激活素A通過少突膠質細胞ACVR1C改善缺血性卒中小鼠神經功能的預后

李雨喋，王宏宇，韓 松，李俊發(fā)

首都醫(yī)科大學 神經生物學系，北京 100069

卒中是由于腦局部血管突然破裂或阻塞導致血液不能流入供應腦區(qū)，而引起腦組織損傷的一種腦血管疾病，其中缺血性卒中占總卒中的75%～80%[1-2]。缺血性卒中發(fā)生時，白質損傷發(fā)生在多個部位，包括髓鞘、少突膠質細胞、星形膠質細胞和軸突[3]。

在缺血性卒中發(fā)展過程中，炎性反應、氧化應激和興奮性毒性會誘發(fā)的神經元死亡，而激活素A通過參與一系列細胞信號調節(jié)支持皮層神經元的存活[4-5]。前期研究發(fā)現，激活素A還可以通過其ACVR1B/1C有效促進缺血性卒中鼠白質再髓鞘化過程，并改善神經功能預后[6]。在此基礎上，利用大腦中動脈閉塞/再灌注(middle cerebral arterial occlusion-reperfusion, MCAO/R)模型，注射腺相關病毒構建條件性基因敲除小鼠，進一步明確激活素A通過ACVR1C是作用于少突膠質前體細胞還是作用于少突膠質細胞來發(fā)揮其改善缺血性卒中鼠神經功能預后的作用。

1 材料與方法

1.1 材料和試劑

實驗動物為無特定病原體級8周齡，體質量20～24 g成年雄性Acvr1cflox/flox小鼠，上海漢恒生物科技有限公司提供，首都醫(yī)科大學倫理委員會審查和批準(許可證編號：AEEI-2020-144)。重組小鼠激活素A(20.65 mg/L，R&D System 公司)、兔源單克隆抗體MBP(1∶1 000, Cell Signaling Technology公司)、兔源多克隆抗體ACVR1C(1∶300，Proteintech公司)和兔源β-actin 單克隆抗體(1∶10 000, Proteintech 公司)購自標注公司。

1.2 方法

1.2.1 小鼠分組及ACVR1C條件性敲除小鼠構建：將小鼠分為空病毒載體假手術組、腺相關病毒(adeno-associated virus，AAV)假手術組、空病毒載體模型組、AAV模型組、空病毒載體激活素A組、AAV激活素A組。無特定病原體級Acvr1cflox/flox小鼠委托上海漢恒生物科技有限公司構建，在首都醫(yī)科大學實驗動物中心擴增繁育。……