亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態性對胃癌化療患者治療療效及預后的影響

劉 暢，任鐵軍，王麗娟，侯建峰，秦愛英

洛陽市中心醫院腫瘤三病區，河南 洛陽 471000

消化道腫瘤發病率及死亡率逐年上升，成為嚴重威脅人類生命健康的常見惡性腫瘤，其中胃癌為危害健康的第二大腫瘤。臨床目前治療胃癌的主要方式為手術、放化療等，首選方式為手術治療，但部分患者確診時已錯過手術最佳時間，故對無法手術患者，選用何種更優方式治療極為重要［1］。氟尿嘧啶類藥通過抑制胸腺嘧啶核苷酸以抑制合成DNA，具有抗代謝抗腫瘤作用。5-氟尿嘧啶（5-FU）是目前臨床治療實體瘤的氟尿嘧啶類藥物，特別對食管癌、結直腸癌及胃癌等消化道腫瘤使用較多。亞甲基四氫葉酸還原酶(methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR) 為葉酸代謝關鍵酶，經研究顯示MTHFR 基因具有多態性，其中最常見為C667T，667 位點C-T 改變能顯著降低該酶活性，提高體內5，10-MTHFR 水平，從而增加5-FU 抗腫瘤活性。二氫嘧啶脫氫酶（DPD）是5-FU 代謝的限速酶，其活性與5-FU 合成代謝及核苷酸類似物產生量密切相關［2］。卡培他濱為5-FU 前藥，目前應用于晚期胃癌、結直腸癌等腫瘤治療。為此，本研究探討了MTHFR 基因多態性對胃癌化療患者治療療效及預后的影響，旨在為臨床治療提供參考依據，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016 年1 月—2018 年12 月期間洛陽市中心醫院收治的300 例胃癌患者。納入標準：經病理學確診為胃癌［3］者；錯過手術最佳時機而選擇化療者；經CT 檢查可觀測到病灶者；接受基因檢測者；自愿參與本試驗并簽署知情同意書者。排除標準：近期接受其他藥物化療者；合并肝腎等重要臟器疾病者；精神疾病及溝通障礙者；依從性差者。納入患者中男性183例，女性117例；年齡為31～76 歲，平均年齡為（52.19±10.26）歲；病灶轉移：淋巴結81 例，肝臟41 例，肺15 例，肝臟及淋巴結31 例，其他132例。

1.2 方法

樣本收集及基因檢測分析［4］：化療前抽取患者靜脈血置于乙二胺四乙酸鈉抗凝管中，將患者血液樣本用氯化銨進行裂解，靜置5 min，離心機用3 000 r/min 速度將其離心5 min，去除上清液并再次重復上述步驟，保留管底白細胞。向含有白細胞離心管中加50 μL 核酸純化試劑，根據待測基因位點向白細胞中加相應測序試劑，后用熒光檢測儀進行檢測。提取DNA，對SNP位點所在片段進行PCR擴增，PCR 系統設置：95 ℃變性15 min，進行25 個循環，每隔循環有3 個溫度，94 ℃變性30 s，59 ℃和72 ℃各變性1 min，于72 ℃延伸7 min 后放置PCR 儀器中反應。取2 μL 反應物于3.0%瓊脂糖膠中電泳，用連接酶反應檢測其產物：在離心管中加100 μL 緩沖液、5 μL 連接酶、695 μL 去離子水進行充分混勻并離心，取9 μL 分裝置于200 μL PCR 反應管中并加入1 μL 反應產物。在PCR系統中95 ℃進行2 min 變性，共335 個循環，設置2 個溫度，94 ℃變性30 s，60 ℃變性2 min，將反應管放置PCR儀器中進行連接反應。取1 μL 連接產物、熒光標記分子量、去離子甲酰胺上樣液進行混合，在95 ℃中變性2 min，再放置冰中驟冷，用5%聚丙烯酰胺、5 μmol/L 尿素在3000 V 中電泳2.5 h，收集數據并分析基因型。患者使用5-FU 聯合卡培他濱方案進行化療，5-FU 劑量為350 mg/m2，卡培他濱為825 mg/m2，均靜脈滴注，以21 d 為一療程，兩個療程后評估患者治療效果。

1.3 觀察指標

根據患者臨床癥狀分為完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、穩定（SD）和進展（PD）四個程度評估療效，有效率=（CR+PR）/例數×100%。觀察化療期間患者出現血液及消化系統障礙等不良反應情況，記錄發生例數。

