瀏陽市規模羊場小反芻獸疫流行情況和抗體水平分析

趙琴，楊輝* ，席旭晴，張建超，李敏，王承義，陳功，聶厚湘，唐建如，陳濤

（1.湖南省瀏陽市農業農村局 長沙 410300；2.河北省固安縣農業農村局 河北廊坊 065500）

小反芻獸疫（peste des petis ruminants，PPR）是由副粘病毒科麻疹病毒屬的小反芻獸疫病毒（peste des petis ruminants virus，PPRV）引起的，以發熱、口炎、腹瀉、肺炎為特征的急性接觸性傳染病，山羊和綿羊易感，但山羊發病率和病死率均較高，易感羊群發病率通常達60%以上，病死率可達50%以上，特急性、急性病死率高達100%，目前尚無有效的治療方法。世界動物衛生組織（OIE）將其列為法定報告動物疫病，我國將其列為一類動物疫病。

2007 年，PPR 首次傳入我國西藏阿里地區，自2013 年底起，全國多個省份均發生PPR。近期，以色列、蒙古國、阿爾及利亞、利比亞等境外國家陸續發現羊群感染小反芻獸疫，而我國西北方西藏自治區、新疆維吾爾自治區、青海省等地也陸續發現多起小反芻獸疫，雖然都及時按照有關預案和當地要求開展疫情處置工作，但仍給養殖戶造成了不可挽回的損失。近年來，瀏陽市通過強制免疫、監測、調運監管等綜合措施使得該病得到有效控制。為評估2021 年的PPR 流行情況和抗體水平，瀏陽市動物疫病預防控制中心對轄區內部分規模羊場進行抽檢，對其采集的樣品開展病原學和血清學的檢測。現將檢測結果分析如下。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

2021 年8 月，瀏陽市動物疫病預防控制中心隨機選取了轄區內存欄50 只以上的規模羊場41 家，采樣地點覆蓋瀏陽市4 個分區，采集樣品共2,160 份，其中羊眼-鼻拭子樣品1,352 份，血清樣品808 份，所有樣品采集至實驗室后立即置于-20℃保存，備檢。

1.2 實驗器材

熒光定量PCR 儀，核酸提取儀，電熱恒溫培養箱，12 道移液器，單道移液器、離心機、酶標儀、純水儀、冰箱、生物安全柜等。

1.3 檢測試劑及方法

小反芻獸疫檢測參照國標規定方法（GB/T 27987-2011）。小反芻獸疫病毒單重熒光PCR 檢測試劑盒來源于北京億森寶生物科技有限公司；小反芻獸疫競爭ELISA 抗體檢測試劑盒來源于中國農業科學院蘭州獸醫研究所。檢測步驟及判定標準均按照各項目試劑盒說明書執行。

2 結果與分析

2.1 總體情況

本次共檢測存欄50 只以上的規模羊場41 家，涵蓋瀏陽市東西南北4 個片區，累計檢測樣品2,160 份次，其中眼-鼻拭子樣品病原學檢測1,352 份次，均未檢出PPRV 核酸陽性，血清學檢測808 份次，整體抗體水平為60.02%。

2.2 場點分布情況

從場點的統計結果來看，在10 個被抽檢的鄉鎮中，有8 個鄉鎮的小反芻獸疫抗體水平高于農業農村部最低標準70%，其中西區和北區的羊場抗體水平均已達標，不達標的羊場分布在東區的小河鄉和南區的中和鎮。

表1 各鄉鎮小反芻獸疫抗體水平檢測結果

3 小結與討論

3.1 血清學檢測結果分析

從本次小反芻獸疫的專項檢測結果來看，各鄉鎮的小反芻獸疫免疫抗體水平參差不齊，整體水平低于農業農村部的最低標準70%，僅有60.02%，80%的鄉鎮抗體效價達標，2 個鄉鎮存在多家羊場抗體水平遠低于70%的情況。根據瀏陽市2021 年重大動物疫病免疫效果評估的檢測結果，5 月PPR 的抗體檢測評估結果為97.63%，11 月抗體檢測評估結果為93.79%，本次檢測時間為8月，介于兩個時間節點之間，抗體水平整體呈現下降的情況，分析其原因，可能是由于7—8 月尚未開展小反芻獸疫的免疫接種工作，免疫期限已過或尚未進行補免，從而導致機體內的小反芻獸疫的抗體水平較低。

