梅毒血清學檢測方法研究和應用進展

陳天譽

廣西賀州市皮膚病防治醫院 廣西 賀州 542899

梅毒是梅毒螺旋體（TP）感染誘發的性傳播疾病，患病后會對機體造成損傷，個人、家庭、社會均會受到危害。當前，臨床對梅毒的診斷需綜合對患者的病史進行考慮，結合臨床表現與實驗室測定數據。但梅毒的臨床表現比較復雜，由于TP病原學檢測因實驗室條件的限制，故梅毒血清學試驗是診斷的主要依據。最近幾年，由于現代免疫學與分子生物學的迅速發展，使TP的血清免疫學實驗室測定方式與技術獲得了不斷深化與發展。先天梅毒的診斷主要憑借實驗室測定，因測定抗體是IgG抗體，能夠由母體通過胎盤，無形中會干擾先天梅毒的診斷。在免疫學與分子生物學技術的發展與完善下，諸多實驗室血清學測定方式的聯合應用，能夠使梅毒的診斷敏感度與特異性提高。現就梅毒血清學測定方式展開綜述。

1 傳統梅毒血清學實驗

人體感染TP后，一方面宿主會對感染損傷的局部組織發生免疫應答，出現非特異性心磷脂類抗體，另一方面宿主對TP外膜脂蛋白等抗原也會產生免疫應答，產生抗TP抗原的特異性抗體。所以，梅毒血清學實驗有：非TP抗原血清學試驗、TP抗原血清學試驗。

1.1 非TP抗原血清學試驗 性病研究實驗室實驗（VDRL）是美國在1946年建立，用實驗室名命名。需用顯微鏡對結果進行讀取，當前臨床應用較少，主要用在檢測腦脊液標本，能夠科學診斷梅毒。快速血漿反應素環狀卡片試驗（RPR）應用的抗原是特制活性炭顆粒吸附抗原，用肉眼觀察白色紙板上有黑色凝集顆粒出現時會影響結果判斷[1]。甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST），是用脂質抗原經染色和血清中抗體反應后產生的紅色凝集顆粒，能夠肉眼觀察。

1.2 TP抗原血清學試驗 梅毒螺旋體血凝試驗（TPHA），是由睪丸中提取TP并純化，用Nichols株TP充當抗原，測定血清中抗TP-IgG。由于抗原制備成本高，提純難度大，漸漸被TP-PA替換。梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TPPA），反應原理同TPHA，敏感性與特異性均在提高，是臨床確證試驗的常用方式[2]。

1.3 熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS） 抗原用完整的Nichols株充當，在待測血清中添加吸收劑，除去待測血清中可能存在的非特異抗體，加入熒光素標記的抗人免疫球蛋白IgG，如血清中含有TP抗體會形成抗原抗體復合物，在熒光顯微鏡下呈現對應的熒光。當前，該試驗將其作為診斷梅毒的“金標準”[3]。但操作比較復雜，需熒光顯微鏡方能對實驗結果進行證實，普通實驗室尚未開展。非TP抗原血清試驗由于梅毒甲苯胺紅不加熱血清試驗診斷試劑（TRUST，國藥準字：S10940058）便宜，操作便捷，敏感性高，能夠迅速對結果進行報告，常在常規實驗中應用，能夠作為定量實驗，對再感染與療效進行判斷。

2 近年來新開展的梅毒血清學實驗

2.1 TP-IgM抗體測定 人體感染TP大約2周后，先會產生IgM型TP抗體，4周產生IgG型TP抗體。特異性IgM類抗體的產生是感染梅毒后機體首先產生的體液免疫應答。經治療，IgM抗體會轉陰，再次感染會轉陽，所以IgM是梅毒早期感染的血清學指標[4]。最近幾年，又開發出TP-IgM抗體的測定方法，此項試驗能夠用在早期梅毒的診斷，臨床療效的觀察與梅毒再次感染的判斷，對梅毒的診斷意義深遠。IgM抗體分子量大，母體IgM抗體無法通過胎盤，若新生兒血清中TP-IgM為陽性則表示已受感染[5]。另外，梅毒的診治中容易遇到僅TPPA是陽性，RPR陰性或二者均為陽性，但RPR滴度＜1:4的患者，特別是老年人與欲懷孕的婦女是否存在傳染性等問題，用傳統的方式難以衡量，測定IgM抗體能夠提供參考價值。若此類人群的TP-IgM抗體以陰性反應呈現，表示基本無傳染性。若測定血清中有TP-IgM抗體，表示患者近期有感染，具有傳染性。

2.2 TP重組抗原血清學試驗

2.2.1 免疫印跡技術（WB）

TP-WB為上世紀末研發的聯合免疫學與分子生物學新技術，是將TP純化抗原轉移至制備的纖維膜條上，和待測血清反應后用酶標記抗人IgG測定，如：待測血清中存在抗TP分子量15000,17000,42000、47000特異抗原抗體時，添加酶底物/色原物質反應后，可于印跡上對應的特異性多肽抗原部位產生色條帶[6]。這項試驗一般不會出現假陽性，特異性較強，敏感度高，能夠用于測定IgM型抗體對先天梅毒進行診斷[7]。雖然WB試劑盒價格高于其余幾種梅毒特異性抗體，但這種方法是當前最理想的測定梅毒的方式。還有研究得出，47000抗原抗體區帶于WB測定中展現，能夠作為早期梅毒的診斷指標。治療后15500與17000蛋白抗體變化顯著，作為觀察療效的指標。

