XIAP、Smac、Caspase-3表達與浸潤性乳腺癌分化程度及預后的關系

王曉燁，劉志英，冬國友

乳腺癌是嚴重威脅女性身體健康的惡性腫瘤。近年來，我國乳腺癌發病率上升，且呈逐漸年輕化趨勢[1]。乳腺癌好發于40歲以上女性，具有高度異質性，其病理類型以浸潤性導管癌最為常見，約占全部乳腺癌的65%[2]。目前，乳腺癌的發病機制尚未明確，認為可能與細胞凋亡抑制有關。有研究發現，X連鎖凋亡抑制蛋白(XIAP)、第二個線粒體衍生的半胱氨酸蛋白酶激動劑(Smac)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)在細胞凋亡過程中發揮重要作用[3]。本研究通過檢測浸潤性乳腺癌患者癌組織XIAP、Smac、Caspase-3表達水平，探討上述因子表達與浸潤性乳腺癌分化程度及預后的關系。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2018年9月—2019年9月我院收治的83例浸潤性乳腺癌。①納入標準：均符合浸潤性乳腺癌相關診斷標準[4]；未進行放療、化療及生物免疫治療者；腫瘤原發于乳腺；臨床資料齊全。②排除標準：存在肝、肺等嚴重疾病者；存在遠處轉移者；二次手術者；合并其他乳腺疾病者。納入患者均為女性；年齡24～77(42.57±4.57)歲；病理類型：浸潤性導管癌62例，浸潤性小葉癌21例；臨床分期：Ⅰ期26例，Ⅱ期42例，Ⅲ期15例；分化程度：高分化22例，中分化25例，低分化36例。

1.2方法 患者均行局部(腫瘤+周圍組織)切除術+腋下淋巴結清掃，術后給予常規放療。取患者術后癌組織及距瘤體>5 cm的癌旁正常組織進行常規石蠟包埋，層厚5 μm連續切片。采用免疫組織化學SP法檢測XIAP、Smac、Caspase-3表達情況，操作步驟嚴格遵循試劑盒說明書，一抗陰性對照使用PBS代替。結果判斷：XIAP以細胞質染成棕黃色為陽性表達，Smac以細胞質或細胞膜染成棕黃色為陽性表達，Caspase-3以細胞核或細胞質染成棕黃色為陽性表達；按染色程度計分，0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為黃褐色；按陽性細胞數計分，每張切片取5個高倍視野，無陽性細胞為0分、陽性細胞<10%為1分、10%～50%為2分、50%～75%為3分、>75%為4分。兩項積分相乘為總分，總分<3分為表達陰性[5]。

1.3觀察指標 ①比較不同組織XIAP、Smac及Caspase-3表達情況。②分析XIAP、Smac及Caspase-3在不同分化程度浸潤性乳腺癌患者中的表達情況。③對患者進行2年的電話隨訪(隨訪時間截至2021年9月)，分析浸潤性乳腺癌不同XIAP、Smac及Caspase-3表達組2年生存率。

2 結果

2.1癌組織及癌旁正常組織XIAP、Smac及Caspase-3表達情況比較 浸潤性乳腺癌組織中XIAP陽性表達率高于癌旁正常組織，Smac、Caspase-3陽性表達率均低于癌旁正常組織(P<0.05)。見表1。

表1 浸潤性乳腺癌組織及癌旁正常組織兩組XIAP、Smac及Caspase-3表達情況比較[例(%)]

2.2不同分化程度癌組織XIAP、Smac及Caspase-3表達情況比較 中、高分化組XIAP陽性表達率低于低分化組，Smac、Caspase-3陽性表達率均高于低分化組(P<0.05)，中分化組與高分化組比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 不同分化程度浸潤性乳腺癌組織XIAP、Smac及Caspase-3表達情況比較[例(%)]

2.3不同XIAP、Smac及Caspase-3表達組2年生存率比較 浸潤性乳腺癌XIAP陰性組和陽性組2年生存率分別為100.00%和80.00%，Smac陰性組和陽性組分別為75.00%和96.30%，Caspase-3陰性組和陽性組分別為81.13%和96.67%。浸潤性乳腺癌XIAP陰性組、Smac及Caspase-3陽性組2年生存率分別高于XIAP陽性組、Smac及Caspase-3陰性組(P<0.05)。

3 討論

浸潤性乳腺癌是發生于乳腺上皮組織的惡性腫瘤，具有較高的病死率。有研究認為，腫瘤發生發展與細胞增殖和凋亡的動態平衡嚴重失調存在密切聯系[6]。有報道顯示，XIAP、Smac及Caspase-3在細胞凋亡過程中具有調控作用[7]。

凋亡抑制蛋白家族是在結構上具有同源性的新型細胞凋亡抑制蛋白，可抑制Caspase活性使細胞凋亡受阻，同時還可調節細胞分裂、信號傳導等[8]。在目前已發現的凋亡抑制蛋白家族成員中，XIAP被認為作用最強。國外研究發現，XIAP可能在細胞增殖、惡性轉化過程中發揮重要作用[9]。PARK等[10]通過對比發現，癌組織XIAP表達強度顯著高于正常組織。Smac是一種新型線粒體蛋白，基因位于第12條染色體長臂，當機體出現DNA受損、細胞表面死亡受體活化時，活性Smac蛋白會進入細胞質，與多種凋亡抑制蛋白結合，消除XIAP對Caspase的抑制作用，進而激活Caspase酶原，同時增加Caspase酶活性[11]。Smac小分子衍生物可通過不同機制促進凋亡抑制蛋白降解或泛素化，殺死腫瘤細胞。Caspase-3在細胞凋亡過程中居核心位置，亦是整個凋亡級聯反應的關鍵調節點。Caspase-3活性受到抑制會誘發細胞凋亡障礙，導致細胞凋亡與增殖間動態平衡失調，促進腫瘤發生發展[12]。Caspase-3作為細胞凋亡的直接執行者在腫瘤細胞凋亡中具有積極作用，XIAP是目前最強的Caspase抑制物，通過抑制Caspase凋亡途徑中的起始、效應階段，從而抑制腫瘤細胞凋亡，而Smac亦是天然XIAP抑制劑，在細胞凋亡中發揮重要作用，Smac異常表達可促進腫瘤細胞凋亡[13]。

本研究發現，浸潤性乳腺癌組織中XIAP陽性表達率高于癌旁正常組織，Smac、Caspase-3陽性表達率均低于癌旁正常組織，低分化癌組織上述因子表達與中、高分化比較差異顯著。推測其原因可能是XIAP能直接或間接影響Caspase-3蛋白表達，當XIAP過度表達時，抑制Caspase-3，進而阻止細胞凋亡，促使浸潤性乳腺癌細胞的惡性轉化；Smac則能抑制XIAP，促進Caspase-3表達，Smac下調或表達缺損會導致乳腺癌細胞凋亡減少，生長期延長，過度增殖，從而導致浸潤性乳腺癌形成[14]。經Kaplan-Meier生存曲線分析發現，浸潤性乳腺癌XIAP陰性組、Smac及Caspase-3陽性組2年生存率分別高于XIAP陽性組、Smac及Caspase-3陰性組，與既往研究報道相符[15]。說明上述因子可作為評估浸潤性乳腺癌患者預后的輔助指標，但其作用機制有待進一步研究。

綜上所述，浸潤性乳腺癌組織中XIAP、Smac及Caspase-3呈異常表達，三者在促進腫瘤細胞凋亡中起重要作用，并與患者預后相關。