一步法RT-LAMP-HNB 檢測蘭花建蘭花葉病毒和齒舌蘭環(huán)斑病毒方法的建立

徐 匆，黃 皓，羅華建，杜見南，黃曉彥，陳 彥，梁衛(wèi)驅(qū)，胡 珊

（東莞市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究中心，廣東 東莞 523086）

【研究意義】蘭科（Orchidaceae）植物是開花植物中最大的家族之一，擁有800 多個屬28 000 余種，廣泛分布于各種生態(tài)環(huán)境，并表現(xiàn)有高度特異的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理特點［1-3］。據(jù)統(tǒng)計，全世界蘭花病毒有50 余種，建蘭花葉病毒（Cymbidium mosaic virus，CymMV）是從蘭花上分離到的分布最廣、危害最嚴(yán)重的病毒之一，能引起蘭科植物植株花葉畸形、壞死，花瓣變色，生長受抑等癥狀，傳播途徑主要有汁液、桃蚜和接觸等［4-7］。CymMV 為馬鈴薯X 病毒屬（Potexvirus），單鏈RAN 病毒，基因組序列約6 200 nt，含5 個開放閱讀框［8］。齒舌蘭環(huán)斑病毒（Odontoglossum ringspot virus,ORSV）同樣為蘭花中最為普遍的病毒之一［4-5］，屬于煙草花葉病毒屬（Tobamovirus），單鏈RNA 病毒，基因組全序列約5 800 nt［9］。該病毒會導(dǎo)致蘭花葉片產(chǎn)生環(huán)斑、花朵色素不均、局部壞死、大大降低植物活力等［10］。通過組織培養(yǎng)繁殖進(jìn)行大規(guī)模栽培早已成為蘭花產(chǎn)業(yè)的生產(chǎn)趨勢，而通過組織培養(yǎng)感染病毒的傳播方式成為了蘭花產(chǎn)業(yè)的主要威脅［11-12］。然而，目前沒有有效的措施能夠控制病毒病，因此，建立針對病毒的高效監(jiān)測、檢測方法，盡早檢出染病植株并實施銷毀，對控制蘭花病毒感染具有至關(guān)重要的意義。【前人研究進(jìn)展】目前已有的研究中，針對蘭花病毒檢測方法包括生物學(xué)檢測［13］、電鏡觀察法［14-15］、血清學(xué)檢測［16-17］和分子生物學(xué)檢測［8,18-21］4 類。生物學(xué)檢測法雖然操作簡單，但病毒病癥狀多樣，操作環(huán)境嚴(yán)格，固有周期長，目前大多作為輔助手段；電鏡檢測取樣簡單，所需時間短，但對操作人員要求高，所用儀器昂貴；……