兒童急性早幼粒細(xì)胞白血病的免疫表型特點(diǎn)分析

岳永威，孔令軍，2

（1.蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院血液科，江蘇 蘇州 215000；2.蘇州市吳江區(qū)兒童醫(yī)院，江蘇 蘇州 215200）

急性早幼粒細(xì)胞白血病（acute promyelocytic leukemia，APL）是急性髓系白血病中的特殊類(lèi)型，在我國(guó)APL 約占兒童急性髓系白血病的25%～30%[1]，其發(fā)病的驅(qū)動(dòng)基因?yàn)?5 號(hào)染色體上的PML 基因與17 號(hào)染色體上的RARA 基因產(chǎn)生易位[即t(15;17)(q24.1;q21.1)],形成PML-RARA 融合基因，可使用聚合酶鏈定量監(jiān)測(cè)反應(yīng)（PCR）以證實(shí)疾病負(fù)荷并最終確認(rèn)分子學(xué)緩解。隨著全反式維甲酸及亞砷酸治療作用的證實(shí)及危險(xiǎn)度分層指導(dǎo)下的治療，APL 已成為可治愈的惡性腫瘤。由于其早期出血死亡率較高，盡早診斷、開(kāi)始誘導(dǎo)分化治療是提高治療效果、改善患者預(yù)后的關(guān)鍵。流式細(xì)胞術(shù)簡(jiǎn)便易行、可重復(fù)性強(qiáng)，結(jié)合形態(tài)學(xué)檢查可更可靠地早期診斷APL，在APL 的診斷中具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。本研究回顧性分析我院87 例APL 患兒的免疫分型數(shù)據(jù)，結(jié)合FLT3-ITD突變及初診白細(xì)胞相關(guān)數(shù)據(jù)，分析兒童APL 的免疫表型特點(diǎn)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013 年1 月-2021 年3 月蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院確診的87 例兒童APL 患者，其中男性52 例，女性32 例；年齡2～14 歲，中位年齡9歲。所有患兒均經(jīng)FISH 或PCR 方法檢測(cè)到PMLRARA 融合基因確診，并采用全反式維甲酸聯(lián)合三氧化二砷及蒽環(huán)類(lèi)藥物的三藥誘導(dǎo)方案或ATRA+ATO 雙藥誘導(dǎo)方案，鞏固及中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病預(yù)防及危險(xiǎn)度分組參照《兒童急性早幼粒細(xì)胞性白血病-2010 方案》[2]及《兒童急性早幼粒細(xì)胞白血病診療規(guī)范（2018 年版）》[3]，排除臨床資料不完善者。

1.2 方法 采用流式細(xì)胞術(shù)檢查免疫表型所用抗體，包括CD2、cCD3、CD3、CD7、CD10、CD11b、CD13、CD14、CD15、CD19、CD20、CD22、CD33、CD34、CD36、CD45、CD64、cCD79a、CD123、CD117、MPO、HLA-DR 等，并采用美國(guó)BD 公司生產(chǎn)的BD FACSCablibur 流式細(xì)胞儀檢測(cè)，其中膜抗體表達(dá)率≥20%定義為陽(yáng)性，胞質(zhì)抗體表達(dá)率≥10%定義為陽(yáng)性。臨床危險(xiǎn)度分層：低危者：WBC＜10×109/L 為；高危者：WBC≥10×109/L 或FLT3-ITD 突變者或低危組維持治療前未達(dá)到分子生物學(xué)緩解。分子生物學(xué)方法FLT3-ITD 突變檢測(cè)陽(yáng)性者定義為突變者，陰性者為無(wú)突變者。白細(xì)胞WBC≥50×109/L 者為高白細(xì)胞者，否則為非高白細(xì)胞者。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 26.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以（n）表示，比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher 確切概率檢驗(yàn)，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兒童APL 的免疫表型特點(diǎn) APL 細(xì)胞主要表達(dá)CD13、CD33、CD38、CD64、CD117、CD123、MPO，HLA-DR、CD7、CD2 一般為陰性，見(jiàn)表1。

