抗CCP抗體和抗MCV抗體對類風濕性關節炎診斷價值的評價

曹燁,李蕾,韓菲菲,張曉峰△（.南京醫科大學附屬無錫兒童醫院,江蘇 無錫 403;.南京醫科大學附屬無錫人民醫院,江蘇 無錫 403）

類風濕性關節炎（RA）是一種臨床上十分常見的骨關節損傷全身性自身免疫疾病，是由于機體免疫系統攻擊關節組織所致，臨床癥狀表現為外周關節系統性的慢性炎癥性疾病，患病關節及關節周圍組織呈持續性破壞，經常會導致受損關節產生功能障礙，容易致殘，是目前導致人類殘疾的主要因素之一[1]。我國人群發病率約為0.32%-0.36%，RA患病2年以內便可能出現不可逆的受累骨關節壞死，因此早發現早治療對于類風濕性關節炎患者緩解病情及預后來說具有重大的意義。

長期以來，臨床診斷RA主要是靠X射線、臨床經驗和血清中類風濕因子（RF）檢測等[2]，作為主要實驗室指標的RF是1987年ARA制定的RA分類標準中唯一被采用的實驗室指標，由于其敏感度很高，一直沿用至今，現在大多數醫院仍然用RF作為RA的實驗室診斷指標，然而RF在其他自身免疫性疾病比如結締組織病、慢性感染性疾病和一些健康人中常呈現陽性，特異度較低。

為了滿足臨床對類風濕關節炎早期診斷和與其他骨關節疾病鑒別診斷的需要，必須探尋到特異度和靈敏度都優于RF的實驗室檢測指標。近年來，研究人員發現病人的血清里面含有類似于RF多種自身抗體，比如抗環瓜氨酸肽抗體（抗CCP抗體）和抗突變型瓜氨酸波形蛋白抗體（抗MCV抗體）。文獻顯示，抗CCP抗體在類風濕性關節炎的診斷中具有相當高的敏感度和特異度，而且在RA疾病早期便可在血清中出現，對早期類風濕性關節炎診斷有很高價值[3]，此外，抗CCP抗體還可作為RA病人是否發生骨侵蝕的一個預測指標，用于判斷RA的預后和療效觀察[4]；也有研究報道認為抗MCV抗體對RA的診斷價值更高，在RA早期即可出現，并且與RA活動性相關[5]。目前，這兩個項目的檢測在國內正在逐步得到推廣，現把我科開展的這兩項RA新型標志物的檢測臨床應用價值進行探討，具體報道如下。

1 材料和方法

1.1 臨床資料 RA患者組：選擇南京醫科大學附屬無錫人民醫院風濕免疫科2020年7-12月收診的RA患者142例（男31例，女111例），年齡20-84歲，平均56.5歲。按2010年美國風濕病學會（ACR）修訂的類風濕性關節炎分類標準，采用（DAS28）評分法，即臨床觀察、記錄腫脹關節數和壓痛關節數，將活動期RA分為低度活動組（n=35）、中度活動組（n=50）及重度活動組（n=57）三組。

非RA疾病對照組：選取同期風濕免疫科收診的伴有關節不適或疼痛癥狀確診非RA的其他疾病患者75例（男12例，女63例），年齡26-82歲，平均49.9歲。病種包括：指骨關節病、痛風性關節炎、結締組織病、退行性關節病、SLE等。所有入組病例均符合各自的疾病診斷標準。

上述各研究組均排除各種肺、胸膜感染、肺出血、肺水腫、腫瘤等疾病及長期吸煙者。

1.2 標本采集 采取各研究組受試者清晨空腹靜脈血5ml于含分離膠的采血管中，室溫自然凝固后，以3500r/min的轉速離心10分鐘分離血清，吸入離心管加蓋密封，標記后置于-20℃低溫冰箱中保存待測。

1.3 測定方法和陽性界值的設定 將所有標本檢測兩種抗體：抗CCP抗體采用CLIA法，使用深圳亞輝龍生物科技公司YHLO iFlash 3000化學發光免疫分析儀器和配套試劑；抗MCV抗體測定采用ELISA法，試劑盒由德國ORGENTEC公司提供，BIO-RAD公司iMarkTM Microplate Reader酶標儀讀板檢測，操作嚴格按實驗室SOP執行，室內質控保證儀器在控，結果可信。界值的設定參照試劑盒說明書和實驗室ROC數據研究，以抗CCP抗體≥5U/ml和抗MCV抗體≥20U/ml為各自的陽性參考值。

1.4 統計學處理 采用SPSS21.0統計學軟件進行數據分析，依據兩種標志物陽性參考值標定所有研究對象的定性檢測結果，計算各研究組的陽性例數及陽性檢出率，使用四格表法分析兩種抗體對RA診斷的敏感度、特異度、陽性預測值、陰性預測值以及各自的總符合率。

2 結果

2.1 各研究組抗CCP抗體、抗MCV抗體的陽性檢出率 以抗CCP抗體≥5U/ml和抗MCV抗體≥20U/ml為陽性cut off值，對兩種標志物的陽性（+）、陰性（-）的檢出情況分6種模式統計，見表1。表2為根據表1的數據計算的兩種標志物在各研究組的陽性檢出率。

