乳腺癌超聲彈性成像評分與免疫組化指標表達水平相關性分析

白玲嬌，陳小軍，王 婷

(延安市人民醫院超聲診斷科，陜西 延安 716000)

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤，其發生發展過程中，不同類型患者的發病原因、臨床病理特征、治療方式和預后均存在巨大差異[1]。早期確診及疾病類型分析是影響治療效果和生存時間的關鍵因素。近年來，隨著有關乳腺癌分子生物學及個體精準化治療的快速發展，以基因特性為基礎的分子分型及免疫組化分析在乳腺癌診療中的作用越來越受重視[2]，但基因特性分析和免疫組化指標測定材料獲取、處理等過程繁瑣，費用高，可重復性差。越來越多學者嘗試通過分析患者影像學特征，預測乳腺癌患者免疫組化表達特性和分子分型[3-4]。超聲彈性成像技術主要依據不同組織硬度差異，分析在外界刺激下組織所呈現出的彈性特性，從而客觀定量評估組織特性的超聲檢查方式，具有無創、便捷、檢出率高和可重復性強等優勢[5]。以往報道均證實，超聲彈性成像技術能全面評估腫瘤組織硬度，在乳腺影像報告和數據系統4類乳腺癌良惡性鑒別診斷中獨具優勢，從而為病情判斷和治療提供依據[6-7]。但關于超聲彈性成像評分是否可用于乳腺癌免疫組化指標表達特性和分子分型的預測報道較為少見。鑒于此，本研究就超聲彈性成像評分與乳腺癌免疫組化指標表達水平的相關性進行了分析，以期為尋求無創性乳腺癌生物學特性反應體系提供更多依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2018年6月至2020年12月在延安人民醫院就診的乳腺癌疑似病例86例(96個乳腺腫塊)患者臨床資料為研究對象。病例納入標準：≥18歲，初次就診；超聲檢查前未接受穿刺活檢，且未接受放療、化療等腫瘤相關治療；均接受超聲彈性成像檢查和腫瘤病理檢查；臨床影像學和病理學檢查等資料完整。排除標準：無法配合檢查或乳腺內存在假體；腫塊緊鄰部位存在瘢痕；處于妊娠期；合并其他部位腫瘤。患者年齡29～67歲，平均(47.25±7.35)歲；腫塊大小4.1～42.6 mm，平均(17.33±5.17)mm；病理檢查結果：良性腫塊27個，惡性腫塊69個。

1.2 研究方法

1.2.1 超聲彈性成像：使用GE LOGIO E9彩色超聲診斷儀，使用高頻探頭對所有病灶區域進行縱、橫、斜等多方位探查，探頭頻率設定為5～15 MHz，首先，選用常規超聲模式探查可疑病灶大小、形態、回聲和血供等情況；然后，調整為彈性成像程序，選擇實時雙幅模式，盡量保持探頭垂直于皮膚，通過輕壓-解壓的手法，調控壓放力度和檢測頻率，確保顯示屏中所示質控量化參數品質因數(Quality Factor，QF)≥60，并調整取樣框，保證取樣框內包含乳腺腫塊和其周圍正常組織，且感興趣區域盡量位于取樣框中心。

1.2.2 免疫組化：手術或穿刺所取組織材料置于pH6.0，濃度為0.01 mmol/L的檸檬酸緩沖液中，96 ℃加熱10 min；然后，加入濃度為30%的過氧化氫甲醇溶液，恒溫培養30 min后，加入二氨基聯苯胺(Diaminobenzidine，DAB，上海一基)作為一抗，于4 ℃下恒溫孵育過夜；隨后，加入雌激素受體(Estrogen receptor，ER)、孕激素受體(Progesterone receptor，PR)、人類表皮生長因子 2(Human epidermal growth factor receptor-2，HER-2)和Ki-67單克隆抗體(美國Sigma公司生產)作為二抗，放置于室溫下孵育1 h；最后，采用DAB顯色，蘇木素復染細胞核，封片。

1.3 觀察指標

1.3.1 超聲彈性成像評分：超聲彈性成像系統中彈性小的組織受壓后會出現較大為宜變化，圖像顯示為紅色，反之為藍色[8]。采用改良超聲彈性成像5分法評估疑似病灶的良惡性：成像顯示病灶整體或大面積呈綠色=1分，成像顯示病灶中心區藍色、周邊區域為綠色=2分，病灶內藍綠相間，面積比接近1比1=3分，病灶整體呈藍色，或內部散布少許綠色=4分，病灶區和周圍均藍色，內部伴有或不伴有綠色=5分，超聲彈性成像評分≥4分判斷為惡性，否則為良性病灶[9]。

