HtrA1基因敲除對小鼠葡萄糖代謝及胰島功能的影響

高新雨 倪嘉成 白寧寧 張 菁 高瓊媚 李華婷 楊 穎 方啟晨

隨著人民物質生活水平的提高，2型糖尿病患病率逐年增高[1]。胰島素分泌缺陷和胰島素敏感性減低是2型糖尿病發病的重要病理生理機制，其中胰島β細胞功能障礙為糖尿病發病的關鍵環節[2]。胰島是分布于胰外分泌部腺泡間的一種內分泌細胞團，高度血管化是其主要特征之一。胰島毛細血管為胰島提供充足的營養和氧氣，完善的血管功能維持對胰島存活和功能發揮起著極其重要的作用[3]。HtrA1(high temperature requirement protease A1)是一種在生物體各種組織中普遍存在的具有分泌特性的絲氨酸蛋白酶[4]，近年的研究發現其參與血管結構[5]及新生調控[6]。鑒于胰島血供對胰島功能維持的重要性，推測HtrA1缺失可能會對胰島功能產生影響。本研究旨在探討HtrA1基因敲除是否會影響小鼠胰島功能及糖代謝。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 動物飼養 C57BL/6J背景的HtrA1基因敲除小鼠購自日本Chio Oka教授實驗室(Nara Institute of Science and Technology)，于上海駿實實業有限公司無特定病原體(specific pathogen free，SPF)級動物房中進行繁殖培育。小鼠自由飲水和飲食，飼養環境溫度為22～24 ℃，維持12 h亮暗交替周期。本研究中涉及的動物實驗均已通過上海交通大學附屬第六人民醫院動物福利與倫理委員會的批準(倫理號為2017-0159)。

1.1.2 基因鑒定 小鼠2周齡時，提取鼠尾基因組DNA進行基因鑒定，提取試劑盒購自南京諾唯贊生物科技有限公司。HtrA1基因鑒定PCR引物序列：野生型(wild type，WT)上游引物為5’-ACG CTC CTG TCT TTG CTA CT-3’，下游引物為5’-TGT GCA CGC CGT CGT ACT GT-3’；HtrA1基因敲除型上游引物為5’-AAT GGG CTG ACC GCT TCC TCG TGC TT-3’，下游引物為5’-TGT GCA CGC CGT CGT ACT GT-3’。PCR產物片段長度分別為299bp和665bp。……