ER、DAPK2在妊娠期高血壓疾病胎盤組織中的表達

王滋爍，黃鑫

(錦州醫科大學，遼寧 錦州 121000)

妊娠期高血壓疾病是最常見的妊娠期內科并發癥，我國的發病率達5.22%～5.57%，可以導致胎盤早剝、DIC、胎兒生長受限、胎死宮內等多種嚴重的并發癥，甚至孕產婦及新生兒圍產期死亡。該病的病因與發病機制至今仍未完全闡明[1]。HDCP 患者胎盤功能異常和胎盤血管重塑不足，這很可能是由于滋養層細胞浸潤能力下降導致，并且胎盤同時存在多發鈣化及梗死至胎盤功能嚴重受損。雌激素通過與雌激素受體結合發揮相應效應，在整個妊娠期起著重要的調節作用，并且在胎盤形成過程中起到決定性作用[2-3]。而死亡相關蛋白激酶2對于細胞自噬及氧化應激起到重要作用[4]，而目前在HDCP的胎盤組織中的研究罕有報道。死亡相關蛋白激酶2(DAPK2)屬于絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶家族的蛋白質，在細胞生存、凋亡和自噬等過程中起著重要作用。DAPK2可能通過NF-kB磷酸化來抑制TRAIL受體進而刺激的細胞凋亡，并影響血管內皮細胞功能[5]，在胎盤的血管內皮表達且與內皮損傷相關。但目前在妊娠期高血壓疾病中的作用尚不明確。本文通過檢測雌激素受體、DAPK2在妊娠期高血壓的產婦胎盤中的表達情況，探討雌激素受體、DAPK2在妊娠期高血壓疾病在子癇前期及重度子癇前期中作用的可能機制。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究經我院倫理委員會批準，于2018年6月至2018年12月在錦州醫科大學附屬第一醫院產科行剖腹產分娩的孕婦中選取正常產婦29例，平均年齡(25.83±2.73)歲，平均孕周(39.1±1.53)w為對照組；患妊娠期高血壓疾病產婦43例，其子癇前期患者12例，平均年齡(27.78±3.02)歲，平均孕周(37.3±1.58)w，重度子癇前期患者31例，平均年齡(29.72±4.68)歲，平均孕周(34.8±2.78)w。診斷標準參照《婦產科學》第八版。納入標準：(1)患者均為單胎妊娠，未進入產程；(2)病例均無妊娠并發癥(妊娠期高血壓疾病并發癥除外)及其它原發疾病，兩組患者年齡均在 23～35 歲之間。比較兩組一般資料差異無統計學意義(P>0.05)。

排除標準：(1)合并先天性心臟病、慢性高血壓疾病、慢性腎炎、糖尿病等妊娠合并癥；胎膜早破、臨產；胎死宮內；(2)臨床資料不完善，拒絕參加臨床實驗者；(3)慢性高血壓合并妊娠。

標本采集：產婦娩出胎盤后30 min內采集1.5 cm×1.5 cm×1.5 cm標本組織，取一部分標本迅速用甲醛溶液固定后過夜，準備用于制作石蠟切片并進行免疫組化染色檢測試驗。

1.2 方法

免疫組織化學染色檢測結果判定:標本組織連續切片，切片厚度5 μm，進行免疫組織化學法檢測胎盤組織中雌激素受體、DAPK2的表達情況。結果判定：雌激素受體陽性表達的細胞呈棕黃色，主要定位于胎盤組織細胞的細胞核和細胞質內。DAPK2陽性表達的細胞呈棕黃色，主要定位于胞核和細胞質內。將處理好的標本組織放在光鏡下，用高倍鏡觀察，隨機選取5個高倍鏡視野(400×)，記錄該視野內陽細胞的個數并根據視野內陽性細胞所占的百分比進行分級處理。分級標準如下：0級，(-)陰性，該視野陽性細胞數目為0，細胞內無棕色顆粒出現；1級，(+)弱陽性，該視野內陽性細胞所占的百分比為1%～25%，細胞內出現陽性染色反應；2級，(++)中度陽性，該視野內陽性細胞所占百分比為26%～50%，細胞內出現陽性染色反應；3級，(+++)強陽性，該視野內陽性細胞所占百分比>50%。

1.3 統計學方法

2 結 果

2.1 ER、DAPK2在妊娠期高血壓疾病孕婦的胎盤組織中的表達及定位

本次實驗收集正常足月剖宮產胎盤組織29例，妊娠妊娠期高血壓疾病胎盤組織43例。進行免疫組化實驗，分別觀察ER、DAPK2在胎盤組織中的表達，分析其定位及表達程度。免疫組化結果顯示，雌激素受體在正常妊娠孕婦及患有妊娠期高血壓疾病的孕婦中均有表達，主要定位于滋養葉細胞的細胞核和細胞質內。雌激素受體主要表達于胞核內，見圖1。

