外周血單個核細胞TMEVPG1、NRON的表達與精神分裂癥患者癥狀和認知功能的關系

祁 娜，白田妹，徐天朝

0 引 言

精神分裂癥是臨床上常見的重性精神障礙，患者可能存在嚴重的認知功能損傷[1]。我國精神分裂癥12月患病率和終生患病率分別為0.6%和0.7%[2]。長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA，lncRNA)是一段經RNA域轉錄、長度>200個核苷酸的RNA片段，在表觀遺傳學調控和細胞周期調控中起到重要作用[3]。lncRNA在精神分裂癥中的作用近年來受到廣泛關注。既往研究證實，lncRNA在精神分裂癥早期診斷、病情及療效評價中有重要價值[4-5]。lncRNA與精神分裂患者認知功能 的關系既往少有報道。精神分裂癥患者認知功能損傷與炎癥損傷密切相關[6]，而lncRNA又與炎癥損傷的發生和發展有關[3]，因此我們推測lncRNA與精神分裂癥患者的認知功能有關。lncRNA TMEVPG1由位于干擾素基因附近的基因編碼，可影響干擾素γ的表達水平，進而介導免疫炎癥[7]。lncRNA NRON已被證實與造血和免疫密切相關[8]。TMEVPG1和 NRON已證實在精神分裂癥患者中高表達，并且與血清炎癥因子白細胞介素6的表達呈正相關[9]，但是兩者在精神分裂癥中的臨床價值既往少有報道。本研究采用熒光定量PCR檢測首發精神分裂癥患者外周血單個核細胞中TMEVPG1、NRON的表達水平，用MATRICS 公認認知成套測驗(MATRICS consensus cognitive battery，MCCB)評價認知功能，分析兩者關系，旨在為理解精神分裂癥患者的認知功能障礙提供新思路。

1 資料與方法

1.1 研究對象選擇2016年6月至2018年6月本院門診收治的68例精神分裂癥患者(精神分裂癥組)，全血標本凍存于-80 ℃冰箱。納入標準：①首發精神分裂癥患者，符合美國精神障礙診斷與統計手冊(第五版)的診斷[10]；②未服用抗精神病藥、抗抑郁藥和精神活性藥物等；③可配合完成MCCB測驗。排除標準：①急慢性感染性疾?。虎诰癜l育遲滯；③腦器質性疾?。虎軆确置诨蛎庖呦到y疾病。同期來自本院體檢中心的50例健康人作為對照組。納入標準：①無精神疾病或精神疾病家族史；②可配合完成MCCB測驗；③無重大軀體疾病。本研究經醫院倫理委員會批準[批準號：倫審K(2015)12號]，所有受試者簽署知情同意書。

1.2 檢測方法樣本檢測于2019年1-9月完成。用密度梯度離心法分離外周血單個核細胞，Ficoll分離液購于華雅再生醫學生物工程技術有限公司，貨號為17-5442-02。用Trizol法提取細胞總RNA，隨后反轉錄為cDNA。總RNA提取試劑盒和反轉錄試劑盒均購于上海聯邁生物工程有限公司，貨號分別為LM18-75400和BC4075。用SYBR Select Master Mix試劑盒進行熒光定量PCR，試劑盒購于上海聯邁生物工程有限公司，貨號為LM3812A。TMEVPG1和 NRON引物均由蘇州泓迅生物科技股份有限公司設計并提供，TMEVPG1引物序列：上游5′- CCCAAGCTTGCGTTCTTTTCGAGGTCGGC-3′，下游5′- CCGGAATTCTGACGGTAGTTTCCCAAGTT-3′；NRON引物序列：上游5′-AGUUUUGCAUAGUUGCACUCAC-3′；下游5′-GCTCACTGCAACCTCCTCCTCC-3’。 內參β-actin：上游 5′-TGGAATCCTGTGGCATCCATGAAAC-3′；下游5′- ACGCAGCTCAGTAACAGTCCG-3′。反應條件為：50 ℃ 120 s；95 ℃ 120 s；95 ℃ 15 s；60 ℃ 60 s，共40個循環。用2-△△Ct法計算TMEVPG1和 NRON相對表達量。

1.3 臨床評估

1.3.1 精神分裂癥的癥狀嚴重程度用陽性與陰性癥狀量表(Positive and Negative Syndrome Scale，PANSS)評價精神分裂癥的癥狀嚴重程度，評分包括陽性分量表7項(妄想、概念紊亂、幻覺、興奮、夸大、猜疑/被害、敵對)、陰性分量表7項(情感遲鈍、情感退縮、交流障礙、退縮、抽象思維困難、交談缺乏自發性和流暢性、刻板思維)、精神病理分量表16項(焦慮、自罪感和緊張等)，分值越高癥狀越重。該量表標準化Cronbach α值為0.8707，信效度較好[11]。

圖1 TMEVPG1、NRON單獨以及聯合診斷精神分裂癥的ROC曲線

1.3.2 認知功能用MCCB對認知功能進行評價，該系統用于精神分裂癥患者認知功能評估有較好的敏感性，與功能評定和臨床評定量表之間具有較高的一致性[12]。MCCB共包含9個分測驗，評估7個認知維度。①信息處理加工速度：連線測驗、符號編碼測驗、語義流暢測驗；②注意/警覺：持續操作測驗；③工作記憶：空間廣度測驗；④言語學習：霍普金斯詞語學習測驗；⑤視覺學習：空間記憶測驗；⑥推理/問題解決：迷宮測驗；⑦社會認知：情緒管理測驗。將評分的粗分轉化成標準T分(均數為50，標準差為10)后進行分析。

2 結 果

2.1 一般資料比較2組性別、年齡和受教育年限等一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，有可比性，見表1。

