孟魯司特和布地奈德霧化吸入治療對哮喘患兒血清miR-155、炎癥因子和氣道功能的影響

陳智，魏靜麗，田蕓（廣東省深圳市前海蛇口自貿區醫院，廣東 深圳 518067）

支氣管哮喘（以下簡稱“哮喘”）是呼吸系統十分常見的一類疾病[1-2]。其病理變化表現為支氣管平滑肌出現明顯的痙攣，產生大量的支氣管黏液，和出現過度腫脹的支氣管黏膜[3-4]。目前的治療策略集中在抗炎、解痙和抗過敏[5]。急性哮喘發作會誘發患兒血流動力學紊亂，繼而導致呼吸衰竭[6]。微小RNA（microRNA，miRNA）能通過調控靶基因而參與機體的病理、生理過程。近年來，多種miRNA如miR-155等異常表達被證實與哮喘發生、發展密切相關[7]。糖皮質激素是當前治療哮喘患兒的重要藥劑。然而，糖皮質激素雖能夠在一定程度上抑制體內炎性因子的分泌，緩解臨床癥狀，但仍無法控制白三烯的釋放。因此，在臨床治療哮喘患者時，要科學、合理地選用藥物。孟魯司特是一種可以產生抗炎作用的白三烯受體阻滯劑。本研究采用孟魯司特和布地奈德霧化吸入來治療支氣管哮喘患兒，監測治療前后患兒的療效、氣道功能、miR-155和炎癥因子含量。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選擇2017年1月-2021年12月期間在深圳市前海蛇口自貿區醫院兒科診斷為哮喘的80例患兒為研究對象。通過隨機數字表法把入組患兒分成兩組，每組各40例。給予孟魯司特結合布地奈德霧化吸入治療的患兒列為觀察組，其中男18例、女22例，年齡6-12歲。給予布地奈德霧化吸入治療的患兒列為對照組，其中男21例、女19例，年齡6-11歲。兩組的臨床資料比較，無明顯差異（P＞0.05），未發現統計學意義，具有可比性。

納入標準：①支氣管哮喘患兒均符合《兒童支氣管哮喘診斷與防治指南（2016年版）》中相關診斷標準。②年齡在6-12歲之間。③經醫院倫理委員會批準，患兒家屬同意參與本次研究，并簽署知情同意書。

排除標準：①合并其他危重疾病需緊急搶救者。②合并存在其他先天性疾病者。③合并存在其他傳染性疾病者。④藥物過敏者。

1.2 醫治方法 對照組采用布地奈德治療，劑量用法：將1mg布地奈德溶解至2mL、0.9%的NaCl注射液，形成射流霧化劑，患兒通過儀器霧化吸入，每次10min，每天2次。觀察組在對照組的基礎上，加用孟魯司特咀嚼片治療，劑量用法：每晚1次口服，4-5mg/次。醫治一周后評估兩組患兒臨床癥狀的緩解程度。

1.3 療效標準 顯效：患兒哮鳴體征消失，及患兒喘息等癥狀消失；有效：患兒哮鳴體征改善，及患兒喘息等癥狀改善；無效：患兒哮鳴音體征無改善，及患兒喘息等癥狀無改善[8]。

1.4 氣道功能評價方法 用肺功能測定儀（PowerCube-ST，重慶柯洛德科貿）測定兩組患兒治療前、治療3個月后的肺功能參數：第1s用力呼氣容積（FEV1）和用力肺活量（FVC），并計算FEV1/FVC；潮氣量25%、50%、75%時的呼氣流速（TEF25%、TEF50%、TEF75%）。

1.5 血清miR-155含量檢測方法 兩組研究對象治療前及治療3個月后均采集外周血樣本5mL，選用miR-X試劑盒（638314，Clontech）檢測樣本。最后在熒光定量PCR儀上分別對miR-155和U6進行擴增，采用2-△△Ct計算miR-155的相對表達量。miR-155上游序列：5’-GCG CGT TAA TGC TAA TTG TGA T-3’；miR-155下游序列：5’-GTG CAG GGT CCG AGG T-3’；U6上游序列：5’-CGG GTT TGT TTT GCA TTT GT-3’；U6下游序列：5’-AGT CCC AGC ATG AAC AGC TT-3’。引物序列交由上海生工合成。

1.6 血清炎癥因子含量測定 兩組研究對象治療前及治療3個月后均采集外周血樣本5mL，離心得到血清后，用酶聯免疫吸附試劑盒（均購自北京市索萊寶科技有限公司）測定腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、干擾素-γ（IFN-γ）和白介素-4（IL-4）含量。

