過表達miR-210抑制H2O2誘導大鼠BM-MSCs成脂分化

封寶紅，喻業安，晏 莉，伍 軍，張艷霞，朱戈麗

武漢大學附屬武漢市第三醫院 腎內科, 湖北 武漢 430014

骨髓間充質干細胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BM-MSCs)具有多向分化潛能，但在老年期，BM-MSCs更多地向脂肪細胞分化，可引起骨形成減少，進而導致老年性骨質疏松癥[1]。目前關于BM-MSCs成脂分化相關的分子機制尚不明確，因此，探究該機制對于老年性骨質疏松癥的治療具有重要意義。研究表明，H2O2可用于誘導BM-MSCs分化，且多種miRNA參與調控H2O2誘導的BM-MSCs分化，如miR-183-5p在H2O2誘導的BM-MSCs中高表達，過表達miR-183-5p可抑制BM-MSCs成骨分化[2]。過表達miR-210可促進犬BM-MSCs向成骨方向分化[3]。此外，miR-210可參與緩解H2O2誘導產生的氧化應激損傷，改善心肌功能[4]。本研究旨在探討miR-210對H2O2誘導的BM-MSCs成脂分化的影響以及可能的機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物：SPF級雄性SD大鼠[廣州銳格生物科技有限公司，生產許可證號為SCXK(粵)2021-0059]，所有動物實驗均遵循3R原則且得到武漢市第三醫院動物倫理委員會的批準(ZACUC20210421-14)。

1.1.2 主要試劑：30% H2O2(上海澤葉生物公司)；過氧化物酶體增殖物激活受體γ(peroxisome proliferatior-activated receptor，PPARγ)、CCAAT/強子結合蛋白α(CCAAT enhancer binding protein，C/EBPα)抗體(Santa Cruz公司)；抗CD29-FITC、CD44-FITC、CD45-PE-Cy5.5、CD90-PE流式抗體、兔源一抗β-連環蛋白(β-catenin)、c-Myc、細胞周期蛋白 D1(cyclin D1)、GAPDH及辣根過氧化物酶標記的羊抗兔二抗(Abcam公司)。

1.2 方法

1.2.1 BM-MSCs的分離、培養[5]：采用頸椎脫位法處死大鼠，分離股骨并暴露骨髓腔，用DMEM低糖培養基反復吹打骨髓腔，將含有骨髓的培養基加入到離心管中，1 000 r/min心10 min，棄上清，將獲得細胞在37 ℃、含有5% CO2培養箱中培養，倒置顯微鏡觀察細胞生長情況。

1.2.2 流式細胞測量術檢測BM-MSCs表面抗原：取匯合度90%的P3代BM-MSCs，經消化、PBS洗滌后，1 000 r/min離心10min，棄上清，調整細胞為1×106個/mL，分為……