標本溶血對電化學發光法檢測生長激素結果的影響

程雙喜，柯丹丹，江轉南，楊麗娟，李玉鳳

1.東莞市婦幼保健院兒童保健科，廣東東莞 523002；2.東莞市蘭衛醫學檢驗實驗室，廣東東莞 523000；3.東莞市松山湖高新技術產業開發區社區衛生服務中心，廣東東莞 523000

血液標本在采集、貯存過程中，紅細胞在一些不確定的因素作用下發生破壞， 使得紅細胞內物質釋放到血清中，稱之為標本溶血現象[1]。目前認為標本溶血會對生化、凝血功能、血常規等檢測結果產生影響。有文獻報道標本輕、 中度溶血對電化學發光法檢測甲狀腺激素、性激素沒有產生明顯影響[2-5]，同時有研究發現標本溶血對血糖、胰島素檢測結果有影響[6-8]。然而， 標本溶血對生長激素檢測結果產生什么樣的影響未見報道。由于生長激素呈脈沖式分泌，且受運動及睡眠等因素的影響， 兒童保健工作中常常需要用生長激素激發試驗判斷生長激素分泌情況[9]。該試需要檢測患者在藥物刺激前的生長激素水平， 及其在藥物刺激后的30、60、90、120 min 的生長激素水平， 通過檢測到的生長激素峰值來判斷生長激素是否缺乏。然而，在實際臨床工作中有時會因為一些不可控的因素會出現標本溶血的情況。 當生長激素激發試驗的關鍵結果出現標本溶血后, 溶血標本的生長激素檢測值是否可靠？ 是否需要重新再進行一次生長激素激發試驗？ 但是再次重新進行一次生長激素激發試驗對患兒還是會造成一定的創傷， 同時還會增加患兒及其家庭的心理及經濟負擔。 為了解決該問題， 該研究將兒童保健門診就診的149 例身材矮小患兒中收集到的正常標本的生長激素檢測結果與其溶血后的檢測結果進行了對比研究。 現報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

收集因身材矮小（參照中國2005 年九省/市兒童體格發育標準身高低于同年齡、同性別兒童2 SD）就診，并行生長激素激發試驗（實驗采用：鹽酸精氨酸+左旋多巴或者溴吡啶斯的明+左旋多巴進行激發[10-11]）而抽取的149 份生長激素檢測值＞5.0 ng/mL，且肉眼觀察未出現溶血、脂血、黃疸的樣本。 研究對象年齡分布為3～13 歲，其中男性兒童樣本86 份，女性兒童樣本63 份。

1.2 方法

1.2.1 采集樣本 用干燥管采集患者靜脈血，靜置，待血清析出后放置低速離心機，3 500 r/min 離心10 min，選取外觀無溶血、脂血、黃疸的血清樣本，測定其生長激素的結果。

1.2.2 配制重度溶血的血清標本 選取測定結果＞5.0 ng/mL 樣本，用無菌竹簽將正常血清標本紅細胞人為破壞，置于低速離心機，3 500 r/min 轉離心10 min，取出，吸出溶血血清300 μl,作為重度溶血樣本（Hb＞0.500 g/dl）于2～8℃保存，并于溶血后30 min 或8 h再次測定其結果。

1.2.3 其他 檢測設備及試劑：應用羅氏Cobas6000 e 601 全自免疫分析儀及其原裝的生長激素檢測試劑盒。 檢測方法為：電化學發光法。 試劑精密度：根據CLSI 的方案（EP5-A2）,使用ELECSYS 試劑、混合人血清和質控品確定精密度，得出批間精密度≤3%。

1.3 統計方法

采用SPSS 16.0 統計學軟件進行數據處理，符合正態分布的計量資料以（±s）表示，采用t檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 99 例正常血清標本與其溶血后30 min 檢測結果比較

收集99 例生長激素檢測值＞5.0 ng/mL 且肉眼觀察未出現溶血、脂血、黃疸的正常血清標本，與其人為破壞造成樣本重度溶血后30 min 檢測結果進行配對比較， 兩組生長激素檢測結果曲線大部分重疊。見圖1。其中男童樣本56 例，女童樣本43 例，年齡分布為3～13 歲。

圖1 99 例正常血清標本與其溶血后30 min 檢測結果比較

2.2 50 例正常血清標本與其溶血后8 h 檢測結果比較

收集50 例生長激素檢測值＞5.0 ng/mL 且肉眼觀察未出現溶血、脂血、黃疸的正常血清標本與其人為破壞造成樣本重度溶血后8 h 檢測結果進行配對比較，兩組生長激素檢測結果曲線大部分重疊。見圖2。其中男童樣本30 例，女童樣本20 例，年齡分布為4～11 歲。

