液基薄層細胞學檢查聯合HPV、P16蛋白免疫組化染色檢測對宮頸癌的篩查價值

楊曉林

（朝陽市中心醫院病理科，遼寧 朝陽 122000）

宮頸癌在我國女性中屬于一種較為常見的惡性腫瘤，其發病率在不斷增高，且呈現出年輕化趨勢，倘若得不到及時有效的治療，會給患者的身體健康造成嚴重影響[1-2]。宮頸癌的進展需要經過長時間癌變階段，為降低宮頸癌的發病率、病死率，通過對宮頸病變患者進行科學的篩查具有重要意義。脫落細胞學檢查，尤其是近些年臨床推廣的液基薄層脫落細胞檢查應用于宮頸癌篩查中臨床意義顯著。但是，單純根據細胞學檢查并不能完善篩查出宮頸癌，仍有少數女性疾病惡化發展為浸潤性宮頸癌。高危型人乳頭狀瘤病毒（HPV）感染是誘發宮頸癌的始動因子，因此加強高危型HPV DNA檢測對于宮頸癌疾病篩查也有顯著意義[3-4]。P16蛋白異常與宮頸上皮內瘤變、宮頸癌發生密切相關，而且隨著病情惡化加重，病情呈動態變化，關于宮頸癌疾病篩查應受到臨床重視[5]。為了探討行之有效的診斷方案，本文以我院近年來收治的宮頸上皮病變患者80例為研究對象，就診斷方案的效果進行了探索，以供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2018年2月至2019年3月間，80例進行TCT和HPV檢測的患者，僅有一項檢查異常患者就進行P16免疫組化染色和陰道鏡下宮頸組織活檢。80例患者其年齡24～73歲，平均（48.50±3.40）歲，其中宮頸接觸性出血25例，宮頸分泌物異常29例，宮頸糜爛、肥大、充血者26例，均為已婚或未婚有性生活史超過3年，全面接受病理學活檢以及陰道鏡檢查，其余細胞學標本重新紙片，用于P16免疫組化染色，剔除合并系統抑制性疾病、妊娠者。

1.2 方法

1.2.1 液基薄層細胞學檢查（TCT）使用取材專用毛刷在宮頸口與黏膜交界位置沿同一方向旋轉2～5圈，然后對毛刷上的細胞進行洗脫，保存在細胞保存液中備用。采用沉降式制片術及巴氏染色技術染色。對于液基薄層細胞學檢測結果的判定，嚴格按照第三版TBS報告系統分類標準，其中NILM：表示無上皮內病變或惡性病變；ASC包括ASC-US和ASC-H，ASCUS：表示意義不明確的非典型鱗狀細胞；ASC-H：非典型鱗狀細胞，不除外高級別鱗狀上皮內病變；LSIL：表示低級別鱗狀上皮內病變；HSIL：表示高級別鱗狀上皮內病變；SCC：表示鱗狀細胞癌。除NILM外，其他檢驗結果均視為陽性。癌前病變：CIN（宮頸鱗狀上皮內瘤變）。

1.2.2 人乳頭狀瘤病毒（HPV）檢測。采用雜交捕獲2代技術（HC-Ⅱ）對細胞學標本進行測試，LV/CO的比值≥1.0，檢測結果為陽性。

1.2.3 P16蛋白免疫組化檢測。把TCT和HPV檢測后剩余標本制成細胞薄片，并采用鏈霉素抗生物素蛋白—過氧化物酶法（S-P法）對P16蛋白進行檢測，使用北京邁新生物技術開發有限公司試劑盒，嚴格按照說明書進行操作。P16蛋白免疫組織化學檢測診斷標準（陽性細胞呈現黃色或棕黃色）：細胞染色為單個，陽性細胞百分比＜5%，檢測結果為陰性；細胞染色為散在或小的細胞團染色，5%≤陽性細胞百分比≤24%，檢測結果為弱陽性；細胞染色為片狀或簇狀細胞染色，25%≤陽性細胞百分比≤50%，檢測結果為陽性；細胞染色為彌漫的細胞著色，陽性細胞百分比＞50%，檢測結果為強陽性。

1.2.4 陰道鏡下活檢。對受試者宮頸可疑發生病變位置進行活檢，倘若鏡下沒有明顯的病灶或者圖像不符合，應對宮頸多點組織進行活檢。活檢標本進行組織學病理診斷。

1.3 觀察指標 ①記錄TCT檢查與陰道鏡活檢診斷結果。觀察HPV檢測與陰道鏡活檢的病理診斷結果。②分析P16蛋白表達與陰道鏡活檢病理診斷結果。記錄TCT檢查、HPV檢測、P16蛋白表達單獨與聯合檢測效能。

1.4 統計學方法 SPSS21.0軟件處理文中數據，無序分類資料經百分比（%）表示，行χ2檢驗；數值變量資料經（）表示，采取t檢驗；P＜0.05為顯著差異。

2 結果

2.1 對比液基薄層細胞學檢查（TCT）與陰道鏡活檢診斷結果 TCT鱗狀上皮細胞異型越明顯，則宮頸病變程度越高。見表1。

表1 對比液基脫落細胞學檢查與陰道鏡活檢診斷結果[n（%）]

2.2 對比人乳頭狀瘤病毒（HPV）檢測與陰道鏡活檢診斷結果 宮頸病變程度越高，HPV檢測的陽性率越高。見表2。

表2 對比人乳頭狀瘤病毒檢測與陰道鏡活檢診斷結果[n（%）]

2.3 對比P16蛋白與陰道鏡活檢診斷結果 隨著病理活檢診斷宮頸病變的程度越高，P16蛋白陽性率越高；同時，把患者進一步分為≤C I N Ⅰ和≥CINⅡ兩組，≤CINⅠ組的P16蛋白表達的陽性率明顯低于≥CINⅡ組（χ2=20.978；P＜0.05），見表3。