表1 抗CCP抗體、抗MCV抗體結果陽性的統計表(n)

表2 抗CCP抗體、抗MCV抗體的陽性檢出率統計[n(%)]

從表1、表2可以看出，在35例RA低度活動組中兩種標志物均有25例呈陽性，陽性檢出率均為71.4%（25/35）；50例RA中度活動組抗CCP抗體陽性檢出率為94.0%（47/50），而抗MCV抗體有45例陽性，檢出率也高達90.0%（45/50）；在57例RA重度活動組里，僅有1例抗CCP抗體陰性，其余病例兩種抗體全部呈陽性。不難看出，隨著RA活動性加重，抗CCP抗體、抗MCV抗體的陽性率呈逐漸增加的趨勢。

75例非RA疾病對照組里有2例同時檢出2種標志物陽性，2例單純抗MCV抗體陽性，本組抗CCP抗體和抗MCV抗體陽性率均較低，分別為2.7%（2/75）、5.3%（4/75）。

2.2 兩種標志物對RA診斷價值分析 所有142例RA病例共檢出128例抗CCP抗體陽性，127例抗MCV抗體陽性，參考對照組檢出的結果，統計兩種RA標志物的靈敏度、特異度、陽性預測值、陰性預測值以及所有病例的總符合率，見表3。從表中數據很容易看出，抗CCP抗體和抗MCV抗體兩種RA標志物，對于RA的診斷不僅都具有很高的靈敏度，而且還有更高的特異度。所有病例中，抗CCP抗體的總符合率為92.6%，抗MCV抗體總符合率為92.2%。

表3 抗CCP抗體、抗MCV抗體及聯合檢測對RA診斷價值的比較

3 討論

類風濕因子（RF）作為RA實驗室主要診斷指標應用已經有數十年，雖然靈敏度高，但特異度很差，在其他風濕性疾病例如系統性紅斑狼瘡（SLE）、干燥綜合征（SS）、結締組織病（CTD）等自身免疫性疾病，甚至多種感染性疾病與正常人的血清里也都可以檢測到RF，“綜合靈敏度”甚至高達76.5%[6]，其過高的假陽性常使臨床難以做出鑒別診斷。

抗CCP抗體是一種自身抗體，早在1998年Schellekens GA[7]等人報道通過人工合成CCP，最早建立了抗CCP抗體的酶聯免疫吸附法（ELISA）檢測系統，并用此方法研究發現抗CCP抗體對RA患者靈敏度為68%，特異度為98%。戴偉良[8]、陸俊忠[9]等人分別研究顯示抗CCP抗體在RA疾病的早期就可以出現陽性，甚至在出現臨床癥狀前就可以檢出，且抗CCP抗體陽性的RA早期病人較陰性者更容易發展成侵襲性的疾病。國外學者[10-11]報道稱，血清抗CCP的升高程度與RA疾病活動性相關，并在預測初診RA患者3年后疾病的活動情況中，抗CCP的臨床價值優于RF。筆者通過對確診病人的回顧性研究，發現抗CCP抗體在RA的診斷中靈敏度、特異度、陽性預測值、陰性預測值分別為90.1%、97.3%、98.5%和83.9%，疾病嚴重程度由輕到重檢出率呈升高趨勢，表明抗CCP抗體血清濃度與RA病人疾病活動性有密切關系，隨病情活動性的加重而呈逐級升高的趨勢，是一個高度靈敏、高度特異的RA標志物。

波形蛋白是細胞骨架的一種重要成分，炎癥時由巨噬細胞分泌并被瓜氨酸化，形成瓜氨酸波形蛋白（MCV），在細胞凋亡的過程中不能被清除而刺激機體免疫系統產生一種自身抗體即抗MCV抗體。Mansour[5]等人報道抗MCV抗體對RA診斷靈敏度為79.6%，特異度為96.6%，且抗MCV抗體陽性的RA患者的DAS28和關節SEN評分明顯高于抗MCV抗體陰性患者。李旭旭[12]等人研究認為抗MCV抗體與RA患者骨侵蝕及疾病活動性高度相關，并總結了近年國內外的相關研究，均認為抗MCV抗體還對RA疾病嚴重程度判斷和治療效果預測具有重要的價值[13]。本研究中142例RA各級患者抗MCV抗體靈敏度和特異度分別高達89.4%、94.7%以及92.2%的總診斷符合率，充分表明抗MCV抗體在RA臨床診斷和鑒別診斷中的重要價值。

CCP和MCV化學結構上都有瓜氨酸這一相同的抗原決定簇，所以抗CCP抗體和抗MCV抗體兩者在RA血清中檢測結果具有較高的一致性，217例研究病例中有202例結果一致，占比93.1%。兩種標志物對RA的診斷都具有極高的靈敏度和特異度，價值基本相當，由于方法學的因素，二者具有一定的互補性，同時聯檢可以進一步提高靈敏度，適合各級醫院根據檢驗科設備情況選擇性地開展，彌補單純依賴RF實驗室診斷特異性差的不足，這可以幫助臨床醫生及時對RA病人做出診斷和鑒別診斷，早期發現RA病人與潛在病人，盡早做出干預，減緩RA患者的病情進展，使RA疾病對患者的傷害降到最低。