1.7 統計學方法 研究數據采用SPSS23.0軟件系統完成分析。計數資料采用“%”表示，組間比較采用χ2檢驗。計量資料均符合正態分布，以均數±標準差（±s）表示。P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組哮喘患兒的治療效果比較 治療后，觀察組患兒的治療總有效率為90.0%，明顯高于對照組的75.0%，差異有統計學意義（χ2=6.723，P=0.033）。見表1。

表1 兩組哮喘患兒的治療效果比較[n(%)]

2.2 兩組哮喘患兒氣道功能各項相關指標比較 治療后，兩組氣道功能各項相關指標（包括：FEV1/FVC、25%TEF、50%TEF和75%TEF）與治療前相比均有所改善；觀察組的氣道功能各項相關指標改善情況均顯著優于對照組（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組患兒治療前后氣道功能參數比較(±s)

表2 兩組患兒治療前后氣道功能參數比較(±s)

組別（n=40） 時間 FEV1/FVC 25%TEF（mL/s） 50%TEF（mL/s） 75%TEF（mL/s）觀察組 治療前 75.33±6.76 76.93±3.32 102.98±8.89 113.79±7.97治療后 86.09±5.73 86.56±7.88 118.68±9.01 120.04±6.67對照組 治療前 75.69±7.56 77.02±3.52 105.69±8.52 112.23±6.66治療后 79.09±6.67 80.26±4.45 109.03±8.89 112.41±9.53 t/P觀察組（治療前后） -10.060/＜0.001 -6.857/0.002 -4.638/0.010 -2.912/0.044 t/P對照組（治療前后） -3.477/0.025 -5.860/0.004 -8.499/0.061 -3.818/0.059 t/P組間值（治療后） 3.005/0.040 5.344/0.006 3.290/0.030 4.382/0.012

2.3 兩組哮喘患兒血清miR-155、炎癥因子含量比較 治療后，兩組血清miR-155、IL-4含量與治療前相比均有所降低；TNF-α和IFN-γ含量與治療前相比均有所升高。觀察組的血清miR-155含量降低幅度顯著優于對照組；TNF-α和IFN-γ含量升高幅度顯著優于對照組（P＜0.05）。見表3。

表3 兩組患兒治療前后血清miR-155、炎癥因子含量比較(±s)

表3 兩組患兒治療前后血清miR-155、炎癥因子含量比較(±s)

組別（n=40） 時間 miR-155 TNF-α（pg/mL） lFN-γ（μg/mL） lL-4（ng/mL）觀察組 治療前 16.19±0.59 13.21±1.09 5.32±0.61 1.98±1.38治療后 9.74±1.36 23.77±2.19 8.97±1.53 1.12±1.86對照組 治療前 16.44±0.80 13.71±1.50 5.33±0.62 1.96±1.32治療后 12.03±1.59 18.32±0.88 6.37±0.77 1.12±0.96 t/P觀察組（治療前后） 9.766/＜0.001 -9.635/＜0.001 -4.966/0.001 6.626/＜0.001 t/P對照組（治療前后） 5.552/＜0.001 -5.927/＜0.001 -2.342/0.047 5.272/＜0.001 t/P組間值（治療后） 2.452/0.040 5.518/＜0.001 3.394/0.009 3.206/0.063

3 討論

哮喘是一類免疫功能失調的慢性炎癥性疾病。該病發生時主要富集氣道黏膜下層CD4+T 淋巴細胞、嗜酸性粒細胞和肥大細胞等，其炎癥反應進展與氣道重塑、大量黏液的產生和氣道的高變異性呈正相關[9]。研究報告顯示，我國20歲以上國民哮喘發病率為4.2%，患者數量能達到4570萬例[10]。而近期我國學者Meta分析結果顯示，我國0-14歲兒童哮喘患病率為2.6%，患病率總體呈上升趨勢[11]。哮喘患兒的主要臨床特征有咳嗽、氣促和喘息等。因此，哮喘治療策略上應以及時高效地抗炎、止咳、平喘為主。

