對1例血液標本出現冷凝集現象病例的報告

熊穎婕

（佛山市婦幼保健院，廣東 佛山 528000）

冷凝集素是一種能在低于37℃的條件下凝集細菌、紅細胞（red blood cell，RBC）等顆粒性抗原的抗體，其引起凝集反應時的溫度條件通常小于30℃，當溫度上升至37℃時相關凝集現象可消失[1]。本文主要是介紹1 例紅斑狼瘡患者血液標本出現冷凝集現象的具體情況及相應的處理方法。

1 病例資料

患者女，30 歲，發熱4 d（體溫最高39℃），存在畏寒、干咳、咽痛、頭暈、乏力不適等癥狀，自行服用感冒藥后癥狀無好轉，遂至我院就診。后于我院被確診為紅斑狼瘡。

2 實驗室檢查情況

在對該患者進行血常規檢查后，我們發現其RBC 計數極低，其平均紅細胞血紅蛋白量（mean corpuscular hemoglobin，MCH）、平均紅細胞血紅蛋白濃度（mean corpuscular hemoglobin contentration，MCHC）均明顯偏高。對其血液標本的外觀進行檢視發現，試管壁上明顯附著有斑塊樣凝集顆粒，搖動試管即可見到顆粒出現（說明血液標本出現了冷凝集現象）?？梢?，之前測得的RBC 計數不準確，白細胞（white blood cell，WBC）計數及分類結果也可能有誤。因此，我們根據以往的經驗對上述血液標本進行了多種預處理及重新檢測，并最終獲得了令人滿意的檢測結果。具體的處理過程及檢測方法如下：1）將血液標本置于37℃的水浴中，約30 min 后發現其中的凝集顆粒略有解離，遂立即以閉蓋急檢模式進行上機測定。但檢測結果與第1 次檢測的結果類似，肉眼檢視標本外觀，可見血液冷凝集現象未消失。2）將血液標本用37℃的溫生理鹽水稀釋4 倍后立即上機測定，然后將測得檢測結果中RBC、WBC、血紅蛋白（hemoglobin，HGB）、血小板（blood platelet，PLT）的計數結果均×4，所得測定結果仍不理想。3）采用傳統的顯微鏡法對血液標本進行檢測。將血液標本置于37℃的水箱內孵育30 min，用加樣器取孵育好的血液標本10 μL，并迅速將其稀釋于2 mL 的溫生理鹽水（溫度為37℃）中。混合均勻后，滴到計數板上進行計數[2]。在顯微鏡下仍然可見有少許聚在一起的RBC，無法準確計數。用力振搖幾下稀釋后的血液標本，然后再次滴到計數板上觀察。發現RBC 在計數板上分布均勻，隨后采用顯微鏡計數法對RBC進行了計數。在完成RBC 計數后，分別使用WBC 稀釋液和PLT 稀釋液對孵育后的血液標本進行了稀釋，并同樣采用顯微鏡計數法對其進行了WBC 計數和PLT 計數。為了進行WBC 分類計數，我們制作了血涂片。但在將血液標本滴于載玻片上后，其中的RBC 立即出現聚集。因此，我們嘗試先將載玻片放在暖氣片上進行預溫，然后再將血液標本滴在載玻片上，并立即進行推片。雖然涂片上的RBC 仍存在聚集的情況，但能夠清晰地觀察到散在的WBC（見圖1）。隨后我們采用顯微鏡計數法完成了WBC 的分類計數。

圖1 冷凝集血液標本血涂片的瑞-姬染色圖像

3 討論

由血液標本出現冷凝集現象所導致的血常規檢驗無法完成的情況并不少見，相關文獻中多有報道，其解決方法也有多種[3]。針對本病例，我們嘗試用了3 種方法對其血液標本進行了處理和檢測。相關的研究指出，冷凝集現象可對部分血液標本WBC、PLT 計數結果的準確性產生影響[4-7]。在本研究中，經顯微鏡計數法確認，冷凝集現象對儀器法測得的WBC、PLT 計數未產生明顯的影響。有研究表明，冷凝集素效價過高可導致血型鑒定錯誤和交叉配血不合[8-9]，在臨床采供血工作中應對上述情況予以重視。冷凝集素是一種冷反應型抗RBC 抗體，在0 ～4℃時最易與RBC 抗原相結合。正常情況下，其效價＜1:32，不會出現與RBC 的凝集反應[10-11]。冷凝集素綜合征又叫冷凝集素病。此病是一種自身免疫性疾病。此病患者的主要臨床表現為體表皮膚溫度降低時出現肢體末端血管內紅細胞凝集、皮膚微循環障礙、手足紫紺等情況。其血液標本在20℃以下時會出現明顯的冷凝集現象。有研究指出，冷凝集素與RBC 抗原的結合是完全可逆的。將出現冷凝集現象的血液標本置于37℃的水浴箱中，其RBC 凝集情況可自行消失。使用冷凝集現象消失后的血液標本進行上機測定，仍然可以獲得準確的實驗結果。但血液標本的冷凝集現象若非常嚴重（出現RBC 凝集成大團塊現象），僅對其進行水浴處理可能無法完全消除其中RBC 凝集的情況或從水浴箱中將其取出后其中的RBC 會再次迅速凝集。對于存在上述情況的血液標本，需要采用震蕩等方法對其進行處理。相關的研究指出，冷凝集素效價顯著增高主要見于原發性冷凝集素綜合征患者的血液標本，其效價可高達1:1。而冷凝集素效價輕度增高常見于非特異性炎癥性疾病、間質性肺炎、自身免疫性疾病、多發性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤、傳染性單核細胞增多癥等病毒感染性疾病、肺炎支原體肺炎等疾病患者的血液標本[12-14]。本研究中的病例后續接受了多項檢查。血常規檢查提示其存在重度貧血，其進行直接、間接COOMB’S 試驗的結果均為陽性，考慮其存在溶血性貧血。其抗核抗體定量檢測的結果＞500 AU/mL，抗雙鏈DNA 抗體檢測的結果呈陽性，補體C3、C4 的水平較低，尿蛋白檢測的結果呈陽性（2+），最終考慮將其病情診斷為系統性紅斑狼瘡、自身免疫性溶血性貧血。筆者認為，在進行血液檢驗的過程中，尤其是冬季室溫較低時，檢驗人員應注意觀察血液標本是否出現冷凝集現象。一旦發現出現冷凝集現象的血液標本，應先對其進行妥善的處理，然后再對其進行檢測，以確保檢測結果的準確。