肺炎支原體脂質相關膜蛋白誘發THP-1細胞炎癥反應研究

席 月，夏 雯

(1. 江蘇大學 醫學院，江蘇 鎮江 212013； 2. 鎮江高等專科學校 醫藥技術學院，江蘇 鎮江 212028)

肺炎支原體(Mycoplasmapneumonia,Mp)是引起人類原發性非典型肺炎的主要病原體，也是誘發社區獲得性肺炎(Community acquired pneumonia,CAP)的重要病原體，可以造成部分患者重癥支原體肺炎甚至死亡[1]。研究表明，重癥支原體肺炎患者體內存在著大量過度表達的各種促炎細胞因子，如IL-1β，TNF-α和IL-6等，類似于“細胞因子風暴”。但近年來研究發現支原體細胞膜表面含有豐富的脂質相關膜蛋白(Lipid-associated membrane proteins, LAMPs)，LAMPs在支原體黏附和侵入宿主上皮細胞過程中發揮重要作用，并進一步導致宿主細胞受損[2-3]。LAMPs還可以影響巨噬細胞、單核細胞和腦星形膠質細胞功能，從而誘發上述細胞過度表達促炎細胞因子，并引起免疫細胞的壞死或凋亡，導致感染的惡化。但LAMPs誘發巨噬細胞炎癥反應的具體機制尚不清楚。本研究純化LAMPs并刺激人單核-巨噬(THP-1)細胞，通過分析THP-1細胞各種炎癥因子表達以及NF-κB信號通路活化情況，初步揭示肺炎支原體誘發患者嚴重肺損傷機制，為尋找臨床重癥支原體肺炎治療方案提供新思路。

1 材料與方法

1.1 細胞、試劑與儀器

1.1.1 細胞

人單核-巨噬(THP-1)細胞購自上海細胞庫，由本實驗室自行保種和培養。肺炎支原體(M129)標準株由南華大學朱翠明教授惠贈。

1.1.2 試劑

RPMI 1640細胞培養液和胎牛血清購自以色列BI公司。2×Taq PCR預混液、逆轉錄試劑盒、實時定量PCR試劑盒(SYBR Green染料法)、總RNA提取試劑盒均購自南京諾唯贊公司。RIPA裂解液、蛋白酶抑制劑(PMSF)、細胞漿蛋白和細胞核蛋白抽提試劑盒、活性氧檢測試劑盒購自碧云天生物技術公司。……