聯合激活mTOR和STAT信號通路對脊髓損傷小鼠軸突再生及運動功能的影響

易凌榮，譚波濤，劉媛，殷櫻，虞樂華*

1重慶醫科大學附屬第二醫院康復醫學科，重慶 400010；2陸軍軍醫大學大坪醫院野戰外科研究部，重慶 400042

脊髓損傷(spinal cord injury，SCI)是常見的中樞神經系統(central nervous system，CNS)損傷性疾患，軸突斷裂是其基本病理表現之一，由于成體軸突再生困難，SCI患者難以完全康復[1]。研究發現，調控與生長發育相關的通路可增強成體哺乳動物軸突的內源性再生能力[2-3]，有望成為SCI新的治療策略。哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin，mTOR)可整合神經元活動和各種突觸輸入，調控蛋白質合成，影響細胞的增殖和存活[4-5]。敲除磷酸酶和張力蛋白同源物(phosphatase and tensin homolog，PTEN)可有效激活AKT/mTOR通路，增強神經元內源性再生能力，促進CNS軸突再生[6]；敲除細胞因子信號抑制物3(suppressor of cytokine signaling 3，SOCS3)，解除其對JAK/STAT通路的抑制，可展現出對SCI神經元的保護作用，并可有效增強軸突再生效應[7]。最近研究發現，同時敲除PTEN和SOCS3可顯著促進成體小鼠視神經損傷后的軸突再生[8]。由此推測，聯合調控AKT/mTOR和JAK/STAT信號通路能提升SCI后的軸突再生能力。本研究通過聯合抑制PTEN和SOCS3的表達，探索聯合激活mTOR和STAT通路對成體SCI小鼠軸突再生和運動功能恢復的影響。

1 材料與方法

1.1 主要試劑及儀器 戊巴比妥鈉、多聚甲醛(成都市科隆化學品有限公司)；鹽酸緩沖鹽溶液(PBS，北京中杉金橋生物技術有限公司)；AAV9-U6-PTEN-RNAi-CAG-eGFP、AAV9-U6-SOCS3-RNAi-CAG-mCherry、AAV9-U6-CNO305-CAG-eGFP對照病毒(上海吉凱基因醫學科技股份有限公司)；GFP蛋白一抗(英國Abcam公司)；mCherry蛋白一抗(美國Invitrogen公司)；p-S6蛋白一抗、p-STAT3蛋白一抗(美國CST公司)；DAPI(美國Sigma公司)；GFAP蛋白一抗、生物素化葡聚糖胺(BDA)、Alexa-594 Streptavidin(美國Thermo Fisher公司)；Alex fluor-488偶聯驢抗雞IgG(上海優寧維生物科技股份有限公司)；……