蒙藥材黑冰片的含氮量測定

邢界紅,岳景茁,劉慶玲

(內蒙古蒙藥股份有限公司,內蒙古 通遼 028000)

黑冰片是野豬糞的炮制加工品,其原標準缺少有效的含量測定控制指標。根據《中國藥典》2020年版四部0704氮測定法[1],通過試驗研究,建立蒙藥材黑冰片的含量測定方法,合理的控制該藥材的質量,保證其用藥安全及療效提供可靠的依據。

1 儀器與試藥

儀器:K9840自動凱氏定氨儀(山東海能科學儀器有限公司);電子天平(十萬分之一)。

試藥:硫酸鉀,硫酸銅,濃硫酸,鋅粒等為分析純。硫酸銨,為優級純(天津市科密歐化學試劑有限公司,批號20200719,含量≥99.5%)。

2 試驗方法與結果

2.1 試驗方法

濾紙稱取供試品粉末約0.5g,精密稱定,并連同濾紙置于消化管中;依次加入硫酸鉀5g和硫酸銅0.3g,再沿管壁緩緩加入硫酸10mL,把消化管放入石墨消解儀中(山東海能科學儀器有限公司),開始消解(參考320℃ 1h,400℃ 4h)至溶液成澄明的綠色后,再繼續消化30分鐘,取出,冷卻。

取堿液(40%氫氧化鈉溶液)、吸收液(2%硼酸溶液)及指示劑、稀釋水,分別置于蒸餾儀相應的瓶中,按要求將已冷卻的消化管裝入正確位置,關上安全門,連接水源,設定好加入試劑的量,堿液50mL、吸收液20mL和甲基紅-溴甲酚綠混合指示劑4滴及稀釋水20mL，蒸餾7min后,取出餾出液用硫酸滴定液(0.05mol/L)滴定至溶液由藍綠色變為灰紫色,并將滴定結果用空白試驗校正,按上述方法測定計算含氮量。每1mL硫酸滴定液(0.05mol/L)相當于1.401mg的氮(N)。計算公式:N(%)=(V-V0)× 1.401 × F × 10-3/M×100%。式中:V為消耗滴定液體積(mL),V0為空白消耗滴定液的體積(mL),F為滴定液的校正因子1.0063,M為供試品的質量(g)。

2.2 方法學驗證

2.2.1 耐用性

不同消解時間的考察：取黑冰片樣品(批號:21-09-048)約0.5g,精密稱定,共3份,消解時間分別為2h、4h、6h;蒸餾7min;依法消化,蒸餾后,滴定,記錄滴定液體積,并計算含量,結果見表1。上述不同消解時間對測定結果無明顯影響,故樣品消解時間選定4h。空白試驗消耗滴定液體積為0.1mL。

表1 不同消解時間的考察結果

不同蒸餾時間的考察：取雕糞樣品(批號:21-09-048)約0.5g,精密稱定,共3份,消解4h;蒸餾時間分別為5 min、7 min、9 min,按2.1項下方法操作,依法消化,蒸餾后,滴定,記錄滴定液體積,并計算含量,結果見表2。上述不同蒸餾時間對測定結果無明顯影響,故測定蒸餾時間選定7min。空白試驗消耗滴定液體積為0.1mL。

表2 不同蒸餾時間的考察結果

2.2.2 重復性

取黑冰片樣品(批號:21-09-048)約0.5g,精密稱定,共6份,依法消化,蒸餾后,滴定,記錄消耗滴定液的體積,并計算含量,結果見表3,顯示重復性良好(RSD =0.79%)。空白試驗消耗滴定液體積為0.1mL。

表3 重復性試驗結果

2.2.3 中間精密度

取黑冰片樣品(批號:21-09-048)約0.5g,精密稱定,共4份,不同儀器〔K9840自動凱氏定氮儀(內蒙古蒙藥股份有限公司)、KDN-19C定氮儀(通遼大北農科技有限公司)〕分別由不同分析人員依法消解,蒸餾后,滴定,記錄消耗滴定液的體積,并計算含量,結果見表4。試驗結果表明,該方法中間精密度良好(RSD =0.80%)。

表4 中間精密度試驗結果

2.2.4 線性與范圍

取硫酸銨適量,精密稱定,加水制成每1mL含30mg的溶液,分別精密量取0.25mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL,轉移至凱氏定氮儀中,依法蒸餾后,滴定,記錄消耗滴定液的體積,并計算含量,結果見表5。

表5 線性關系考察結果

將硫酸銨質量取量(y)對消耗滴定液體積(x)進行線性回歸,結果見表5、圖1。表明,硫酸銨取樣量在7.5～120mg之間時,二者具有極好的線性相關性。相關系數r為0.999。

圖1 不同質量硫酸銨與滴定液消耗量的線性關系圖

2.2.5 準確度(加樣回收試驗)

選取硫酸銨,將其在105℃的烘箱中烘2小時,放冷后精密稱取硫酸銨適量,加水溶解并稀釋制成每1mL中含35.0mg的硫酸銨溶液,備用。另取已知含量黑冰片樣品(批號:21-09-048,總N含量2.93%)約0.5g,共6份,精密稱定,分別加入上述硫酸銨溶液2mL,按上述方法操作消化,蒸餾后,滴定,記錄消耗滴定液的體積,并計算含量。結果見表6。

表6 加樣回收試驗結果

2.3 樣品測定

取黑冰片樣品0.5g,精密稱定,依法消化,蒸餾后,滴定,記錄消耗滴定液的體積,并計算含量。空白試驗消耗滴定液體積為0.1mL。黑冰片10批樣品的總氮測定結果見表7。

表7 總氮含量測定結果

樣品測定結果表明,10批樣品平均含量為:2.39%,按平均值的80%(-20%)制定含量限度,應為1.84%,取整數下限,限度暫定為1.5%。

綜上,采用氮測定法對黑冰片中的含氮量進行測定,經分析方法驗證,表明該方法重現性好,專屬性強,無其他組分干擾,可為修訂黑冰片質量標準提供參考。