血清HIV抗體篩查陽性與免疫蛋白印跡試驗確認結果分析

孔嘉名

（本溪市疾病預防控制中心內科門診，遼寧 本溪 117000）

人類免疫缺陷病毒，即艾滋病病毒（human immunodeficiency virus，HIV）抗體檢驗是目前臨床上檢測與診斷艾滋病的主要手段，能及時檢測HIV抗體，對艾滋病具有較好的防范與控制作用[1]。一般檢測方法分為兩個步驟，一是確認試驗，即免疫蛋白印跡法，能做出不確定、陰性、陽性三種結果，根據《全國艾滋病檢測技術規范》中的建議，對不確定的患者應每月隨訪1次，最后根據帶型進展情況，明確最終結果[2]；二是初篩法，即應用高敏感性篩查試驗對受檢者進行檢測，以便發現所有HIV 陽性者，臨床上常用酶聯免疫吸附測定法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測，再應用免疫印跡試驗進行確認[3-4]。基于此，本研究旨在探討初篩篩查陽性標本與確認結果之間的關系，并進行結果確認，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2017年8月至2019年12月本中心HIV抗體初篩陽性的246例患者作為研究對象，其中男180例，女66例；年齡25～71歲，平均（51.23±2.55）歲；有注射毒品史21例，配偶或固定性伴侶為陽性史40例，商業異性性行為史14例，有男男性行為史4例，有獻血史6例，母親有陽性史12例，有職業暴露史30 例，有手術史23 例，無高危行為史96 例。本研究經本中心醫學倫理委員會審核批準。

納入標準：患者臨床資料完整；患者自愿參與研究，均對本研究知情同意并自愿簽署知情同意書。排除標準：依從性差者；伴有其他傳染性疾病者；存在溝通障礙，或精神疾病者。

1.2 方法 對所有患者進行HIV 抗體篩查陽性復檢，將復檢陽性的血清標本應用免疫蛋白印跡試驗進行確診。操作者嚴格按照《全國艾滋病檢測技術規范》規定執行檢測方法與流程；所用HIV 抗體初篩ELISA試劑盒購自珠海麗珠試劑有限公司，膠體硒法試劑購自日本雅培公司，使用的確認試劑即HIV（1+2）型抗體印跡試劑購自新加坡MP 生物醫學亞太私人有限公司。抽取待檢者3 ml靜脈血，進行HIV 抗體檢測，初篩查時采用雙抗原夾心ELISA法或膠體硒法，初篩陽性標本應用原試劑及其他不同原理的試劑進行復檢，將兩種檢測方法下一陰一陽或陽性結果進行免疫蛋白印跡試驗確認。確認后的結果根據試劑盒說明書進行操作。陽性標準：①HIV-1 抗體陽性。檢測出2 條env 外膜糖蛋白帶及gag 核心蛋白或pol 逆轉錄酶蛋白帶；其中env 帶即gp160、gp4l、gp120，gag 帶即p14、p24、p55，pol 帶即p31、p51、p66。②陰性。未檢出病毒的特異性條帶，或單獨檢測出p17 抗體無其他的條帶。③不確定。檢出任何病毒特異條帶，但是缺乏將其判定為陽性的條件。HIV-2抗體陽性，在HIV-1為陽性或不確定時，加以HIV-2清晰條帶，則提示為陽性感染。

1.3 觀察指標 統計并分析初篩陽性結果與免疫蛋白印跡試驗確認結果。血清HIV 抗體篩查復檢陽性樣本吸光度值/臨界值（sample optical density/cut off，S/CO）與免疫蛋白印跡法確認結果的關系。分析免疫蛋白印跡試驗確認試驗帶型分布情況。

1.4 統計學方法 采用SPSS 22.0統計學軟件分析數據，計數資料以率或[n（%）]表示。

2 結果

2.1 初篩陽性結果與免疫蛋白印跡試驗確認結果246例初篩陽性標本中，經ELISA/膠體硒檢測，ELISA 陽性/膠體硒陽性228 例，ELISA 陰性/膠體硒陽性8 例，ELISA 陽性/膠體硒陰性者10 例；經確認有212例HIV-1抗體初篩陽性標本，陰性21例，不確定13 例。經測定，ELISA 的符合率為89.08%[212/（228+10）]，膠體硒的符合率為89.83%[212/（228+8）]，初篩查與確證試驗的陽性符合率為86.18%（212/246），兩種方法同時呈陽性反應的符合率為92.98%（212/228），見表1。