圖2 50 例正常血清標本與其溶血后8 h 檢測結果比較

2.3 正常標本與溶血后30 min 及8 h 生長激素檢測結果比較

生長激素檢測值＞5.0 ng/mL 且肉眼觀察未出現溶血、脂血、黃疸的正常血清標本與其人為破壞造成樣本重度溶血后檢測結果進行比較， 差異有統計學意義（P＜0.05）。溶血后30 min，溶血組均值小于其正常值（0.22±0.60）ng/mL，溶血后8 h,溶血組均值小于其正常值（0.19±0.27）ng/mL。 見表1。

表1 正常標本與溶血后30 min 及8 h 生長激素檢測結果比較[(±s),ng/mL]

表1 正常標本與溶血后30 min 及8 h 生長激素檢測結果比較[(±s),ng/mL]

?

3 討論

影響兒童生長的病因復雜， 其中內分泌相關的疾病在生長障礙的患兒中占了較大比重， 特別是垂體分泌的生長激素對兒童的生長影響很大[12]。 用于生長激素激發試驗的常用藥物有：胰島素、精氨酸、吡啶斯的明、可樂定、左旋多巴等，它們通過抑制生長抑素釋放或者通過促進GHRH 釋放激素來刺激體內生長激素的分泌。 然而臨床上也不能僅僅依靠生長激素激發試驗來診斷生長激素缺乏癥[13-14]，而是需要結合兒童的既往病史、家族遺傳背景、身高、生長速率、骨齡、類胰島素樣生長因子-1、生化指標及其他內分泌指標等綜合分析診斷。 但是生長激素激發試驗仍然是生長激素分泌水平的一個重要的評估指標。 生長激素激發試驗過程中常用留置靜脈針聯合采血器采血，盡管采血部位、靜脈通暢度、試管類型、采血月份等可能溶血發生的主要影響因素。溶血時紅細胞高濃度成分逸出、 血紅蛋白本身對吸光度的干擾、 某些物質的血細胞內濃度低于血漿時溶血導致血漿被稀釋、 血紅蛋白還可競爭性抑制分析物與試劑中的反應物結合等原因都可能干擾溶血樣本的檢測結果。 此外，溶血時血小板、白細胞等血細胞破壞所釋放的某些細胞內成分也可影響溶血樣本的檢測結果[15-16]。

標本溶血在臨床工作中仍不能完全避免, 由于生長激素激發試驗時不同時間點生長激素濃度不同， 在實驗過程中某個時間點出現標本溶血后除非重新再次進行激發試驗， 否則不能再次獲得該時間點標本。 然而再次重新進行的生長激素激發試驗對患兒還是會造成一定的損傷。通過對99 例生未出現溶血的正常血清標本與其人為破壞造成樣本重度溶血后30 min 檢測結果及50 例未出現溶血的正常血清標本與其人為破壞造成樣本重度溶血后8 h 檢測結果進行配對比較研究結果顯示： 標本溶血會導致其檢測結果稍低于正常值。雖然兩者間比較，差異有統計學意義（P＜0.05），但兩者實際差別的絕對值并不大。 99 例正常標本檢測值-其溶血后30 min 檢測值為（0.22±0.60）ng/mL，相對誤差為2.16%。 50 例正常標本檢測值-其溶血后8 h 檢測值為（0.19±0.27）ng/mL，相對誤差為1.88%。

生長激素是一種由191 個氨基酸組成肽類激素。下丘腦釋放出生長激素釋放激素作用于腦垂體，促使腦垂體分泌產生生長激素。 在血液中生長激素與生長激素結合蛋白相結合并通過血流傳輸至肝臟和其他組織， 與組織細胞膜上的相應受體結合后產生作用。生長激素的過度分泌會導致肢端肥大，兒童期生長激素分泌不足會導致身材矮小。 紅細胞內液并不含有生長激素。電化學發光法采用了生物素-鏈霉親和素包被、 以三聯吡啶釕作為示蹤物質及磁性分離等技術有效避免了紅細胞內液中的物質對檢測結果的干擾。 但在嚴重溶血后細胞內液對血清有一定的稀釋作用， 可造成檢測溶血后結果較未溶血前結果稍低。

綜上所述，在日常的工作中要規范采血的操作，科學貯存標本等，盡量避免標本溶血的出現。但是對于不可避免地出現溶血的標本，該研究認為：即使標本出現重度溶血， 電化學發光法檢測生長激素的結果與溶血前稍有降低，但是差異較小，而且這種差異在標本溶血30 min 后及溶血8 h 后沒有太大變化。那么溶血標本的生長激素的電化學發光法的檢測結果仍然可以作為臨床參考。