牛病毒性腹瀉的診斷及防控

郭曉萍，楊小虎

（巴彥淖爾市臨河區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，內(nèi)蒙古 巴彥淖爾 015000）

牛病毒性腹瀉(Bovine viral diarrhea，BVD)是感染牛病毒性腹瀉病毒 (Bovine viral diarthea virus，BVDV)所導(dǎo)致的一種接觸性傳染病[1-2]。該病的主要臨床特征為發(fā)熱、黏膜糜爛、白細(xì)胞數(shù)量減少及腹瀉等[3]。懷孕母牛感染后常出現(xiàn)流產(chǎn)、產(chǎn)死胎或畸形胎。該病致病機(jī)制復(fù)雜、傳染性強(qiáng)且傳播速度快，同時(shí)缺乏有效的治療手段，給養(yǎng)牛業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

1 病原學(xué)

BVDV屬于黃病毒科瘟病毒屬成員。成熟的病毒粒子在電鏡下呈直徑為40～60 nm的球形或圓形，內(nèi)含直徑為25～30 nm的核衣殼蛋白，外有囊膜包裹。BVDV病毒粒子耐堿不耐酸，pH值為3.0即可使其失活，但是當(dāng)pH值為5.7～9.3時(shí)，其性狀保持穩(wěn)定。此外，對(duì)有機(jī)溶劑乙醚、氯仿及蛋白酶也較為敏感。BVDV不耐高溫，56℃條件下1 h以上便可使其滅活。但對(duì)低溫有較強(qiáng)的耐受力，－70℃條件下能夠保存多年。根據(jù)基因的抗原性差異，通常將BVDV分為瘟病毒 A（BVDV-1）、瘟病毒 B（BVDV-2）和最新發(fā)現(xiàn)的Hobi樣瘟病毒（BVDV-3）3種類型。根據(jù)病毒感染細(xì)胞后是否產(chǎn)生細(xì)胞病變（CPE），將BVDV分為致細(xì)胞病變型（CP）和非致細(xì)胞病變型（NCP）兩種不同的生物型。兩種生物型引起的癥狀不同，CP型可引起細(xì)胞凋亡，對(duì)機(jī)體損傷嚴(yán)重，而NCP型在胎兒發(fā)育早期感染BVDV后形成持續(xù)性感染(persistent infection,PI)動(dòng)物，是牛病毒性腹瀉的主要傳染源。

2 流行病學(xué)

在我國(guó)牛病毒性腹瀉在冬春季發(fā)病率較高，且多呈地方性流行。各品種和年齡段的牛對(duì)BVDV都易感，6～18月齡的犢牛最容易感染發(fā)病，其中肉牛比奶牛的發(fā)病率高。牛是BVDV的自然宿主，越來越多的研究表明，豬、綿羊、山羊、鹿、駱駝及其他野生動(dòng)物也是BVDV的易感宿主[4]。

該病的傳播方式較多，包括接觸傳播、胎盤垂直傳播、種公牛精液帶毒后交配傳播、呼吸道和消化道傳播等，而野外反芻動(dòng)物感染的重要途徑則是吸血蟲媒介傳播。PI牛是該病的主要傳染源，PI牛終生帶毒，持續(xù)大量脫落的BVDV存在于全身分泌物中，包括鼻涕、唾液、精液及糞便等。BVDV的水平傳播途徑主要是直接或者間接地?cái)z入或接觸被病毒污染的物質(zhì)，主要包括受污染的飼料、水、機(jī)械設(shè)備及人員(包括獸醫(yī))等。有限的證據(jù)表明，蒼蠅和其他擅長(zhǎng)叮咬的昆蟲在BVDV的被動(dòng)傳播中也發(fā)揮著重要作用。

3 臨床癥狀

3.1 持續(xù)性感染型

持續(xù)感染是母牛在懷孕早期感染NCP型BVDV，胎牛的未成熟免疫系統(tǒng)尚未形成足夠的免疫應(yīng)答，在出生后就會(huì)攜帶BVDV。NCP型BVDV產(chǎn)生的非溶質(zhì)感染和逃避宿主免疫應(yīng)答的能力是持續(xù)性感染存在的主要機(jī)制[5]。部分感染牛不出現(xiàn)臨床癥狀，外觀呈健康狀態(tài)，但機(jī)體呈持續(xù)感染狀態(tài)，會(huì)感染許多正常牛只，嚴(yán)重影響牛的生產(chǎn)性能。PI牛終身帶毒且不斷向外界排毒，是BVD重要的傳染源，普通的診斷很難將其篩查出來。因此，很多國(guó)家把清除PI牛作為BVD凈化與防控的重點(diǎn)。

3.2 急性型

牛病毒性腹瀉急性型，又被稱為一過性感染（TI），犢牛和青年牛易感。牛病毒性腹瀉急性型發(fā)病率高，臨床表現(xiàn)較溫和，死亡率低。牛群感染發(fā)病后體溫呈雙相熱，伴有呼吸道與消化道感染及繁殖障礙。BVDV可感染胃腸道肌肉層和黏膜下層的神經(jīng)結(jié)，導(dǎo)致正常神經(jīng)功能被破壞，造成感染牛常出現(xiàn)腹痛且伴有不同程度的腹瀉，精神沉郁、生產(chǎn)性能降低，病情嚴(yán)重時(shí)可見血便，最后因急性脫水死亡。犢牛感染后死亡率增加，懷孕母牛感染后會(huì)發(fā)生流產(chǎn)、產(chǎn)木乃伊胎或PI牛。

