腫瘤相關成纖維細胞來源外泌體ciRS-7經miR-7/IGF1R軸促進胰腺癌細胞糖酵解

谷甸娜，陳涵斌，錢方璟，陳揚，葉志強

1.溫州醫科大學附屬第一醫院 腫瘤內科，浙江 溫州 325015；2.溫州醫科大學 第一臨床醫學院，浙江 溫州 325035；3.溫州醫科大學附屬第一醫院 乳腺外科，浙江 溫州 325015

胰腺癌是目前已知惡性程度最高的腫瘤之一，其早期診斷困難，易于侵襲轉移，5年生存率只有5%左右[1]。胰腺癌組織內富含大量的結締組織，血供不足造成缺氧、低營養的微環境，快速增殖的腫瘤更是增加了對物質代謝的需求[2]。胰腺癌具有高水平的糖酵解代謝，這不僅可滿足腫瘤快速增殖時對ATP、生物大分子的需求，而且乳酸可酸化腫瘤微環境促進轉移[3-4]。因此，探索通過阻斷胰腺癌糖酵解來控制腫瘤能量生成正備受關注。

環狀RNA ciRS-7又叫做小腦變性相關蛋白1 反義轉錄物（antisense to the cerebellar degeneration-related protein transcript, CDR1as），包含70多個miR-7的識別位點，可以抑制miR-7活性而提高miR-7靶基因表達[5]。本課題組之前的研究表明，miR-7可通過調控糖酵解代謝而抑制胰腺癌進展[6]。胰腺癌微環境中最顯著的特征是含有密集的腫瘤相關成纖維細胞（cancer associated fibroblasts, CAFs），CAFs對于胰腺癌細胞不是簡單的旁觀者，而是腫瘤發展的關鍵推手[7]。前期預實驗提示，由胰腺癌組織分離的CAFs可分泌大量外泌體，其內具有高水平ciRS-7。本研究旨在探討CAFs經外泌體ciRS-7對胰腺癌細胞糖酵解代謝的影響及其可能機制。

1 材料和方法

1.1 細胞培養及外泌體制備 人胰腺癌細胞PANC-1購自中國科學院（上海）；胰腺癌CAFs取自手術采集的新鮮胰腺癌組織，用差速貼壁法分離、純化后獲得胰腺癌CAFs，并進行細胞鑒定。PANC-1、CAFs細胞培養于含10%去外泌體胎牛血清的DMEM培養基中，置于37 ℃、5% CO2培養箱中培養，待細胞融合至75%～80%時，用胰酶消化、傳代培養。……