miRNA-23在多發性子宮肌瘤中的表達及與臨床病理特征的關系

陳華忠，李紅梅

(1.建德市第一人民醫院 檢驗科，浙江 杭州 311600；2.紅安縣人民醫院 超聲科，湖北 黃岡 438400)

子宮肌瘤是婦科臨床最常見的一種良性腫瘤，多見于育齡、喪偶及性生活不協調的婦女[1]。據報道，我國多發性子宮肌瘤在子宮肌瘤中所占比例較高[2]。多發性子宮肌瘤的發生機制尚不清楚，目前普遍認為其發生是由多因素、多環節共同作用，包括正常肌層的細胞突變、性激素及局部細胞因子間的相互作用等[3]。miRNA是近年發現的一類內源性小RNA[4]，參與細胞增殖、分化、代謝等過程，并與腫瘤的發生發展存在一定關系[5]。最近有研究報道，miRNA-23參與乳腺癌、宮頸癌、卵巢癌、子宮內膜癌等多種女性特發性腫瘤的發生發展[6]。然而，迄今國內有關miRNA-23與子宮肌瘤關系的研究較少。本研究分析miRNA-23在多發性子宮肌瘤患者血清及組織中的表達及臨床意義，探討其是否參與調控子宮肌瘤的發生發展過程。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2017年3月—2019年3月建德市第一人民醫院婦科收治的子宮肌瘤手術患者161例，包括多發性子宮肌瘤93例(多發組)、單發性子宮肌瘤68例(單發組)。多發組年齡30～53歲，平均(41.93±10.07)歲；單發組年齡29～52歲，平均(41.76±9.82)歲。納入標準：經超聲或MRI檢查及術后病理確診為單發或多發性子宮肌瘤，無其他婦科疾病，首次接受肌瘤切除術，患者知情同意。排除標準：嚴重的心、肺、肝、腎功能障礙者，血液系統疾病者，免疫系統疾病者及合并其他良、惡性腫瘤者。另納入同期到我院體檢的30名健康女性作為對照組，年齡28～53歲，平均(41.59±8.66)歲，3組的年齡差異無統計學意義(P>0.05)，本研究經倫理委員會批準。

1.2 樣本收集 收集子宮肌瘤患者術前及對照組體檢當日外周靜脈血4～5 mL，室溫靜置30 min，3 000 r/min離心15 min后，將血清轉移至無RNA酶的EP管中，-80℃保存待測，同時收集子宮肌瘤患者術后新鮮子宮肌瘤組織作為待測組織樣本，將樣本立即置入液氮冷凍處理，于-80℃保存待測。

1.3 主要試劑及儀器 miRNA-23引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成；總RNA提取試劑盒、逆轉錄酶試劑盒、實時熒光定量PCR(qPCR)檢測試劑盒均購自大連寶生物有限公司；Nanodrop核酸檢測儀購自Thermo Fisher 公司；實時熒光定量PCR儀購自ABI公司。

1.4 實時逆轉錄PCR檢測 (1)提取血清及經超聲勻漿后的組織樣本中總RNA，DEPC水溶解，應用Nanodrop核酸檢測儀檢測總RNA的純度及濃度，并利用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測所提RNA的完整性。(2)將miRNA-23逆轉錄為cDNA，反應體系：1 μmol/L逆轉錄特異性引物2 μL、總RNA 1 μL、100 mmol/L dNTPs 0.15 μL、10×RT buffer 2 μL、50 U/μL MultiScribeTM逆轉錄酶1.0 μL、20 U/μL RNA酶抑制劑0.2 μL，加DEPC水補至20 μL；反應條件為42℃ 30 min，逆轉錄產物cDNA于4℃保存。(3)擴增miRNA-23 cDNA。(4)采用2-ΔΔCt法計算miRNA-23表達水平，以β-actin為內參，取三個復孔均值作為各樣本的平均Ct 值，先計算ΔΔCt=ΔCt(miRNA-23)-ΔCt(β-actin)，再計算2-ΔΔCt值，即為miRNA-23相對表達量。

