佛山地區腦梗死患者阿司匹林藥效相關基因GP1BA多態性分析

楊康，歐陽佩雯，吳蕓華（廣東省佛山復星禪誠醫院，廣東 佛山 528000）

腦梗死又稱缺血性腦卒中，約占腦卒中的70%，是由于各類原因導致腦組織血液供應障礙，致使缺氧缺血性壞死，進而出現神經功能問題的臨床綜合征，是當今社會中導致殘疾和死亡較嚴重的神經系統血管性事件[1-2]。阿司匹林作為一線的抗血小板藥物被臨床普遍地應用于腦梗死患者的治療和預防。部分患者使用阿司匹林后呈現阿司匹林抵抗（AR）現象，發生率為5%-50%[3]。AR受臨床、遺傳和環境等多種因素影響。當前AR被報道與多種單核苷酸多態性（SNP）存在相關性[4]，包括編碼血小板糖蛋白（GP）Ⅱb/Ⅲa的GP1BA（5792C＞T）基因多態性。由于基因多態性在不同人群間存在一定的差異[5-6]，目前該基因位點多態性在本國人群中的研究較少。本研究中通過計算GP1BA（5792C＞T）基因位點在佛山地區腦梗死人群中的突變情況，分析阿司匹林藥效相關基因GP1BA（5792C＞T）基因型及等位基因頻率在不同性別和不同地區人群間的差異，為我國臨床進行個性化的阿司匹林用藥方案提供遺傳信息依據。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象 回顧性隨機收集2019年4月-2021年4月至我院神經內科行GP1BA基因多態性檢測的腦梗死患者193例病例資料，所有患者均詳細記錄相關臨床基線資料，包括年齡、性別、體重指數（body mass index，BMI）、吸煙史以及合并癥（高血糖、高脂血癥、高血壓）。腦梗死依據中華醫學會神經病學分會腦血管病學組制定的相關納入及排除標準[1]，所有患者之間無血緣關系，籍貫為廣東佛山，且久居佛山地區。所納入患者均簽訂知情同意書，符合醫學倫理程序。

1.2 研究方法

1.2.1 儀器 TL988型熒光定量PCR儀（西安天隆科技有限公司），5424R型高速離心機（德國Eppendorf公司），XO-01漩渦振蕩器（北京泰普聯合科技開發有限公司）。

1.2.2 試劑 地高辛染色液、樣本萃取液、細胞保存液（濟南廣音醫療科技有限公司）。

1.2.3 GP1BA（5792C＞T）基因多態性檢測 采集患者外周血2ml于EDTA·K2抗凝劑保存，提取白細胞。應用熒光染色原位雜交技術測定白細胞中GP1BA（5792C＞T）基因位點。經過95℃變性解鏈10min，60℃恒溫特異性雜交并實現非酶級聯熒光信號放大90min。采用雙通道熒光定量PCR儀測定結果。

1.3 觀察指標 通過檢測患者的GP1BA（5792C＞T）基因位點，分析GP1BA（5792C＞T）基因多態性的分布情況、基線資料方面的差異以及與其他地區人群的差異并作統計分析。

1.4 計算方法

1.4.1 基因型頻率的計算 收集的GP1BA（5792C＞T）基因位點存在3種可能的基因型：野生型（CC）、雜合突變型（CT）以及純合突變型（TT）。CC型頻率=CC型標本數量/標本總數×100%；CT型頻率=CT標本數量/標本總數×100%；TT型頻率=TT標本數量/標本總數×100%。

1.4.2 等位基因頻率的計算 依據HWE定律[2]，當標本中某個基因位點只存在C和T兩個等位基因時，等位基因C的頻率P(C)=（CC型標本數量×2+CT型標本數量×1）/（標本總數×2）×100%；等位基因T的頻率P(T)=（TT型標本數量×2+CT型標本數量×1）/（標本總數×2）×100%或者P（T）=1-P（C）。

1.5 統計學處理 研究數據采用SPSS26.0統計學軟件分析。使用χ2檢驗分析基因型頻率是否符合Hardy-Weinberg（HWE）遺傳平衡定律，當P＞0.05時為符合。采用頻數（百分比）表示計數數據，兩組間數據統計學差異比較采用χ2檢驗，以P＜0.05（雙側）表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HWE遺傳平衡定律檢驗 使用χ2檢驗對入組人群的基因型頻率進行HWE平衡檢驗，基因型分布符合HWE檢驗平衡（χ2=4.98，P＞0.05），說明入組的人群具有群體代表性。

