利用氯前列烯醇鈉誘導(dǎo)乏情期母驢發(fā)情的研究

李澤廷 ，蘇少鋒 ，喬健敏 ，馬躍軍 ，賈曉清 ，趙俊利 ，白晉宇 ，張 玲 ，孫培陪 ，吳海青 *

（1.內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010031；2.內(nèi)蒙古草原御驢科技牧業(yè)有限公司，內(nèi)蒙古呼和浩特 010041）

乏情期母驢幾乎沒有發(fā)情表現(xiàn)，其卵泡發(fā)育停止，但多數(shù)有黃體存在。Quaresma等[1]對非繁殖季節(jié)母驢的卵巢進行監(jiān)測時發(fā)現(xiàn)，在冬季母驢的卵巢上仍會有連續(xù)的明顯的卵泡波活動，但大部分卵泡直徑小于18 mm，偶爾可出現(xiàn)大于25 mm的卵泡。未發(fā)現(xiàn)優(yōu)勢卵泡和排卵現(xiàn)象，僅有個別母驢出現(xiàn)發(fā)情表現(xiàn)。同樣，在非繁殖季節(jié)，絕大部分馬有黃體存在，但不再出現(xiàn)大卵泡，中卵泡的數(shù)量也較少，而小卵泡數(shù)量較多。張國庭等[2]采用以B超檢測法為主、外觀鑒定法為輔的方式來判斷驢是否發(fā)情，全年跟蹤觀察母驢卵泡發(fā)育情況和發(fā)情行為表現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)約有6%的母驢在3月份開始發(fā)情，有96%以上的驢在5—6月份開始發(fā)情，在7—8月份高溫時節(jié)約有70%的母驢發(fā)情，11月份以后母驢幾乎不發(fā)情。因此，若想讓乏情期母驢發(fā)情，需借助外源激素刺激其卵泡發(fā)育或黃體溶解。

哺乳動物卵巢黃體的存留對母畜生殖活動具有重要作用。前列腺素F1α(PGF2α)是哺乳動物的主要溶黃體因子，通過與其受體結(jié)合，可激活一系列早期反應(yīng)基因，進而誘導(dǎo)黃體出現(xiàn)功能性（孕酮水平下降）和結(jié)構(gòu)性退化（細胞程序性死亡）[2-3]。氯前列烯醇是一種有機物，為PGF2α類似物，在常用的PGF2α及其類似物中的活性最高。氯前列烯醇對母畜的妊娠黃體、持久黃體有明確的溶解作用，可調(diào)節(jié)母畜的發(fā)情周期。還可特異性興奮子宮，對子宮平滑肌有明顯的舒張作用[4-5]。PGF2α通過血液循環(huán)被運送至生殖系統(tǒng)，使卵巢上的功能黃體迅速溶解，黃體的溶解可引發(fā)孕酮分泌量驟減。血液內(nèi)孕酮含量的降低能通過負反饋的形式向下丘腦發(fā)出信號，解除其對GnRH分泌的抑制。GnRH分泌可以促進垂體分泌FSH和LH，F(xiàn)SH和LH進入血液并抵達卵巢后可促進卵泡發(fā)育進而促使母畜發(fā)情。Spergel等[6]發(fā)現(xiàn)，在黃體期類固醇類激素主要限制GnRH的脈沖頻率，而其對垂體的影響作用較小。這也反向證實了溶解黃體降低孕酮量可以促進卵泡發(fā)育。

1 材料與方法

1.1 母驢的選擇

2021年11月，在驢的乏情期選擇空懷母驢94頭用于試驗。母驢品種為三粉驢。所有母驢均為經(jīng)產(chǎn)驢，無繁殖疾病、無發(fā)情表現(xiàn)，營養(yǎng)、環(huán)境條件一致，體重相近，約為260 kg。

