上調miR-200c-5p的表達抑制人結直腸癌細胞系SW480增殖

王芳芳，曹慧媛，汪 婧，王 寧，黃國良

廣東醫科大學中美腫瘤所 東莞市表觀遺傳學重點實驗室 廣東醫科大學附屬東莞第一醫院廣東省醫學分子診斷重點實驗室，廣東 東莞 523808

結直腸癌是消化道最常見的惡性腫瘤之一，全球范圍來看結直腸癌(colorectal cancer, CRC)的發病率和病死率呈逐年上升趨勢[1]，在中國，結直腸癌的發病率和病死率在所有癌中分別位居第3位和第5位[2]，嚴重威脅中國人民的身體健康以及國民經濟的發展。因此，迫切需要進一步研究結直腸癌發生發展的分子機制，尋找結直腸癌新的診斷和治療靶點。

MicroRNAs(miRNAs)是19～25 nt的短RNA分子, 可調節靶基因的轉錄后表達[3]。miRNA是基因表達的關鍵調節因子，在生物標志物的開發中具有前景。目前，處于臨床前開發階段的miRNA模擬物(mimic)和miRNA抑制劑(inhibitor)有望成為新的治療藥物[4]。miR-200家族是miRNA家族之一，由miR-141/200a/200b/200c/429組成，參與調控細胞轉化、增殖和耐藥性等許多重要的生物學過程[5-6]。本研究通過瞬時轉染miRNA模擬物和miRNA抑制劑觀察高低表達miR-200c-5p對人結直腸癌細胞系SW480增殖的影響。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

人結腸癌細胞系SW480(上海蓋寧生物公司)；胎牛血清、RPMI-1640培養基(Gibco公司)；含EDTA的0.25%胰蛋白酶消化液(吉諾生物公司)；RT-qPCR主要試劑：RNA-easy(南京諾唯贊公司)；TB GREEN MIX、逆轉錄試劑盒(TaKaRa公司)；CCK8試劑(ZETA公司)；miR-200c-5p引物、U6引物、miR-200c-5p模擬物/抑制劑及陰性對照物(廣州銳博生物公司)；Lipofectamine 3000(Invitrogen公司)。

1.2 方法

1.2.1 細胞的分組及轉染: SW480在含有10%胎牛血清(FBS)的1640培養基中保存。細胞系置于5% CO2培養箱，保持在37 ℃環境下培養。選擇對數增殖期的細胞接種于6孔細胞培養板，當細胞貼壁匯合度達70%時，按照制造商的說明使用Lipofectamine 3000進行轉染，培養箱中放置48 h后取出收集樣品用于后續實驗轉染miRNA模擬物和抑制劑。……