表3 對比P16蛋白與陰道鏡活檢診斷結果

2.4 對比3種檢測方式對宮頸病變的診斷效能 陰道鏡組織活檢病理診斷結果顯示：陽性26例（≥CINⅡ），陰性54例（≤CINⅠ）。HPV、TCT、P16聯合檢測的靈敏度、特異性、準確性均高于單獨HPV檢測、TCT檢測、P16檢測。見表4。

表4 對比3種檢測方式對宮頸病變的診斷效能

3 討論

宮頸癌在我國屬于一種較為常見的女性惡性腫瘤，研究表明絕大多數宮頸癌是通過鱗狀上皮內瘤變（CIN）發展而來的。宮頸鱗狀上皮內瘤變（CIN）又稱為宮頸癌前病變，是指患者宮頸鱗狀上皮異型增生，然而又不足以診斷為癌的宮頸上皮異常增殖性病變，具有發展成為惡性腫瘤的潛能，倘若長期存在極易轉變為宮頸癌。目前由于對于宮頸癌的發病機制尚未完全明確，以至于無法對其進行針對性治療[6-7]，但HPV感染，尤其是高危型HPV感染是引起宮頸癌前病變的主要危險因素。據學者[8]研究表明，在宮頸癌病變前階段，倘若進行科學的處理，不但能夠有效控制病情的進一步惡化，同時還有助于治療宮頸病變，從而在較大程度上降低了對患者的不良影響。

液基薄層細胞學檢查（TCT）在臨床上屬于一種經典的宮頸癌篩查技術，該技術在篩查宮頸癌時，具有無創、快速等優點，在較大程度上提高了對宮頸癌早期病變的確診率，所以在臨床上得到了廣泛的應用[9]。在此次研究過程中，液基薄層細胞學檢查與陰道鏡活檢診斷結果，之所以會產生差異，其原因通常是取材方式及細胞形態學觀察兩方面，首先是正確規范的取材，保證獲得足夠有效的細胞；然后是提高細胞形態學觀察準確率。形態學觀察雖然能夠分辨不同時期的宮頸病變，然而由于主觀因素的限制，以至于降低了對病變的診斷率[10]。液基薄層細胞學檢查屬于一種形態學檢查，由于取材的位置、深度、制片方式以及染色水平等因素，極易影響診斷的準確性[11]。倘若僅通過液基薄層細胞學檢查對早期宮頸癌患者進行篩選，極易導致發生假陰性、假陽性等情況，從而降低了診斷的靈敏度，增大了發生誤診、漏診情況的概率。據于樂等[12]學者研究發現，在對早期宮頸癌患者進行診斷時，采用TCT及其聯合HPV、P16蛋白免疫組化染色檢測，能夠提高對疾病的診斷效果。

現代分子生物學研究已經證實，高危型HPV DNA檢測可作為宮頸癌前病變敏感有效的篩查方法。但是，只有高危型HPV持續性感染才會導致宮頸癌及其癌前病變發生，多數患者未高危型HPV一過性感染，這些與宮頸癌發生關系并不密切[13-14]。因此，HPV DNA檢測單獨篩查存在特異性過低的不足，因此不能用于初篩工作中。P16基因也可稱為多瘤抑制因子（MTS1）基因或CDKN2基因，是NK4家族的中藥成員，編碼產物為P16單蛋白。P16基因缺失、突變在腫瘤發生發展中起著重要作用，P16表達陽性率會隨著病情嚴重程度而升高，表達強度從弱變強，這表明P16檢測可作為宮頸癌前病變、宮頸癌的早期篩查指標[15]。HPV是引起宮頸癌的發生的重要病原微生物，特別是當自身免疫能力處于低水平，人們性生活增加、分娩宮頸受損等情況發生時，加之HPV的持續感染，宮頸上皮病變發生的危險性會隨之增加[16]。另外，據何旻等[18]學者調查表明，當機體持續感染高危人乳頭狀瘤病毒后，會導致增加E7蛋白表達，降低Rb的活性，從而進一步激活了P16蛋白的表達。P16基因在臨床上屬于一種多腫瘤抑制因子，其蛋白的表達可能與宮頸上皮瘤變的發生存在較大的關系。所以此次研究通過選取P16染色聯合其他檢測輔助檢查宮頸癌及其早期病變。研究結果證實，3種檢測方式聯合的靈敏性、特異性以及準確性，明顯高于單獨HPV檢測、TCT檢測、P16檢測（P＜0.05）。說明將TCT聯合HPV、P16蛋白免疫組化染色檢測應用于診斷宮頸癌及其早期病變中有價值，深受人們認同。單獨應用TCT檢測宮頸病變，一部分患者可能會出現過度診斷情況，而若僅應用HPV-DNA檢測、篩查宮頸病變，可能會導致一部分低度病變漏診，二者聯合可一定程度提高宮頸病變篩查的敏感度，降低誤診、漏診[19]。雖然聯合應用診斷宮頸病變可提高檢出率，但降低診斷特異度，可能會導致過度診斷治療。結合P16免疫組化檢測，可顯著提高檢測特異度，尤其是診斷CINⅠ及以上病變的敏感度與特異度高。一般臨床中，CINⅠ只需要隨訪，CINⅠ及以上病變需接受積極治療，因此臨床脫落細胞學P16檢測，可提高疾病診斷價值，并用于指導臨床治療[20]。

綜上所述，采用TCT聯合HPV、P16蛋白免疫組化染色檢測，能夠提高患者宮頸上皮瘤變的檢測靈敏度、特異性以及準確度，降低漏診或過度診斷情況，對于宮頸癌的篩查有重要意義，其應用前景廣闊。