1.2 B超檢查

用B超儀檢查母驢卵泡發(fā)育情況及黃體存在情況，并詳細記錄黃體存在的位置。

1.3 黃體的處理及監(jiān)測

于母驢臀部肌肉注射CS注射液 （寧波第二激素廠，0.2 mg/2 mL/支）。注射1支CS后48 h進行B超直腸檢查，根據(jù)記錄了解試驗驢的黃體溶解情況。若黃體還存在，則再注射1支CS。96 h后用B超儀檢查卵巢黃體情況：若黃體消融，則定期用B超儀檢測卵泡發(fā)育情況；若黃體未消融，則繼續(xù)注射1支CS，144 h后再次檢測黃體溶解情況；若3次注射CS后黃體仍未溶解，則將該驢淘汰。選擇有或無黃體的、未進行任何藥物處理的母驢各10頭作為對照，B超跟蹤檢測卵泡及黃體情況。

1.4 優(yōu)勢卵泡發(fā)育監(jiān)測

對黃體溶解的母驢定期用B超儀檢查卵泡發(fā)育情況，每2天用B超儀直腸監(jiān)測卵泡發(fā)育情況1次，并記錄優(yōu)勢卵泡的發(fā)育時間。

1.5 排卵監(jiān)測及配種

于母驢配種前用B超儀觀察優(yōu)勢卵泡排出情況，配種方法為子宮內(nèi)人工輸精。輸精量為20 mL，精子數(shù)約為5×108個。輸精位置為宮頸口內(nèi)約10 cm處。每天輸精1次直到排卵為止。

1.6 早期孕檢

母驢配種排卵后18 d進行B超早孕檢查，統(tǒng)計受胎率。對照組為同年5—6月間驢場B超孕檢統(tǒng)計的受胎率。

2 結(jié)果與分析

2.1 黃體及卵泡發(fā)育情況

在實施CS處理前對母驢進行B超直腸檢查，94頭母驢中有79頭卵巢存在黃體；15頭卵巢存在卵泡，其中有2頭存在優(yōu)勢卵泡，如表1所示，卵泡直徑分別為24 mm和26 mm。

表1 試驗驢黃體及卵泡發(fā)育情況

2.2 CS促進母驢黃體溶解的效果

給79頭卵巢存在黃體的母驢注射CS，注射量為0.2 mg。48 h后出現(xiàn)黃體溶解的有38頭，占比為48.1%。注射0.4 mg CS，96 h后出現(xiàn)黃體溶解的有20頭，占比為25.3%。注射0.6 mg CS，144 h后出現(xiàn)黃體溶解的有16頭，占比為20.3%，如表2所示黃體溶解率為93.7%。另有5頭黃體始終未溶解，占比為6.3%。

表2 CS促進母驢黃體溶解情況

在對照組的有黃體存在的10頭母驢中，有1頭在144 h后出現(xiàn)黃體自然溶解。在10頭無黃體的母驢中有7頭表現(xiàn)為無優(yōu)勢卵泡發(fā)育。有3頭表現(xiàn)為優(yōu)勢卵泡發(fā)育且卵泡直徑分別達27、25和30 mm。

2.3 試驗?zāi)阁H優(yōu)勢卵泡發(fā)育監(jiān)測

注射CS促進黃體溶解后，優(yōu)勢卵泡的發(fā)育速度平均為（3.9±1.2）mm/d。無黃體的13頭母驢的優(yōu)勢卵泡的發(fā)育速度平均為（4.1±1.1）mm/d，結(jié)果如圖1所示。

圖1 注射CS促進黃體溶解后優(yōu)勢卵泡直徑的發(fā)育速度

排卵前卵泡最大直徑平均為 （39.4±5.2）mm，≥40 mm的占55%，≥35 mm且＜40 mm的占28%，≥30 mm＜35 mm的占17%，結(jié)果如圖2所示。