表1 兒童APL 的免疫表型特點(diǎn)（n）

2.2 高白細(xì)胞、危險(xiǎn)度、FLT3-ITD 突變狀態(tài)與免疫標(biāo)記的關(guān)系 高白細(xì)胞者與非高白細(xì)胞者CD117 陽(yáng)性、CD2 陽(yáng)性比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。高危者與低危者CD34 陽(yáng)性、CD15 陽(yáng)性比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而兩者CD117 陽(yáng)性、CD2 陽(yáng)性比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表3。FLT3-ITD 突變者與無(wú)突變者CD2 陽(yáng)性、CD117 陽(yáng)性、CD11b 陽(yáng)性比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而兩者CD34 陽(yáng)性、CD15 陽(yáng)性比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表4。

表2 高白細(xì)胞與免疫標(biāo)記的關(guān)系（n）

表3 危險(xiǎn)度與免疫標(biāo)記的關(guān)系（n）

表4 FLT3-ITD 突變狀態(tài)與免疫標(biāo)記的關(guān)系（n）

3 討論

流式細(xì)胞術(shù)在急性白血病的診斷過(guò)程中有重要意義，具有簡(jiǎn)便、快速、重復(fù)性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，是傳統(tǒng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)診斷的有力補(bǔ)充和佐證[4-6]。目前分子生物學(xué)技術(shù)應(yīng)用逐漸廣泛，但流式細(xì)胞術(shù)仍是APL 早期診斷的重要手段[7]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兒童急性早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞為CD13、CD33、CD38、CD64、CD117、CD123、MPO，HLA-DR、CD7、CD2 一般為陰性；CD34 陽(yáng)性者36 例，占所有患兒的41.38%，同時(shí)CD11b 在48 例中發(fā)現(xiàn)21 例陽(yáng)性，陽(yáng)性者比例43.75%，與成人APL 陽(yáng)性情況有所區(qū)別[8,9]。FLT3-ITD 突變者與無(wú)突變者CD11b 陽(yáng)性比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示CD11b 陽(yáng)性者發(fā)生FLT3-ITD 的機(jī)會(huì)較高，可能提示不良預(yù)后[10]。

此外，本研究中CD2 陽(yáng)性者共有13 例，占總病例數(shù)的14.94%；高危者與低危者CD2 陽(yáng)性比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示CD2 陽(yáng)性者更有可能分組為高危；另外FLT3-ITD 明確為突變陽(yáng)性病例共19 例，占所有病例數(shù)的21.84%，CD2 陽(yáng)性突變者7 例，無(wú)突變0 例，提示CD2 可能提示APL 患兒不良預(yù)后。馬榮軍等[11]研究發(fā)現(xiàn)，在137 例成人APL病例中CD2 陽(yáng)性者共35 例，治療完全緩解率為96.9%，與陰性者102 例結(jié)果相同，但是早期死亡率（8.6% vs 5.9%）和復(fù)發(fā)率（16.1% vs 4.3%）均高于CD2 陰性者。本研究中CD117 陽(yáng)性者共52 例，占所有患兒的59.77%，其中高白細(xì)胞者3 例，非高白細(xì)胞者49 例；高危者18 例，低危者32 例；FLT3-ITD突變者7 例，無(wú)突變者13 例，提示CD117 陽(yáng)性可能提示預(yù)后較好。既往研究證明[12-15]，APL 化療后CD117 表達(dá)下降、CD11b 表達(dá)增高，可以作為APL細(xì)胞和APL 緩解恢復(fù)期良性髓系細(xì)胞增生的區(qū)別，但是其預(yù)后意義尚待研究。CD34 陽(yáng)性者未發(fā)現(xiàn)在白細(xì)胞水平、FLT3-ITD 突變以及危險(xiǎn)度分組方面具有不良預(yù)后趨勢(shì)，但是CD2 陽(yáng)性可能提示APL 患兒預(yù)后不良，與文獻(xiàn)報(bào)道類(lèi)似[16-19]。CD117 陰性的APL 患兒可能具有更高的白細(xì)胞水平，但具體的預(yù)后意義仍有待進(jìn)一步分析[20，21]。

綜上所述，兒童APL 患兒早幼粒細(xì)胞免疫表型與成人類(lèi)似，但CD34 和CD11b 的表達(dá)可能更高。