橡膠樹白粉病PMA-qPCR 檢測體系及應用

官 鑫，涂 敏，蔡海濱，王云月，曾 霞，胡彥師

（1.中國熱帶農業科學院橡膠研究所，海南 海口 571101；2.云南農業大學植物保護學院，云南 昆明 650201）

【研究意義】白粉病是橡膠樹生產上最重要的葉部病害，其病原菌鑒定為Erysiphe quercicola［1-2］，為專性寄生菌。該病自1918 年在印尼瓜哇被發現，目前已遍及亞非各國植膠園，主要為害橡膠樹嫩葉（古銅期及變色期葉片）、嫩芽、嫩梢和花序，條件適合時其分生孢子可全年重復侵染，降低橡膠樹光合作用，導致橡膠樹生長遲緩、膠乳產量降低，最高可造成橡膠樹減產45%［3-4］。因此，通過對橡膠樹葉片上白粉病菌活菌量的快速檢測，能及時開展橡膠樹白粉病預測預報及防控，將其對生產的損失降至最低。【前人研究進展】qPCR 是利用熒光信號積累實時監測PCR 進程中每個反應循環擴增產物量的變化，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法［5］。qPCR 技術能夠定量檢測病菌［6-7］，但不能區分病菌的死活，易出現假陽性結果。研究表明，細胞死亡后DNA 仍然能夠保留數天時間。PMA 是一種光敏感、與DNA 高親和力結合的染料，其光解后能穿過死菌的細胞膜與死菌DNA結合形成穩定的共價鍵，從而抑制死菌DNA 擴增。活菌因其具有完整的細胞膜，可將PMA 排除在細胞膜外［8］。因此，利用PMA 對死活細胞的選擇性，結合qPCR 技術，可以實現準確定量檢測活菌的目的。目前該技術已廣泛應用于食源性致病菌［9-10］、醫學病原微生物［11］、水環境病原微生物［12］等，對植物病原菌檢測也有越來越多的報道，已在玉米細……