丹參酮ⅡA減輕高糖誘導的小鼠足細胞系PMC-5凋亡和氧化應激反應

張夢瑤，牛 姝，蔡 靜，張立香，趙志剛*

1.石家莊市人民醫院 內分泌二科，河北 石家莊 050000；2.河北醫科大學附屬第二醫院 心內科，河北 石家莊 050000

糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病的一種慢性并發癥，多數糖尿病患者患有DN[1-2]。目前，DN的發病率仍在上升[3]。DN發生的分子機制尚未清楚。據報道，足細胞損傷發生在DN的早期階段，從而觸發腎功能損害并導致蛋白尿的發生[4]。因此，迫切需要找到一種治療高糖(high glucose，HG)誘導的足細胞損傷的有效方法。

許多膳食植物化學物質可用于抑制DN，如丹參酮ⅡA(tanshinone ⅡA，Tan ⅡA)可通改善鏈脲佐菌素誘導的DN[5]。Tan ⅡA是一種從丹參中分離出的化學物質，具有抗氧化、抗炎等多種藥理作用[6]。然而，Tan ⅡA用于治療DN的證據仍然有限。

研究證實，Tan ⅡA可通過激活沉默信息調節蛋白1(silent information regulator 1，SIRT1)/內皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)通路緩解過氧化氫誘導的血管內皮細胞衰老[7]。因此，推測Tan ⅡA可能通過激活SIRT1/eNOS通路對HG誘導的足細胞損傷發揮保護作用。本研究擬用HG誘導小鼠足細胞(MPC-5細胞)損傷模型，探索Tan ⅡA對氧化應激和細胞凋亡的保護作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細胞:永生化小鼠足細胞系MPC-5細胞(上海雅吉生物科技有限公司)；

1.1.2 試劑及試劑盒:Tan ⅡA(分析標準品，純度≥99%，上海阿拉丁試劑有限公司)；胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)(HyClone公司)；重組小鼠干擾素-γ(interferon-γ，IFN-γ)(Prospec公司)；RPMI-1640培養基[愛必信(上海)生物科技有限公司]；CCK-8試劑盒和Annexin-FITC/PI凋亡檢測試劑盒(Dojindo公司)；SIRT1抑制劑Sirtinol(純度：≥98.0%)(MedChemExpress公司)。RIPA裂解液(北京YITA公司)；BCA蛋白質定量試劑盒(Thermo Fisher Scientific公司)；抗-Bcl-2，、Bax，抗體、裂解的caspase-3、p-SIRT1、p-eNOS和GAPDH以及辣根過氧化物酶偶聯的第二抗體(Cell Signaling Technology公司)；增強型ECL化學發光試劑盒(Vazyme公司)；……