1.4 統計學方法

數據采用SPSS 22.0軟件進行統計分析研究，基因符合Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗（P＞0.05）；有效率及不良反應發生率用（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，Fisher精確檢驗，以P＜0.05表示數據比較結果差異有統計學意義。

2 結果

2.1 基因檢測結果

根據基因檢測結果將患者分為A 組、B 組、C 組、D組，A組DPD酶活性低且MTHFR基因發生C-T突變，共72例（24.00%）；B 組DPD 酶活性低且MTHFR 基因未發生C-T突變，共76例（25.33%）；C組DPD酶活性高且MTHFR基因基因發生C-T突變，共74例（24.67%）；D組DPD酶活性高且MTHFR基因未發生C-T突變，共78例（26.00%）。

2.2 不同基因化療療效比較

A 組、B 組、C 組、D 組化療有效率分別為54.17%、39.47%、40.54%、32.05%；A 組有效率高于B 組、C 組、D組，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 不同基因化療療效比較

2.3 不同基因化療不良反應比較

A組、B組、C組、D組不良反應發生率分別為20.83%、47.37%、52.70%、71.79%；A組不良反應發生率低于B組、C組、D組，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 不同基因化療不良反應比較

3 討論

胃癌等多數惡性腫瘤患者死亡的主要原因為病灶復發與轉移，大部分患者行根治術后仍發生腫瘤復發或轉移，對不良預后的胃癌患者輔助化療為降低其復發率的最佳治療方式。5-FU 在臨床中普遍應用，但個體間敏感性、療效和毒性反應差異引起廣泛關注。隨著醫療科技進步，卡培他濱作為新型化療藥物應用于臨床，為5-FU 前藥，其療效不亞于5-FU，是目前治療消化道腫瘤的常用藥物。

DPD 酶多分布于肝臟及外周血單核細胞，腫瘤細胞和炎性組織中也有少量分布，為5-FU 代謝失活的限速酶，其活性大小決定了5-FU 進入代謝和產生核苷酸類似物含量。研究顯示［5］，當DPD 酶缺乏活性易阻礙5-FU 體內清除，延長半衰期，進而機體出現毒副作用。DPD 酶活性高或阻止表達量多時，患者對5-FU 敏感性差，療效不佳且預后差。吳沛鴻，徐玲［6］研究發現直腸癌體內DPD 低表達患者使用卡培他濱聯合奧沙利鉑療效及遠期生存優于DPD 高表達患者。該研究中DPD 表達對使用5-FU 患者無顯著差異，但療效及生存方面比較，DPD 高表達患者差于低表達患者。MTHFR 為參與5-FU 合成代謝的關鍵酶，產生于MTHFR 基因編碼。葉酸代謝過程中，MTHFR 將5,10-MTHFR 轉化為5-MTHFR，參與蛋氨酸循環及多種基因DNA 甲基化。5-FU 體內轉化后與胸苷酸合成酶（TS）、5,10-MTHFR 結合成穩定三元共價物，干擾DNA 合成及修復而發揮療效。研究顯示［7］，MTHFR 基因為多態性，C677T 為其最常見多態，即在MTHFR 位點C-T 變化，降低酶活性，提高體內5,10-MTHFR 水平，有增強5-FU 抗腫瘤作用。MTHFR 基因C677T 多態性易影響葉酸濃度及其細胞中分布，并改變細胞生長及機體對化療敏感性［8］。本研究結果顯示，A 組DPD 酶活性低且MTHFR 基因發生C-T 突變，共72 例；B 組DPD 酶活性低且MTHFR 基因未發生C-T 突變，共76 例；C 組DPD 酶活性高且MTHFR 基因基因發生C-T 突變，共74 例；D 組DPD 酶活性高且MTHFR 基因未發生C-T 突變，共78 例。根據化療結果，A 組療效高于其余三組，且不良反應發生率最低，說明DPD 酶低活性表達且MTHFR 位點C-T 發生變化患者對5-FU 及卡培他濱敏感及耐受性高，藥物在其體內利用率高，有效率高。

綜上所述，通過檢測胃癌患者體內DPD 酶活性及MTHFR 基因多態性，預測不同基因型患者化療藥物敏感性及耐受性，在疾病初期為患者制定個體化給藥方案，可有效提高治療有效率并減少不良反應，預后較好，值得推薦。