2.2 GP1BA（5792C＞T）位點基因型、等位基因頻率及在不同性別中的分布 本研究共檢測193例佛山地區腦梗死患者的GP1BA（5792C＞T）基因位點。其中CC型為175例（90.67%）、CT型為16例（8.29%）、TT型為2例（1.04%）。在GP1BA（5792C＞T）基因位點中等位基因C出現的頻率較高為366（94.82%），而等位基因T出現的頻率較低為20（5.18%），盡管該等位基因突變頻率較低，一旦出現，便對阿司匹林的用藥劑量具有重要的指導意義。研究人群中男性118例，女性75例，通過比較不同性別間GP1BA（5792C＞T）位點基因型及等位基因頻率，差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 GP1BA（5792C＞T）位點基因型、等位基因頻率及在不同性別中的分布[n(%)]

2.3 不同區域人群GP1BA（5792C＞T）位點等位基因頻率分布比較 將本研究人群的等位基因頻率結果與千人基因組計劃數據庫中GP1BA（5792C＞T）等位基因頻率在其他地區人群中分布[7]進行比較，佛山地區人群T等位基因突變頻率顯著低于非洲人、歐洲人、美國人（P＜0.05），與南亞人、東亞人比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。見表2。

表2 GP1BA（5792C＞T）等位基因頻率在不同地區人群間的分布[n(%)]

3 討論

阿司匹林作為治療和預防腦梗死患者的主要藥物，但部分患者即使規律使用阿司匹林仍會出現AR。當前，AR的機制尚不明確，抗血小板藥物作用與代謝過程中涉及的相關基因，其多態性可能是重要原因[8-9]。以往研究[4]提示，GP1BA（5792C＞T）基因多態性是阿司匹林抗血小板藥效相因素，Matsubara Y[10]等研究表明GP1BA（5792C＞T）基因多態性與患者對阿司匹林藥效有關，患者攜帶C等位基因，其阿司匹林抵抗風險較高。因此，研究GP1BA（5792C＞T）基因多態性有助于臨床實施個體化使用阿司匹林，提高藥物療效。

伴隨分子生物學研究的逐步深入，大量學者開始研究遺傳因素在阿司匹林抵抗中的作用[11-13]。廣東省藥學會在抗血小板藥物個體化藥學服務指引中表明，在使用阿司匹林抗血小板治療時，應行GP1BA（5792C＞T）基因多態性檢測[14]。本研究結果顯示193例佛山地區腦梗死患者GP1BA（5792C＞T）基因多態性中，CC型為175例（90.67%）、CT型為16例（8.29%）、TT型為2例（1.04%），等位基因C突變為T的頻率為5.18%，表明該基因位點在佛山地區腦梗死患者存在不同基因型。通過比較不同性別間GP1BA（5792C＞T）位點基因型及等位基因頻率，發現差異無統計學意義（P＞0.05），這可能與本研究納入的樣本量較少有關。同時筆者將佛山地區人群T等位基因頻率同千人基因組計劃研究的人群進行比較，結果顯示佛山地區人群與東亞地區人群、南亞地區人群等位基因頻率無顯著性差異（P＞0.05），與歐洲人、美國人、非洲人存在著顯著性差異。GP1BA（5792C＞T）基因多態性在國內外研究報道較少，其中劉磊磊[15]等人報道顯示江蘇南京地區漢族腦梗死人群的GP1BA（5792C＞T）T等位基因頻率（7.2%），等位基因突變頻率與本研究突變頻率（5.18%）較為一致。楚明明[16]等人報道顯示西南地區358例動脈粥樣硬化性心血管疾病患者GP1BA（5792C＞T）基因CC型307例（85.75%），CT型48例（13.41%），TT型3例（0.84%），突變率14.25%，與本研究基因型及等位基因頻率存在一定差異，可能由于地區種族人群原因導致。楊秀峰[17]等人研究顯示缺血性腦卒中患者GP1BA（5792C＞T）基因型檢測結果野生型（CC）78例（61.9%），與本研究結果中野生型175例（90.67%）、突變型（CT+TT）18例（9.33%），存在差異，可能是由于黑龍江大慶地區人群與本地區人群存在差異。相關報道[7]顯示亞洲人T等位基因突變頻率（7.61%）、東亞人T等位基因突變頻率（7.04%）、南亞人T等位基因突變頻率（5.58%）與本研究結果相近，非洲人T等位基因突變頻率（20.12%）、美國人T等位基因突變頻率（20.08%）、歐洲人T等位基因突變頻率（8.75%）與本研究結果存在較大差異。

綜上所述，GP1BA（5792C＞T）基因存在多態性，不同性別間比較，無統計學差異，但不同地區人群中存在統計學差異。研究結果提示針對其他人群在基于GP1BA基因進行診斷治療時，其診斷治療方案有可能不適用于我國人群。臨床醫生使用阿司匹林治療前應考慮GP1BA（5792C＞T）基因多態性問題，根據不同患者的基因型，給予不同治療方案，以期患者能獲得更好的療效。本研究存在的局限有：①納入的樣本量較少；②未對不同基因型患者進行不同用藥劑量設計及藥物治療效果的監測。未來可通過擴大樣本量、多中心，進行長期隨訪評價不同基因型對療效的影響。