3.2 病原學檢測結果分析

按照瀏陽市小反芻獸疫監測計劃要求，每年在春季和秋季各進行一次集中監測，常規監測根據各鄉鎮（街道）實際情況進行計劃。目前，在湖南省、長沙市等上級部門的統一部署下，全省將逐步推行PPR 退出強制免疫的工作。2021 年2 月份在永安鎮某養羊戶從外市交易市場調入的羊群出現過小反芻獸疫可疑病例，已迅速按照當地動物疫情防控要求將病羊及同群羊18 只實施強制撲殺和無害化處理，全場內外進行全面大消毒和墊料、廢棄物等的無害化處理，及時消除疫情擴散風險，同時組織對該養殖戶周邊3km范圍內所有羊只進行小反芻獸疫緊急免疫。現從本次病原學的檢測結果來看，盡管PPR 的整體抗體水平僅為60.02%，但并未檢測出PPRV 核酸陽性，由此可見該市轄區內的小反芻獸疫疫病防控成效較好。

3.3 小反芻獸疫診斷技術分析

目前，除采用GB/T 27982-2011《小反芻獸疫診斷技術》規定的臨床癥狀和病理變化進行診斷外，還包括很多其他的病原學和血清學的診斷方法，其中病原鑒定主要有以下幾種：①電鏡觀察法。根據病毒粒子的形態特征和大小等特點使用電鏡技術進行觀察而進行的診斷，此方法對儀器設備和技術人員的要求都較高，臨床上較為少用；②病毒培養法。通過采集發病羊只的病料，選擇急性期或具有明顯臨床癥狀的眼-口鼻試子、淋巴結組織或血液等樣品，使用羔羊原代腎細胞或VERO 細胞、綿陽上皮細胞等進行分離培養，此方法所需時間較長，適用于對小反芻獸疫病毒進行更加深入的研究；③瓊脂凝膠免疫擴散試驗（AGID）和對流免疫電泳（CIEP）法。通過分離樣品中的病毒上清與標準抗血清之間的抗原抗體特異性反應檢測病毒抗原的一種方法，CIEP 的靈敏度高于AGID；④間接免疫熒光抗體試驗（IFAT）法。該方法要具有病毒特異性單抗的條件才可開展檢測，可對羊只發病初期和后期的病料進行檢測并作出快速的鑒別診斷；⑤夾心酶聯免疫吸附試驗（sELISA）。1994 年Jeremiah 等利用病料組織中含有PPRV 粒子，通過捕獲抗體和特異性檢測抗體建立的一種夾心ELISA 方法；⑥核酸識別法（PCR）。基于病毒的核酸序列進行檢測，針對病毒特異性的N、F、P 基因建立的PCR 和qPCR 檢測方法，能快速、靈敏并特異的對病毒的存在進行檢測，而qPCR 不僅可以判斷樣品中是否存在病原污染，還能通過熒光探針和模板特異性結合由儀器采集熒光信號達到定量的目的，對病毒的豐度進行研究。而血清學鑒定的方法主要包括中和實驗和競爭酶聯免疫測定法（cELISA）。中和試驗的敏感性和特異性較好，但耗時較長、操作較為復雜，不適合大規模的樣品檢測。cELISA 的使用較為廣泛，主要是利用PPRV核蛋白（N）單克隆抗體來構建的一種酶聯免疫吸附法，用來檢測血清中是否含有PPR 的抗體，若存在，則會與單抗競爭性結合病毒蛋白表位，快速的檢測樣品中是否存在PPR 抗體。

3.4 關于小反芻獸疫疫病防控的幾點建議

①多管齊下抓實疫情風險排查和監測預警。進一步加強對規模養殖場、農貿市場和大型超市銷售攤位等重點場所的監測范圍和力度，同時督導落實消毒滅原、生物安全體系建設、應急處置等綜合防控措施，嚴防病毒在各環節交叉污染，尤其要截斷病毒從其他環節向養殖場戶的傳播途徑；②多方聯動抓強動物衛生監督和執法監管。建議市、鎮兩級農業執法機構切實加強與公安、市場監督等執法單位的協同互動，建立聯合打擊違規調運、私屠濫宰、隨意丟棄病死動物等不法行為的常態化機制，完善相關有獎舉報制度，強化體制機制保障；③多措并舉抓細防控技術培訓和督查指導。各鄉鎮（街道）要切實加強動物疫病防控相關政策、生物安全知識、消毒滅原技術規范等方面的宣傳普及，在養殖密集區、農貿市場銷售區等實行“小區域單元格式”防控，嚴格落實“風險排查+重點監控”“隔離防護+消毒滅原”等措施。

3.5 小結

瀏陽市位于湘東山地丘陵地區，牧草資源較為豐富，全市年出欄二十余萬只，養殖規模化不高，大部分為散養養殖，圈牧混合為主，管理粗放，養殖環境一般，養殖戶疫病防控意識較差，缺乏良好的生物安全條件。雖然小反芻獸疫檢測陽性情況較為罕見，但該病的防控意識不可松懈，各級動物疫病防控人員要進一步提高認識，做好各級生物安全防控，根據實際情況合理制定免疫計劃，免疫后定期做好抗體水平監測，實時觀察動物的臨床飼養情況，有效降低疫情發生風險，提高養殖效率。