地塞米松減輕過(guò)敏性哮喘模型小鼠氣道炎性反應(yīng)

劉 芬，胡潤(rùn)芳，茅 松，徐 敏，石文靜，陳 凌

上海交通大學(xué)附屬第六人民醫(yī)院 兒科，上海 200233

支氣管哮喘(bronchial asthma，哮喘)是臨床常見(jiàn)的慢性氣道炎性疾病，且患病率逐年上升，盡管治療方案不斷更新，但哮喘總體控制水平不容樂(lè)觀，這與對(duì)哮喘氣道炎性反應(yīng)認(rèn)知不足密切相關(guān)。近年，炎性小體與哮喘的研究受到越來(lái)越多關(guān)注，尤其含NLR家族PYRIN域蛋白3(NLR family，pyrin domain containing protein 3，NLRP3)炎性小體，其參與多種炎性疾病病理過(guò)程[1-2]。研究發(fā)現(xiàn)，哮喘小鼠肺組織NLRP3表達(dá)顯著增加，并且高表達(dá)NLRP3下游因子IL-1β[3]，表明NLRP3/IL-1β信號(hào)通路在哮喘氣道炎性反應(yīng)中可能發(fā)揮重要作用。吸入性糖皮質(zhì)激素(inhaled corticosteroids，ICS)是哮喘治療的主要藥物，但其作用機(jī)制尚未完全明確。為此本實(shí)驗(yàn)旨在研究地塞米松(dexamethasone,DEX)抗炎作用是否與其抑制NLRP3/IL-1β信號(hào)通路有關(guān)，為哮喘治療提供新的方向。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：6～8周齡SPF級(jí)雌性BALB/c小鼠，體質(zhì)量16～18 g[上海市計(jì)劃生育科學(xué)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物經(jīng)營(yíng)部，生產(chǎn)許可：SCXK(滬)2018-0006]，飼養(yǎng)于單位動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心屏障系統(tǒng)內(nèi)。

1.1.2 主要試劑：卵清蛋白(ovalbumin，OVA)、氫氧化鋁、地塞米松、醋甲膽堿(Sigma-Aldrich公司)；IL-5、IL-6、TNF-α、IL-18和IL-1β ELISA試劑盒(eBioscience公司)；Rat Anti-Mouse NLRP3抗體、Goat Anti-Mouse IL-1β抗體(R&D公司)。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物的分組及處理：將小鼠隨機(jī)分為3組，每組6只動(dòng)物。哮喘組(OVA組)：參考文獻(xiàn)[4]建立哮喘模型，實(shí)驗(yàn)第0、7、14天皮下注射20 μg OVA、1 mg氫氧化鋁混合液致敏，第21、22天以1% OVA混懸液霧化吸入激發(fā)20 min；地塞米松組(DEX組)：在OVA組基礎(chǔ)上，于每次霧化吸入前3 h腹腔注射地塞米松(2 mg/kg)；對(duì)照組(Ctrl組)：于相同實(shí)驗(yàn)節(jié)點(diǎn)給予同等劑量PBS進(jìn)行皮下注射、腹腔注射或霧化吸入等處理。

1.2.2 小鼠氣道高反應(yīng)性(airway hyperresponsiveness，AHR)的檢測(cè)：末次霧化結(jié)束后，采用小鼠有創(chuàng)肺功能儀測(cè)定小鼠氣道反應(yīng)性。……