3.3 黏膜型

黏膜型的特點(diǎn)是死亡率高，患病牛通常在出現(xiàn)臨床癥狀后1～2周內(nèi)死亡，尸檢顯示胃腸道不同部位的黏膜出現(xiàn)糜爛和潰瘍。黏膜型多發(fā)生于PI牛再次感染了CP型毒株之后，對(duì)病牛進(jìn)行病理剖檢可見明顯的黏膜潰爛[6]。通常分為急性黏膜型與慢性黏膜型。慢性黏膜型發(fā)病率低、死亡率高，且牛群中犢牛感染后死亡率較其他牛高。黏膜型BVDV病程較長(zhǎng)，感染牛食欲不振、精神沉郁、白細(xì)胞減少、消瘦、生產(chǎn)性能顯著下降，呈持續(xù)或間歇性腹瀉，糞便帶血，腸道黏膜受損嚴(yán)重。

4 診斷技術(shù)

4.1 免疫瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)

免疫瓊脂擴(kuò)散法是我國(guó)基層獸醫(yī)部門采用的一種普查手段，具有耗時(shí)少、可操作性強(qiáng)、節(jié)省資源等優(yōu)點(diǎn)。可選擇潰瘍或炎性組織的黏膜直接與陽性血清進(jìn)行抗原檢測(cè)，也可以取代被檢血清與標(biāo)準(zhǔn)抗原進(jìn)行抗體的檢測(cè)。陳茂盛等[7]通過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，采用瓊擴(kuò)散試驗(yàn)檢驗(yàn)BVDV的抗體，其結(jié)果與微量中和試驗(yàn)差異顯著。

4.2 病毒中和試驗(yàn)

病毒中和試驗(yàn)是流行病學(xué)調(diào)查十分有效的方法，廣泛應(yīng)用于BVDV的病原學(xué)檢測(cè)和血清學(xué)檢測(cè)。孟慶森[8]等為了解BVDV在國(guó)內(nèi)的流行情況，在全國(guó)共采集了451份犢牛血清樣品，用病毒中和試驗(yàn)檢測(cè)樣品中BVDV的抗體情況。結(jié)果顯示，從我國(guó)不同地區(qū)采集的血清樣品，BVDV陽性率參差不齊，最低為25.6%，最高可達(dá)91.9%，表明BVDV在我國(guó)流行較為嚴(yán)重。

4.3 免疫熒光技術(shù)

免疫熒光技術(shù)應(yīng)用范圍較廣，可以特異性檢測(cè)BVDV抗原、抗體。該技術(shù)包括直接免疫熒光技術(shù)和間接免疫熒光技術(shù)兩種。直接免疫熒光技術(shù)主要用熒光素耦聯(lián)抗BVDV的抗體對(duì)新鮮組織的冰凍切片或細(xì)胞進(jìn)行染色檢測(cè)；間接免疫熒光主要是把熒光素耦聯(lián)到二抗上，利用二抗種屬特異性進(jìn)行染色檢測(cè)，然后在熒光顯微鏡下觀察包漿中是否有熒光粒子出現(xiàn)，出現(xiàn)熒光粒子表明檢測(cè)樣品為陽性。該檢測(cè)技術(shù)結(jié)果可靠且特異性強(qiáng)，不足之處是價(jià)格較為昂貴，所需檢測(cè)抗原需要制備相應(yīng)的熒光標(biāo)記的抗體，這就要求配備熒光顯微鏡和觀察及記錄試驗(yàn)結(jié)果的相機(jī)[9]。

5 防控措施

5.1 提高日常飼養(yǎng)管理水平

定期對(duì)飼養(yǎng)環(huán)境進(jìn)行清理消毒，保持圈舍的干燥、清潔及通風(fēng)良好，冬春季采取防寒保暖措施，為牛提供一個(gè)舒適的生產(chǎn)環(huán)境，增強(qiáng)抵抗力，減少BVD的發(fā)生。此外，日常飼養(yǎng)過程中飼料配比要合理，以滿足牛的生長(zhǎng)發(fā)育需求，增強(qiáng)體質(zhì)，預(yù)防疾病的發(fā)生。

5.2 積極做好免疫接種工作

疫苗免疫成本低、有效性高，是預(yù)防動(dòng)物疫病的有效措施。BVD疫苗主要是通過刺激機(jī)體的B細(xì)胞和T細(xì)胞產(chǎn)生獲得性免疫來降低BVD的發(fā)病率。目前，國(guó)內(nèi)已經(jīng)研發(fā)了多種疫苗，如牛黏膜病弱毒疫苗、滅活疫苗，這對(duì)控制與消滅BVD起到了積極作用。

5.3 嚴(yán)格做好檢疫工作

定期對(duì)牛群進(jìn)行檢查，發(fā)現(xiàn)患病或者可疑牛只，及時(shí)進(jìn)行隔離，做到“早發(fā)現(xiàn)、早隔離、早淘汰”。對(duì)飼養(yǎng)環(huán)境進(jìn)行全面消毒，對(duì)健康牛群進(jìn)行緊急免疫，控制傳染源。對(duì)出現(xiàn)臨床癥狀的牛只盡快淘汰。堅(jiān)持自繁自養(yǎng)，確需引種時(shí)要進(jìn)行嚴(yán)格檢疫，確保完全健康方可進(jìn)行混養(yǎng)。

5.4 加強(qiáng)對(duì)PI牛的檢測(cè)

目前，全球多個(gè)國(guó)家采用的防控方案是檢出PI牛后，消滅或阻止它們返回牛群。在疫病早期階段，特別是犢牛出生后不久，檢測(cè)PI牛是較為高效的方式之一。