2 結果

2.1 血清中miRNA-23表達水平比較 多發組患者血清中miRNA-23的相對表達量(0.82±0.19)低于其他2組，單發組 (1.07±0.35)低于對照組(2.44±0.73)，差異均具有統計學意義(P<0.05)，見圖1。

2.2 組織中miRNA-23表達水平比較 多發組患者子宮肌瘤組織中miRNA-23的相對表達量(0.76±0.24)低于單發組 (0.99±0.27)，差異有統計學意義(P<0.05)，見圖2。

2.3 miRNA-23 水平與多發性子宮肌瘤患者臨床病理特征的關系 比較不同臨床資料多發性子宮肌瘤患者的miRNA-23 水平，結果顯示：不同年齡及是否絕經的多發性子宮肌瘤患者血清及組織中miRNA-23表達水平差異無統計學意義(P>0.05)，但不同肌瘤數量、肌瘤體積、最大肌瘤直徑的患者血清及組織中miRNA-23表達水平差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 血清及組織中miRNA-23 水平與多發性子宮肌瘤患者臨床病理特征的關系Table 1 The relationship between the expression of miRNA-23 in serum and tissues and the clinicopathological features of patients with multiple uterine leiomyoma

3 討論

多發性子宮肌瘤是女性生殖系統最常見的良性腫瘤，多發生于 35～50歲[7]。研究顯示，我國多發性子宮肌瘤的發病呈逐年增加和年輕化的趨勢[8]。以往的研究顯示正常肌層的細胞突變、性激素及局部生長因子間的相互作用與多發性子宮肌瘤的形成和生長有關[9-10]，此外，子宮肌瘤的發病還可能與妊娠史、流產史、遺傳因素等有關[11-12]。然而，目前尚不十分清楚多發性子宮肌瘤發生的確切病因。

miRNA是一類高度保守的內源性小RNA，在細胞內外環境中具有高度的穩定性及組織來源特異性[13-14]，然而，在病理狀態下往往異常表達，可能發揮促進腫瘤發生的作用[15]。近年隨著基因組學的快速發展，學者們對miRNA與肌瘤的關系有了更深的認識[16]。史凡黎等[17]研究結果表明miRNA-23為子宮肌瘤組織中表達顯著失調的 microRNA之一。本研究結果顯示，多發性子宮肌瘤患者血清及肌瘤組織中miRNA-23表達水平顯著下調，表明miRNA-23可能發揮抑癌基因的作用參與多發性子宮肌瘤的發生與發展。這一結果與劉烜等[18]報道的miRNA-23在子宮肌瘤組織中表達異常降低相類似，而且，該研究還發現低表達的miRNA-23可能通過促進孕激素受體 A蛋白的表達而促進子宮肌瘤的發生發展，盡管該研究未涉及多發性子宮肌瘤。

本研究結果還顯示，不同肌瘤數量、肌瘤體積、最大肌瘤直徑的多發性子宮肌瘤患者血清及組織中miRNA-23表達水平差異顯著，表明子宮肌瘤數量越多、體積越大，則其血清及子宮肌瘤組織中miRNA-23的表達水平越低，這進一步提示miRNA-23低表達可能參與多發性子宮肌瘤的發生發展，而且我們還發現miRNA-23的表達不易受個體因素或其他因素影響。

綜上所述，miRNA-23在多發性子宮肌瘤患者血清及組織中表達下調，并與肌瘤數量、體積及最大直徑密切相關，表明miRNA-23低表達可能與多發性子宮肌瘤的發生發展有一定關系。今后，研究者會擴大病例的收集量，對miRNA-23在多發性子宮肌瘤的發生發展中的作用進行更加深入的研究，以期為多發性子宮肌瘤患者的臨床診治提供更有價值的參考依據。