2.2 精神分裂癥患者外周血單個核細胞TMEVPG1、NRON的表達水平及其診斷價值精神分裂癥組單個核細胞TMEVPG1、NRON的相對表達量分別為(4.80±1.12)和(3.14±1.24)，對照組分別為(2.06±0.89)和(1.67±0.73)，組間比較差異均有統計學意義(P<0.01)。TMEVPG1、NRON診斷精神分裂癥的AUC分別為0.801和0.719，當截斷值為4.15、2.94時，約登指數最大(分別為0.539和0.541)，此時靈敏度分別為80.56%和72.95%，特異度分別為73.33%和81.10%，兩者聯合檢測可將AUC提高至0.854，見圖1。

表1 入組受試者一般資料比較

2.3 精神分裂癥的癥狀嚴重程度和認知功能精神分裂癥患者PANSS量表陽性癥狀評分為(25.60±3.08)分，陰性癥狀評分為(23.14±3.41)分，精神病理癥狀評分為(40.03±4.81)分，總分為(89.13±12.14)分。MCCB測驗評分結果見表2。與對照組比較，精神分裂癥患者信息處理加工速度、注意警覺性、工作記憶、言語學習、視覺學習、推理問題解決和社會認知均較差(P<0.01)。

表2 入組受試者MCCB測驗結果比較分)

2.4 TMEVPG1、NRON與精神分裂癥患者癥狀嚴重程度的關系相關性分析結果顯示，TMEVPG1和NRON水平均與PANSS量表陰性癥狀評分和總分呈正相關(P<0.05)，見表3。

表3 TMEVPG1、NRON與精神分裂癥患者癥狀嚴重程度的關系

2.5 TMEVPG1、NRON與精神分裂癥患者認知功能的關系相關性分析結果顯示，TMEVPG1與精神分裂癥患者信息處理加工速度和工作記憶呈負相關(P<0.05)，NRON水平與注意警覺性呈負相關(P<0.05)，見表4。

表4 TMEVPG1、NRON與精神分裂癥患者認知功能的關系

3 討 論

精神分裂癥嚴重影響了患者的生活質量[13]。隨著全基因組關聯研究的進展，近年來精神分裂癥分子遺傳學基礎的信息激增。越來越多研究顯示，lncRNA參與了精神分裂癥的發生和發展[5,14-15]。lncRNA多位于細胞核，在哺乳動物大腦和基因組中高表達[16]。腦組織和外周血白細胞的基因表達有共同調節通路，腦組織中高表達的lncRNA在外周血中也有明顯表達[17]。通過檢測外周血單個核細胞lncRNA表達水平可以反映腦組織水平變化[17]。本研究采用熒光定量PCR檢測了外周血單個核細胞TMEVPG1、NRON的表達，發現精神分裂癥患者TMEVPG1、NRON表達水平明顯高于健康人。本研究結果顯示，TMEVPG1、NRON表達水平與精神分裂癥患者病情嚴重程度和認知功能有關。

lncRNA與精神分裂癥的發生和發展有關，其機制可能涉及以下幾個方面：①調控與精神分裂癥相關的基因[18]，另外lncRNA異常甲基化會增加精神分裂癥發病風險[19]；②通過介導免疫炎癥反應促進精神分裂癥的發生和發展[9]；③影響大腦結構(如杏仁核和海馬)和神經突觸可塑性[20]?？傊?，lncRNA在精神分裂癥中的作用機制目前尚未明確，值得深入探究。本研究檢測的TMEVPG1、NRON可能是通過影響免疫炎癥參與精神分裂的發生[9]。TMEVPG1可以增強CD4 T淋巴細胞活性，提高干擾素γ水平，參與免疫炎癥性損傷[7]。NRON已被證實可通過介導免疫炎癥，參與某些風濕性疾病的進展[8]。本研究發現，精神分裂癥患者外周血單個核細胞TMEVPG1、NRON呈高表達水平，這與既往報道一致[9]。目前精神分裂癥主要依靠癥狀學進行診斷，缺乏有效的生物學標志物。本研究發現，TMEVPG1、NRON以及兩者聯合診斷精神分裂癥的AUC分別為0.801、0.719、0.854，提示診斷價值較高。lncRNA診斷精神分裂癥的實用性和有效性值得未來深入研究。

免疫炎癥損傷與精神分裂癥中陽性癥狀維度、陰性癥狀維度、認知癥狀維度密切相關，但是與陽性癥狀維度關系不大[21]。本研究顯示，TMEVPG1和NRON水平均與PANSS量表陰性癥狀評分和總分呈正相關，而與陽性癥狀無關，這在一定程度上印證TMEVPG1和NRON可能是通過影響免疫炎癥而發揮作用的。精神分裂癥患者認知功能損傷的研究一直是臨床研究重點，免疫炎癥損傷在認知功能中的作用近年來引起廣泛重視，炎癥損傷可能通過影響五羥色胺水平、神經營養因子和突觸可塑性等影響認知功能[22]。本研究發現，TMEVPG1與精神分裂癥患者信息處理加工速度和工作記憶呈負相關，NRON水平與注意警覺性呈負相關，提示不同lncRNA涉及的認知維度可能不同，這可能與其作用機制不同和精神分裂癥病理機制復雜有關。

本研究的局限性為：①本研究以免疫炎癥損傷為出發點，選擇TMEVPG1和NRON進行研究，但是未直接檢測患者炎癥損傷程度；②未分析TMEVPG1和NRON不同病程階段的表達水平變化；③未對患者進行隨訪，TMEVPG1和NRON與治療應答、預后的關系需要未來進一步分析。

綜上所述，外周血單個核細胞TMEVPG1、NRON的表達與精神分裂癥患者的陰性癥狀及認知功能有關。