表1 初篩陽性結果與免疫蛋白印跡試驗確認結果（n）Table 1 Positive results of initial screening and confirmed results of Western blot(n)

2.2 246例HIV 抗體復檢陽性S/CO 值與免疫蛋白印跡法確認結果的關系 246例復檢陽性標本中，復檢結果1≤S/CO＜6、6≤S/CO＜10、S/CO≥10與免疫蛋白印跡確認陽性符合率分別為63.41%、83.54%、95.24%，隨著S/CO值的升高，與確證試驗的陽性符合率也不斷升高，見表2。

表2 246例HIV抗體復檢陽性S/CO值與免疫蛋白印跡法確認結果的關系Table 2 The relationship between the positive S/CO value of 246 HIV antibody re-examination and the confirmed results by Western blotting

2.3 免疫蛋白印跡試驗確認試驗帶型分布 免疫蛋白印跡試驗確認HIV-1 型抗體陽性212 例中，gp160、gp120、gp41、p66、p51、p24條帶的出現率均＞92%，其中gp160、gp120的出現率為100%，p55的出現率最低，為54.24%，見表3。

表3 免疫蛋白印跡試驗確認試驗帶型分布[n（%）]Table 3 Western blot assay to confirm the distribution of test band patterns[n(%)]

3 討論

近年來，相關部門對艾滋病廣泛重視，并強化了宣傳力度，使艾滋病檢測也呈不斷上升趨勢，根據統計結果可知，HIV 確診陽性例數也在大幅度地增加[5-6]。我國當前實施HIV檢查先進行初篩查，再進行復檢、確認，以便獲得準確的結果。免疫蛋白印跡試驗是免疫遺傳學、生物化學及分子生物學中常用實驗方法，其原理是借助特異性抗體，對經凝膠電泳處理的生物組織或細胞實施生物組織樣品著色，根據著色深度、著色位置，獲知特定蛋白質在細胞及組織中表達的情況。這一技術屬于特定抗體檢測的蛋白質檢測技術，目前已應用于基因蛋白水平表達、疾病早期診斷、抗體活性檢測中。在HIV疾病診斷中，免疫蛋白印跡試驗的檢測結果能準確地評估患者病情。但近年來，臨床也在嘗試探索HIV 疾病的初篩方法，初篩后將免疫蛋白印跡試驗結果作為確診標準。

本研究結果顯示，初篩陽性的246例標本，經免疫蛋白印跡試驗，確診為HIV-1 陽性212 例，ELISA的符合率為89.08%，膠體硒的符合率為89.83%，兩種方法同時呈陽性反應的符合率為92.98%。提示ELISA聯合膠體硒可提高診斷HIV的準確性。HIV疾病初篩中，可應用ELISA聯合膠體硒方法篩查血清HIV 抗體。本研究結果顯示，ELISA（+）患者共238 例，真陽性212 例，假陽性26 例。膠體硒（+）患者236例，真陽性212例，假陽性24例，ELISA（+）/膠體硒（+）患者228例，假陽性16例。提示ELISA、膠體硒單獨應用及聯合應用均存在假陽性結果，因此，對初篩呈陽性的標本，需根據《全國艾滋病檢測技術規范》中的要求，再給予免疫蛋白印跡試驗，并以確證試驗結果為準[7-8]。

本研究結果顯示，246例復檢陽性患者中，復檢結果1≤S/CO＜6、6≤S/CO＜10、S/CO≥10 與免疫蛋白印跡確認陽性符合率分別為63.41%、83.54%、95.24%，提示隨著S/CO值的升高，復檢結果與免疫蛋白印跡試驗陽性符合率升高，當S/CO＞10，符合率可高達95.24%，但結果仍存在假陽性，因此，不能認為S/CO 值高便可判定為HIV 感染，還需進一步確認結果。為避免HIV 抗體陽性與判定標準之間的差異，規定符合我國使用免疫蛋白印跡試驗確證HIV感染的判定標準與試劑盒提供陽性判定標準均為陽性，則可判定為HIV-1 抗體陽性[9-10]。因此，復檢難度增加，故更需要保證樣本質量，避免被其他疾病或病因影響，而且對檢測不確定患者，需進行4～8周，甚至更長時間的隨訪與監測[11-12]。

綜上所述，血清HIV 抗體篩查存在假陽性結果，需進一步行確證試驗，同時應保證血液質量，避免出現假陽性結果；隨著S/CO值的升高，與確證試驗的陽性符合率升高，可為艾滋病的預防控制工作提供及時、準確的科學參考，但免疫蛋白印跡試驗也存在不確定結果。