miR-767-5p通過調(diào)控TBL1XR1蛋白表達(dá)抑制人卵巢癌細(xì)胞系侵襲

冷海娜，張 艷，王曉棟，張學(xué)友，李洪利

1.濰坊市婦幼保健院 婦科，山東 濰坊 261000；濰坊醫(yī)學(xué)院 2.生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院； 3.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，山東 濰坊 261000

卵巢癌(ovarian cancer)是發(fā)生于卵巢或輸卵管的上皮細(xì)胞癌，是女性第七大常見癌和第八大常見癌死亡原因，5年生存率低于45%[1]。每年卵巢癌確診的病例數(shù)量仍不斷增加，因此探索卵巢癌發(fā)生發(fā)展的過程，尋找相關(guān)的分子靶標(biāo)尤為重要。

微小RNA(microRNA，miRNA)是一類長度約為20個(gè)核苷酸的小分子RNA，已有報(bào)道證實(shí)miRNA可通過調(diào)節(jié)靶基因或者受其他非編碼RNA調(diào)控發(fā)揮作用[2]。本研究選擇的miR-767-5p已被證能影響膠質(zhì)瘤、肝癌和胃癌等腫瘤進(jìn)展[3]，但在卵巢癌中的研究尚未見報(bào)道。

轉(zhuǎn)導(dǎo)素β1X連鎖受體蛋白1(transducin beta-like 1 X-linked receptor,TBL1XR1)與轉(zhuǎn)導(dǎo)素β1(TBL1)家族蛋白具有高度同源性[4]。TBL1XR1在細(xì)胞增殖、凋亡、炎性反應(yīng)和轉(zhuǎn)錄激活中發(fā)揮重要作用，目前相關(guān)的研究主要集中在TBL1XR1在癌進(jìn)展中的作用及機(jī)制[5]。例如TBL1XR1可通過PI3K/AKT途徑誘導(dǎo)胰腺導(dǎo)管腺癌細(xì)胞增殖并抑制細(xì)胞凋亡[6]；TBL1XR1經(jīng)miR-186-5p負(fù)調(diào)控從而促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞的遷移和侵襲[7]。

綜上所述，miR-767-5p與TBL1XR1在卵巢癌進(jìn)展中可能發(fā)揮重要功能，但其作用機(jī)制尚不明確，亟待進(jìn)一步探究和闡明。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)胞：人卵巢癌細(xì)胞系OC3、SKOV-3、HO-8910、人正常卵巢上皮細(xì)胞系IOSE80，實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞購自ATCC(American type culture collection)，細(xì)胞均已通過細(xì)胞檢測。

1.1.2 試劑：β-actin、TBL1XR1抗體(Abcam公司)；反轉(zhuǎn)錄試劑盒及SYBR Green real-time PCR Master Mix(杭州博日科技股份有限公司)；實(shí)驗(yàn)所用質(zhì)粒(上海吉?jiǎng)P基因醫(yī)學(xué)科技股份有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 收集數(shù)據(jù)庫中miR-767-5p及TBL1XR1相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行分組處理及進(jìn)一步分析：GEO(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/)； miRPATH(http://snf-515788.vm.okeanos.grnet.gr/)；miRDB(http://www.mirdb.org/)；TargetScan(http://www.targetscan. org/)；miRTarBase(http://mirtarbase.mbc.nctu. edu.tw/)；miRWalk(http://mirwalk.umm.uni-heidelberg.de/)；Open Target Platform(https://www.targe-tvalidation.org/)；THPA(https://www. proteinatlas. org/)；GEPIA(http://gepia.cancer-pku. cn/)；microT-CD(http://diana.imis.athena-innovation.gr/DianaTools/index.php?r=microT_CDS/index)。

1.2.2 細(xì)胞的培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染：將OC3、SKOV-3、HO-8910細(xì)胞、IOSE80細(xì)胞，置于5% CO2、37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)。……