Herkinorin預處理減輕缺血性卒中模型大鼠腦損傷

宋婉晴，李俊發，崔 旭*

1.首都醫科大學附屬北京同仁醫院 麻醉科，北京 100730；2.首都醫科大學 神經生物學系，北京 100069

腦缺血/低氧損傷是缺血性卒中常見的病理生理過程，發病率、致死致殘率高, 目前臨床上仍缺乏有效的治療方法[1]。缺血/低氧預處理(ischemic-hypoxia preconditioning，I/HPC)是指在短時間內給予機體亞致死性缺血/低氧刺激后，可顯著提高機體對繼發嚴重缺血/低氧事件耐受性的方法。

I/HPC可以用藥物預處理促進內源性物質釋放或作用于信號通路來模擬。Herkinorin作為半合成阿片受體激動劑，可通過調節短暫性大腦中動脈阻塞(transient middle cerebral artery occlusion，tMCAO)致缺血性卒中小鼠腦皮層半影區內蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)膜轉位水平，來發揮腦保護作用[2-3]。早期研究顯示，Herkinorin通過抑制NF-κB/NOD樣受體蛋白3(NOD-like receptor protein 3，NLRP3)通路，減輕氧-糖剝奪(oxygen-glucose deprivation，OGD)神經元缺血損傷[4]。本研究擬在大鼠tMCAO模型上，進一步探討Herkinorin對NLRP3的調節作用及其可能機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物：SPF級SD大鼠，體質量 200～220 g，雌雄各半 [南京大學動物模式中心提供，動物合格證號：SCXK(蘇)2015-0001]。

1.1.2 實驗試劑：Herkinorin、TTC染液(Sigma-Aldrich公司)；蛋白抽提試劑盒(Sangon公司)；PVDF膜(0.45 μm，Millipore公司)；TUNEL染色試劑盒、細胞凋亡試劑盒(南京凱基生物科技發展有限公司)；GAPDH抗體、IL-1β抗體、NLRP3抗體、p-p65抗體和p65抗體(Abcam公司)；β-抑制蛋白2(β-arrestin2)抗體、IκBα抗體、phos-IκBα抗體、Na-K ATPase抗體和caspase-1抗體(CST公司)。

1.2 方法

1.2.1 大鼠的分組及處理：采用隨機數字表法，將大鼠分為假手術組(sham)、模型組(tMCAO)、Herkinorin組(Herkinorin)，每組6只。模型(tMCAO)組及Herkinorin組大鼠進行造模處理-左側大腦中動脈阻塞2 h后再灌注24 h。Herkinorin組大鼠造模前腹腔給藥Herkinorin(10 mg/kg)1周，每天1次，缺血過程中給藥1次，sham組及tMCAO組給予等體積1% DMSO。再灌注24 h后，對所有大鼠進行神經功能評分、TTC染色、TUNEL染色、Western blot檢測和免疫共沉淀(co-immunoprecipitation，Co-IP)。……