢性變應(yīng)性炎性氣道疾病，由多種炎性細(xì)胞、氣道結(jié)構(gòu)細(xì)胞及細(xì)胞組分參與，伴有氣道高反應(yīng)性[1]。一氧化氮(nitric oxide, NO)是哮喘氣道炎性反應(yīng)的特征性分子之一[2]。NO通過形成毒性活性氮(reactive nitrogenspecies, RNS)可能促進(jìn)氣道炎性反應(yīng)及損傷[3]。一氧化氮合酶(nitric oxide synthase, NOS)是NO的重要來源，有3種類型：誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)、內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide syn-thase, eNOS)和神經(jīng)型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase, nNOS)[4]。目前關(guān)于NOS抑制劑是否能改善哮喘尚未完全明了，本研究擬通過建立小鼠哮喘模型探討NOS抑制劑在哮喘中的治療作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物: 50只SPF級雌性BABL/c小鼠，4～6周齡，體質(zhì)量12～16 g(北京斯貝福生物技術(shù)有限公司)。所有動物已獲得復(fù)旦大學(xué)實驗動物科學(xué)部動物福利和倫理小組批準(zhǔn)(動物倫理審查編號：2018五院JS003)。

1.1.2 主要試劑：卵清蛋白(ovalbumin, OVA)、氫氧化鋁、S-甲基異硫脲硫酸鹽(S-methyl isothiourea sulfate, SMT)和N-硝基-L-精氨酸甲酯(N-nitro-L-arginine methyl ester, L-NAME)(Merck公司)；NG-單甲基-L-精氨酸(NG-monomethyl-L-arginine, L-NMMA)(Thermo Fisher公司)；白細(xì)胞介素2(IL-2)、白細(xì)胞介素4(IL-4)、白細(xì)胞介素17(IL-17)和腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒(BD公司)；一氧化氮檢測試劑盒、蘇木精染液和伊紅染液(上海碧云天生物技術(shù)有限公司)。

1.2 實驗方法

1.2.1 小鼠的分組及處理：將小鼠隨機(jī)分為對照組(n=10)和模型組(n=40)。用OVA霧化吸入致敏激發(fā)制作哮喘模型小鼠。實驗第1、7、14天將小鼠一次性腹腔注射OVA混懸液2 mL(OVA 100 mg，氫氧化鋁100 mg)以致敏，休息1周，第22天起，以 2% OVA溶液按最大霧化量進(jìn)行超聲霧化，小鼠自然吸入40 min，誘發(fā)哮喘，每天1次，共持續(xù)7 d。以煩燥、撓鼻、抓身、咳嗽、噴嚏、呼吸急促深快及點頭運(yùn)動等癥狀的出現(xiàn)，并利用小動物氣道阻力和肺順應(yīng)性檢測系統(tǒng)來驗證。……