A：重度子癇前期胎盤組織中DAPK2低表達；B：正常妊娠胎盤組織中DAPK2高表達

妊娠期高血壓疾病組的表達明顯低于正常對照組(P<0.05)。DAPK2在妊娠期高血壓疾病組、正常對照組中也均有表達，主要表達于滋養葉細胞、血管內皮細胞的胞漿。DAPK2在正常對照組中的表達明顯高于妊娠期高血壓疾病組(P<0.05)。且在相同組織中，DAPK2、ER表達下調一致，見表1。

表1 ER、DAPK2在妊娠期高血壓疾病孕婦的胎盤組織中的表達

2.2 ER、DAPK2在子癇前期重度的胎盤組織中的表達低于子癇前期

本次妊娠期高血壓疾病病例中，收集子癇前期患者胎盤組織12例、重度子癇前期患者胎盤組織31例，對其免疫組化結果分析后發現。隨疾病程度的加重，ER、DAPK2在胎盤組織中的表達明顯差異，且其差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。ER、DAPK2在子癇前期重度的胎盤組織中的表達明顯低于子癇前期的胎盤組織。提示DAPK2可能在妊娠期高血壓疾病的加重過程中起到重要的作用。由于ER、DAPK2均出現疾病加重是表達降低，遂進行了其表達的相關性分析。結果提示ER、DAPK2在子癇前期、子癇前期重度的胎盤組織中的表達程度正相關(R=0.56,P<0.05)。

表2 ER、DAPK2在子癇前期、子癇前期重度的胎盤組織中的表達

2.3 DAPK2的表達與新生兒出生體重、胎盤重量相關

本次研究同時統計了全組患者的新生兒體重、胎盤重量及產后血壓。在妊娠期高血壓疾病組中，將DAPK2表達情況分為兩組。其中高表達組為中度陽性及強陽性(共23例)，低表達組為弱陽性(共20例)。分別比較并分期兩組間新生兒體重、胎盤重量及產后血壓的差異。發現DAPK2高、低表達兩組間表達存在差異，且差異有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 DAPK2高表達與低表達組中新生兒出生體重、胎盤重量、產后血壓生的比較

DAPK2低表達組在新生兒體重、胎盤重量均低于高表達組。提示DAPK2的表達可能與妊娠期高血壓疾病中新生兒生長發育。DAPK2高表達組產后3個月復診時血壓高于低表達組，且差異有統計學意義(P<0.05)，提示圍產期結局不良相關。

3 討 論

妊娠期高血壓是產婦特有的較為常見的一種臨床并發癥，也是孕產婦及圍產期胎兒死亡的主要原因之一，該病嚴重威脅妊娠期母兒生命健康[6]。由于對該病的病因和發病機制仍未明確，目前現有的各種學說均未能完整的解釋該病的機理，所以針對該病仍缺乏有效的預防措施和治療方法。

雌激素是促進女性生殖器官發育的重要性激素，通過與存在于靶器官細胞核上的雌激素受體特異性結合，啟動一系列合成蛋白的反應來發揮其相應的生理作用[7]。由此看來，雌激素要想發揮正常的生理功能不僅需要在血漿中保持正常的濃度，還需要靶器官和靶組織中存在數量足夠的并且具有正常功能的雌激素受體。大量研究表明胎盤氧化應激和細胞凋亡可能與子癇前期的病理生理特征有關[8-9]。DAPK2在凋亡相關疾病中發揮著重要的作用[10]，可能通過NF-kB磷酸化來抑制TRAIL受體進而刺激的細胞凋亡，并影響血管內皮細胞功能[5]3284，在胎盤的血管內皮表達且與內皮損傷相關。由此本文選擇DAPK2與ER聯合檢測嘗試探討其在妊娠期高血壓疾病胎盤病理改變中的作用。DAPK2是死亡蛋白激酶相關家族成員之一，在細胞生存、凋亡和自噬等過程中起著重要作用。本次研究發現在妊娠期高血壓患者與正常產婦的胎盤組織中ER、DAPK2均有表達，但ER主要表達于滋養葉細胞中，而DAPK2在滋養葉細胞中、內皮細胞中均有表達。ER、DAPK2在胎盤組織中的表達有趨向一致性，在妊娠期高血壓疾病的胎盤組織中的表達明顯低于正常組織，且與疾病程度相關。并且ER、DAPK2的表達呈正相關性。本次研究同時證明，隨著DAPK2表達降低新生兒體重、胎盤重量也降低。這可能提示ER、DAPK2的低表達在妊娠期高血壓疾病的進展過程中起到一定的作用，且與預后不良相關。大量研究表明，自噬是一個在分化和發育過程中維持細胞內穩態、循環的過程，研究證實自噬也在子癇前期的胎盤組織中觀察到[11]。DAPK2通過AMPK進而在促進細胞自噬的過程中起到重要作用[12]。雌激素受體分布在眾多系統組織中，但是對于女性孕期雌激素生理起關鍵作用的還是胎盤內的雌激素受體數目。大量的研究結果表明，雌激素對于心腦血管的血壓調節具有保護作用[13]。本研究提示胎盤組織中雌激素受體表達的下降，提示妊娠期高血壓疾病的孕期血壓、心功能預后不良，可能與內皮細胞損傷相關。本次研究結果顯示，雌激素受體、DAPK2表達水平的降低可能與妊娠期高血壓疾病的進展相關。