2.2.2 TP酶聯免疫吸附試驗（ELISA）

TP-ELISA使用純化基因重組梅毒螺旋體TP47，特異性抗原包被微孔板上，用雙抗原夾心法對TP特異性抗體進行測定，辣根過氧化物酶標記的TP抗原夾心法測定血清中梅毒特異性抗體，能夠對TP的IgG類或IgM類抗體進行測定。TP-ELISA靈敏度、特異性與TPPA接近，能夠用在篩查與確認試驗中，比較適合大批量樣本檢查[8]。

3 分子生物學研究進展

3.1 PCR方法 現存的基因檢測方法主要有常規聚合酶鏈式反應法（PCR），PCR能夠直接檢查梅毒螺旋體特異性基因片段，特異性與敏感性均較強，對早期梅毒的測定以及對再感染和復發的判斷價值較高[9]。當前PCR檢測TP主要的靶基因中以TP47、polA特異性較高，但存在的不足是所用儀器比較特殊，較梅毒甲苯胺紅不加熱血清試驗診斷試劑（TRUST，國藥準字：S10940058）盒成本較高，對操作人員有較高要求，應用存在一定局限，當前只能充當血清學方法的補充方式[10]。

3.2 基因分型系統 TP基因分型系統是梅毒分子流行病學最重要的研究方法，上世紀90年代末，美國學者Pillay提出TP分型方式，將高度異質性的酸性重復蛋白基因（arp）、梅毒螺旋體重復基因家族（tpr）充當目的基因，對兩種基因均開展普通PCR擴增，產物會由Mse I限制性酶切與瓊脂糖凝膠電泳分離后，取得的目的片段聯合即是完整的TP基因型別，對經組織培養的Nichols株對結果進行驗證，用Simpson多樣性指數分析數據展現，此分型和方法比較符合一般基因分型系統的評判依據，數據比較穩定，具有良好的可重復性，分辨率高[11]。但當前用于分型的標本依然來源于潰瘍性皮損，標本多數來自男性患者，女性患者生殖器潰瘍難以發現，會使分型數據代表性有偏差。其二，部分標本由于DNA含量低下，血液標本敏感性較低，無法分型，需進一步研究基因在分型系統中的穩定性[12]。

3.3 免疫層析技術（ICA） ICA是發展成熟的體外快速診斷方法，是以基因工程生產的重組TP外膜蛋白是包被與標記抗原，當待測樣本中TPIgG/IgM在模條上標記的特應性抗原反應，復合物經模條毛細血管層析后，對顯色帶的顯色情況進行觀察判斷是否有感染TP的存在，測定成本較低，迅速方便，適合批量大的篩查[13]。有研究用重組抗原TPN17、TPN47創建免疫層析方式，以FTA-ABS為準，結果展現敏感性99.38%，特異性99.96%。還有研究用ELISA對118份樣本進行測定，測定陽性符合率為85.20%，有一定漏檢率，存在一定假陰性，可能是因“前帶現象”引起，所以ICA能夠作為梅毒抗體測定的輔助性方式，用于ELISA檢測陽性結果的確認[14]。但是，ICA無法區分近期感染與已治療的梅毒，容易出現假陽性反應，陽性數據需做試驗確定。

小結

梅毒對人體的危害甚大，甚至會威脅到生命，及時的診治十分重要。雖然檢測梅毒的技術較多，但這些診斷技術尚不夠成熟，依然處在探索階段，實驗方式的進展不僅要從技術上能夠提高血清學診斷敏感性、準確性、特異性，特別是對滴度變化的監測，自動化測定系統能夠減少人為性錯誤。但是，當前尚未有一種方法能夠滿足梅毒的診斷，療效的觀察，全部的測定方法均處在特殊的范圍內，僅用單一的梅毒甲苯胺紅不加熱血清試驗診斷試劑（TRUST，國藥準字：S10940058）診斷局限性較大，容易漏檢。最近幾年用基因工程重組TP外膜蛋白可對抗原進行測定，如：TPELISA與免疫層析技術在臨床應用較廣，但TP重組抗原無法覆蓋全部的TP抗原成分，無法完全測定全部的梅毒抗原，且特異性和TPPA、FTAABS、TPHA依然有一定差異，所以對梅毒的確診需按國家制定的衛生行業標準為依據。

梅毒血清學試驗是檢查梅毒的主要依據，但不是唯一依據，醫生需在掌握患者病史的基礎上結合梅毒的檢驗數據，將假陰性與假陽性排除，正確做出治療與判定。由于梅毒是比較嚴重的疾病，當前的診斷方法依然有不足之處，需進一步完善修正。