布地奈德是一類常見哮喘治療藥物，功效是能顯著抑制炎癥反應，及降低相關炎癥因子的分泌，從而有效地控制哮喘，是臨床常用的治療哮喘藥物[12]。孟魯司特是一類特異性白三烯受體抑制劑，能抑制白三烯受體的生物學功能，從而高效地降低白三烯所誘發的氣道炎癥反應和降低炎癥因子的分泌。為了明確孟魯司特和布地奈德霧化吸入對哮喘患兒的療效，本研究首先評估了兩組患兒的臨床療效，研究發現，治療后，觀察組患兒的治療總有效率為90.0%，明顯高于對照組的75.0%，P＜0.05。哮喘患兒最顯著的臨床癥狀是氣流受限和氣道痙攣，其中氣流受限程度常用FEV1/FVC指標顯示，小氣道痙攣程度常用25%TEF、50%TEF和75%TEF指標顯示。本研究經分析上述氣道功能參數后發現：治療后，兩組氣道功能各項相關指標（包括：FEV1/FVC、25% TEF、50%TEF和75% TEF）與治療前相比均有所改善；觀察組的氣道功能各項相關指標改善情況均顯著優于對照組（P＜0.05），提示孟魯司特和布地奈德霧化吸入聯合治療哮喘患兒在改善氣道痙攣和氣流受限上顯著優于單獨使用布地奈德霧化等吸入治療，這可能與孟魯司特能抑制白三烯受體，繼而抑制炎癥反應有關。臨床研究顯示，孟魯司特可直接抑制半胱氨酸白烯和白三烯受體，從而阻斷生物活性物質（超敏C反應蛋白、免疫球蛋白E）的釋放，進而減輕患兒的氣道高反應性，發揮強效抗炎作用，從而改善哮喘患兒氣道痙攣，緩解臨床癥狀[13]；另有研究者發現孟魯司特能高效減輕由血清炎癥因子分泌異常所誘發的免疫病理損傷，下調氣道高反應性，降低了炎癥細胞堆聚于氣管，進而抑制了炎癥反應的發生，從而有效緩解哮喘癥狀[14]，以上研究結論與本研究基本一致。

miRNA是一種小非編碼單鏈RNAs，作為DNA表達的轉錄后調控分子，已被證實和過敏性哮喘有關[15]。眾多研究表明，哮喘患者均存在miRNA表達失調情況，這些miRNA與哮喘的發生過程密切相關[16]。miR-155是其中研究者關注的非編碼RNA之一，其位于人類第21號染色體上，高表達于人類脾臟、胸腺、肝臟、肺臟以及腎臟中[17]，其功能與免疫細胞的發育、分化、活化、增殖及免疫應答等生物學過程有關。miR-155在多類激活的免疫細胞中高表達，能通過多條信號通路調控哮喘的進展[18]。研究表明，在過敏性鼻炎患者中，miR-155上調能提升ILC2表達，繼而提高IL-4表達，從而誘發Th2的炎癥反應[19]。轉錄因子T-bet是一類具有高度選擇性加快Th1細胞分化功能的分子，在Th1細胞的分化中發揮不可或缺的作用。T-bet可促使IFN-γ等Th1型細胞因子的分泌，并促使Th2細胞向Th1方向分化。而轉錄因子GATA-3則是一類具有高度選擇性促進Th2細胞分化功能的因子。GATA-3可高度選擇性地促進Th2細胞發育、誘導產生Th2細胞分子和阻遏Th1細胞特異分子。Th1/Th2的免疫平衡對維持氣道正常生理功能具有重要意義。Th1細胞分泌的特異性細胞因子有IL-2、IFN-γ和TNF-α等，可調控局部組織中的細胞免疫應答。Th2細胞分泌的特異性細胞因子有IL-4、IL-6等，能抑制Th1細胞的分化，同時能提升體液免疫應答和IgE的合成，從而讓氣道呈現致敏及高反應性狀態[20]。在哮喘發病過程中，Th1/Th2平衡開始向Th2漂移，增強Th2細胞功能會提高氣道炎癥反應和氣道敏感性，從而加重哮喘癥狀。目前，孟魯司特治療支氣管哮喘的效果得到了越來越多的肯定。然而，該藥對哮喘患兒miR-155及炎癥反應的影響尚未見相關報道。因此，本研究進一步測定了哮喘患兒治療前后血清中miR-155和Th1、Th2細胞特異性釋放的細胞因子發現：治療后，兩組血清miR-155、IL-4含量與治療前相比均有所降低；TNF-α和IFN-γ含量與治療前相比均有所升高。觀察組的血清miR-155含量降低，顯著優于對照組；TNF-α和IFN-γ含量升高，顯著優于對照組（P＜0.05），提示miR-155高表達時，Th1細胞比例降低，Th2細胞比例升高，布地奈德霧化吸入和孟魯司特可能通過抑制miR-155高表達，進而調控Th1/Th2平衡，從而改善患兒哮喘。筆者推測miR-155高表達能直接或間接促進GATA-3表達，從而造成哮喘患兒Th1/Th2細胞失衡的新機制，該具體機制需進一步通過體內外實驗闡明。

綜上所述，用布地奈德霧化吸入聯合孟魯司特口服治療哮喘患兒療效滿意，能有效地下調血清中miR-155表達、抑制Th1/Th2失衡介導的炎癥反應和改善氣道功能，有助于患者的康復，值得臨床應用推廣。本研究還存在一些不足之處，如選入樣本量總體偏少，指標觀察時間較短，仍需在后續工作中作多中心、多樣本深入研究，以提供更可靠的研究數據。