不同輔料寧神靈顆粒多信息梯度薄層質(zhì)量比較

宋長國，安麗娜，蔡金凱，韓治忠，王立偉

（承德燕峰藥業(yè)有限責(zé)任公司，河北 承德 067600）

中藥制劑多信息梯度薄層鑒別，即將中藥指紋圖譜［1-3］的內(nèi)涵引申到薄層鑒別領(lǐng)域，依據(jù)相似相容的溶解原則，將制劑中脂溶性、中極性及水溶性成分按非極性、中極性、極性的順序，在組分、比例、極性不同的梯度展開溶劑中，通過反復(fù)吸附與解吸附，將有檢測信息的大部分有效成分按極性大小在極少數(shù)的薄層板上及多種檢視條件下獲得盡可能多的斑點(diǎn)信息圖譜［4-6］，由此組成從水溶性到脂溶性成分的多信息薄層色譜圖，提供采用同一制備工藝而不同輔料制備的不同規(guī)格的制劑，作為質(zhì)量對(duì)比的依據(jù)。寧神靈顆粒原料藥包括柴胡、黃芩、大黃、半夏（制）、桂枝、甘草、龍骨、牡蠣等。其改輔料前為含蔗糖劑型，服用劑量大［7］；改輔料后為不含蔗糖劑型，服用劑量減?。?］，擴(kuò)大了應(yīng)用人群，給老年患者和糖尿病患者帶來了福音。但僅以原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的2項(xiàng)試管反應(yīng)與常規(guī)檢查［7］無法全面、準(zhǔn)確地反映制劑改輔料和規(guī)格前后質(zhì)量的一致性。本研究中采用薄層色譜法對(duì)不同輔料（含糖型、不含糖型）樣品中脂溶性、中極性和水溶性成分進(jìn)行了檢測與比較。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

KH-100B型超聲波清洗儀（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司）；2F-2型三用紫外儀（上海安亭電子儀器廠）；AX205DU型電子天平（瑞士Mettler Toledo公司，精度為萬分之一）。

1.2 試藥

寧神靈顆粒（承德燕峰藥業(yè)有限責(zé)任公司，含蔗糖型批號(hào)為201607001，201608002，201608003，編號(hào)S1-S3，不含蔗糖型批號(hào)為201608004，201608005，201608006，編號(hào)S4-S6）；環(huán)己烷、乙酸乙酯、甲醇、甲酸、三氯甲烷、濃氨試液均為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 脂溶性成分

取樣品3 g，研細(xì)，分別加甲醇10 mL，超聲（功率為200 W，頻率為50 kHz，下同）處理10 min，濾過，濾液蒸干，加甲醇（無糖型加1 mL，有糖型加0.5 mL）使溶解，即得供試品溶液。吸取上述2種供試品溶液4～6μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸（6∶4∶0.5，V/V/V）為展開劑，展開，取出，熱風(fēng)吹干。置紫外光燈（365 nm和254 nm）下檢視，在2種供試品溶液色譜相應(yīng)位置顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)（圖1 A、圖1 B）；噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈（365 nm）下檢視，在2種供試品溶液色譜相應(yīng)位置顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)（圖1 C）；再將薄層板置暗室中，透過燈光檢視，在2種供試品溶液色譜相應(yīng)位置顯相同顏色的斑點(diǎn)（圖1 D）。

2.2 中極性成分

吸取2.1項(xiàng)下2種供試品溶液各4～6μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液（12∶1∶3∶0.5，V/V/V/V）為展開劑，展開，取出，熱風(fēng)吹干。置紫外光燈（365，254 nm）下檢視，在2種供試品溶液色譜相應(yīng)位置顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)（圖2 A、圖2 B）；噴以5%香草醛硫酸溶液-乙醇（1∶6，V/V），105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，將薄層板置暗室中，透過燈光檢視，在2種供試品溶液色譜相應(yīng)位置顯相同顏色的斑點(diǎn)（圖2 C）。

圖2 中極性成分薄層色譜圖1-3.S4-S6 Test solution 4-6.S1-S3 Test solution A.UV lamps（365 nm）B.UV lamps（254 nm）C.Darkroom light transmission after color renderingFig.2 TLC chromatograms of medium-polar components

2.3 水溶性成分

吸取2.1項(xiàng)下2種供試品溶液各4～6μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液（1∶2∶4∶0.5，V/V/V/V）為展開劑，展開，取出，熱風(fēng)吹干。置紫外光燈（365，254 nm）下檢視，在2種供試品溶液色譜相應(yīng)位置顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)（圖3 A、圖3 B）；噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光及365 nm紫外光燈下檢視，在2種供試品溶液色譜相應(yīng)位置顯相同顏色的斑點(diǎn)（圖3 C、圖3 D）；再將薄層板置暗室中，透過燈光檢視，在2種供試品溶液色譜相應(yīng)位置顯相同顏色的斑點(diǎn)（圖3 E）。

圖3 水溶性成分薄層色譜圖1-3.S1-S3 Test solution 4-6.S4-S6 Test solution A.UV lamps（365 nm）B.UV lamps（254 nm）C.Sunlight after color rendering D.UV lamps（365 nm）after color rendering E.Darkroom light transmission after color renderingFig.3 TLC chromatograms of water-soluble components

3 討論

3塊薄層板、12張色譜圖上，共檢出信息斑點(diǎn)約81個(gè)，涉及30余種中藥化學(xué)成分。在4種檢視條件下，第一塊薄層板共檢出脂溶性信息斑點(diǎn)約28個(gè)，至少為14種化學(xué)成分；第二塊薄層板在3種檢視條件下，共檢出中極性信息斑點(diǎn)約18個(gè)，至少為15種化學(xué)成分；在5種檢視條件下，第三塊薄層板共檢出水溶性信息斑點(diǎn)約35個(gè)，至少為7種化學(xué)成分。表明本抽檢方法雖快速、簡單，但也能獲得較豐富的樣品信息。

對(duì)比顯色前和顯色后紫外光燈（365 nm）下熒光斑點(diǎn)和透過燈光檢視的顏色斑點(diǎn)，從其斑點(diǎn)顏色、強(qiáng)度、大小、比移值（Rf）及個(gè)數(shù)說明這些斑點(diǎn)并非同一化學(xué)成分，雖在薄層板上相互重疊，但在各自檢視條件下卻互不干擾，均能呈現(xiàn)出各自清晰的斑點(diǎn)。利用該特點(diǎn)，大幅提升了檢視信息量，實(shí)現(xiàn)了憑借3塊薄層板、數(shù)十毫升展開劑就可檢測同一供試品溶液從脂溶性到水溶性成分的數(shù)十種成分斑點(diǎn)，不但具有指紋圖譜的質(zhì)量對(duì)比效果，而且斑點(diǎn)顏色各異、清晰，可直觀判斷質(zhì)量的一致性，在制藥行業(yè)的應(yīng)用價(jià)值較高。相較指紋圖譜，該方法更簡便、快捷、高效，成本更低，適用于快速檢查。