圖2 試驗?zāi)阁H排卵前卵泡最大直徑平均值

經(jīng) CS處理后，母驢平均排卵日數(shù)為（9.6±2.0）d。其中 9～12 d排卵的占 80.2%，5～8 d排卵的占19.8%，結(jié)果如圖3所示。

圖3 用CS處理母驢后排卵時間占比

2.4 早期孕檢

配種后18 d對92頭試驗?zāi)阁H進行B超孕檢，發(fā)現(xiàn)妊娠母驢41頭，受胎率為44.5%。對照組統(tǒng)計參配母驢數(shù)量為510頭，受胎229頭，受胎率為44.9%，結(jié)果如表3所示。

表3 試驗?zāi)阁H早期孕檢結(jié)果

3 討論

在乏情期誘導(dǎo)母驢發(fā)情對規(guī)模化驢場提高繁殖率具有重要意義。PGF2a類似物CS常被用于家畜的繁殖調(diào)控，其可有效溶解家畜黃體，促進卵泡發(fā)育，調(diào)整發(fā)情周期。

在北半球，驢與馬相近，多在每年的11月后進入乏情期[7]。作為PGF2α類似物的氯前列烯醇對母畜的妊娠黃體、持久黃體具有明確的溶解作用[8-10]。給黃牛一次性注射0.4 mg CS，在72 h內(nèi)有92%的母牛發(fā)情[11]。給水牛兩次使用CS，間隔11 d，總量為0.4 mg，可使同期發(fā)情率達到70%[12]。給育成牛一次性肌注0.4 mg CS，其發(fā)情率為56%[13]。采用間隔11 d兩次注射CS的方法對新疆本地牛進行同期發(fā)情處理，可使同期發(fā)情率達到77%[14]。在5—7月份，給有功能性黃體的母馬一次性注射0.6 mg CS，有78%的母馬在處理后5～8 d發(fā)情[15]。周晶謙[16]研究發(fā)現(xiàn)，給母驢分別肌肉注射0.2、0.4和0.6 mg氯前列烯醇對母驢黃體的溶解、排卵間隔沒有影響，這表明給母驢一次性注射0.2 mg氯前列烯醇就足以使其黃體消融，且排卵間隔不受劑量影響。但Carluccio等[17]的研究顯示，給母驢在排卵后第3天注射PGF2a，其血漿中孕酮水平下降不明顯，但在排卵后第6天注射則效果顯著。本研究發(fā)現(xiàn)，間隔48 h分兩次注射0.4 mg CS，黃體溶解率為73%，與上述用CS促進母牛發(fā)情的研究結(jié)果相近，但與周晶謙的研究結(jié)果差異較大[16]。本研究繼而觀察注射0.6 mg CS的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)黃體溶解率為94%，此與Carluccio等的研究結(jié)果相近[17]。這些證據(jù)直接或間接證明，母驢排卵黃體形成后起初對CS不敏感，須在6 d后注射氯前列烯醇才能有效溶解黃體。這種過早使用PGF2α未能加速發(fā)情和排卵的現(xiàn)象似乎與不完全的黃體溶解有關(guān)[18]。

黃體退化意味著哺乳動物開始新的發(fā)情周期。與本研究結(jié)果一致，利用外源PGF2a類似物溶解黃體后，可大幅縮短馬屬動物的發(fā)情周期[17-18]。母驢發(fā)情周期平均為21 d[19]。周晶謙研究發(fā)現(xiàn)，在母驢排卵后第3天注射0.4 mg CS可使排卵間隔縮短近一半[16]。Panzani研究發(fā)現(xiàn)，在排卵后第6天給予PGF2a可使母驢黃體完全溶解。與對照組[排卵間隔為（24.5±2.9）d]相比，PGF2a處理組的排卵間隔為（15±1.8）d，縮短了排卵時間。本研究通過多次隔天注射CS，顯著縮短了排卵時間，與前期統(tǒng)計的驢場母驢的平均排卵間隔24 d相比，平均縮短排卵時間14 d。