1.3.2 免疫組化結果判讀：邀請2名具有豐富經驗的病理分析師進行閱片：腫瘤細胞核染色棕黃色顆粒占比≥10%，記為PR、ER陽性表達；染色陽性細胞占比≥14%，判定為Ki-67抗原高表達，否則為Ki-67低表達狀態[10]；細胞膜分子染色棕黃色或黃色為陽性，分別記為0、+、、，其中0、+記為HER-2陰性，記為HER-23陽性，則需進一步進行原位雜交基因擴增驗證，基因擴增者為陽性，否則為陰性[11]。依據免疫組化指標表達水平，對惡性病灶進行分子分型：HER-2陰性、ER陽性和(或)PR陽性、Ki-67表達<14%為Luminal A型；HER-2陰性，ER陽性，同時滿足PR陰性、Ki-67高表達中任意一項，或HER-2和ER表達均陽性，PR和Ki-67任一水平為Luminal B型；HER-2、PR、ER均陰性為Basal-like型[12]。

2 結 果

2.1 超聲彈性成像評分在乳腺腫塊良惡性診斷中的價值 見表1。經超聲彈性成像評分判定為良性腫塊34個，惡性腫塊62個。以病理診斷結果為金標準，超聲彈性成像評分判斷惡性乳腺腫塊的靈敏度為86.96%(60/69)，特異性為92.59%(25/27)，判斷符合率為88.54%(85/96)。

表1 超聲彈性成像評分判斷腫塊良惡性的價值(例)

2.2 超聲彈性成像評分與乳腺癌患者免疫組化指標相關性單因素分析 見表2。免疫組化PR陰性、HER-2陰性和Ki-67抗原高表達惡性腫瘤病灶的超聲彈性成像評分顯著高于PR陽性、HER-2陽性和Ki-67抗原低表達，差異具有統計學意義(P<0.05)；免疫組化ER陽性與ER陰性及不同分子分型腫瘤病灶間的超聲彈性成像評分間比較，差異無統計學意義(均P>0.05)。

表2 超聲彈性成像評分與乳腺癌患者免疫組化指標相關性單因素分析

2.3 超聲彈性成像評分與免疫組化指標多元線性回歸分析 見表3。將結果2中具有統計學意義的免疫指標作為自變量，超聲彈性成像評分作為因變量，實施多元性回歸分析，結果顯示，超聲彈性成像評分與免疫組化HER-2和Ki-67抗原表達情況間存在線性相關性，標準化回歸系數β為0.376、0.316(均P<0.05)。

表3 超聲彈性成像評分與免疫組化指標多元線性回歸分析

3 討 論

2018年Globocan數據顯示，當年全球新發女性乳腺癌208.9萬，死亡約62.7萬，發病率和病死率均位居女性惡性腫瘤之首位。目前，雖然針對乳腺癌的研究較多，但關于其具體發病機制仍未完全明確，臨床仍有60%左右患者未表現出明顯危險因素[7]。但近年來針對癌癥生物基因及免疫組化的相關研究提示，癌變的發生往往會引起機體免疫組化指標的異常變動，同時，癌變所致的炎癥因子、腫瘤細胞因子等異常表達也會進一步刺激癌癥細胞的增殖。臨床積極開展生化指標研究，可為治療方案確定及預后預測提供重要指導。但生化指標測定過程較為繁瑣，且某些指標測定試劑或試劑盒費用高，導致其臨床應用價值受一定限制。

報道顯示，乳腺腫瘤良惡性及惡性程度均與組織硬度密切相關，惡性腫瘤病灶硬度約為良性病灶的2～3倍[13]。因此，針對腫瘤硬度的定量分析可為疾病類型判斷及預后分析提供更多有用信息。彈性成像指對目標檢測部位施加一項刺激，目標組織在此刺激作用下會做出滿足生物力學和彈性力學的反應，從而客觀準確的反應目標組織硬度，顯著提高其在乳腺癌診斷中的準確性[6,14]。彈性成像評分屬于超聲彈性成像技術的量化指標之一，可較為準確的反應正常組織及病變組織間的相對硬度，惡性腫塊質地較硬，彈性形變能力小，因此彈性成像評分較高；良性腫塊質地柔軟，彈性評分相對較低，良惡性腫塊在硬度和組織彈性方面均存在較大差異，故臨床可借助彈性成像評分對目標組織進行量化評估，為其良惡性鑒別診斷提供依據[15]。本研究納入的96個疑似乳腺癌腫塊經超聲彈性成像評分判定為良性腫塊34個，惡性腫塊62個，以病理診斷結果為金標準顯示，超聲彈性成像評分判斷惡性乳腺腫塊的靈敏度為86.96%，特異性為92.59%，判斷符合率為88.54%，與王凹弟等[9]報道結果基本一致。證實，超聲彈性成像評分法在乳腺癌早期診斷中具有良好應用價值。目前雖關于彈性成像評分在乳腺癌診斷中的應用較多，但關于其評分是否能一定程度上反應局部生化指標表達情況，臨床尚未明確。

乳腺癌屬于激素依賴性(ER、PR)惡性腫瘤，其發生發展與機體內雌激素表達密切相關。PR是雌激素與其受體結合誘導分泌。HER-2作為乳腺癌和胃癌等預后判斷的重要免疫組化指標，其過表達會導致患者臨床特征及生物學行為出現特殊性，主要表現為腫瘤細胞增殖活躍，細胞代謝所需能量和氧氣不足；刺激局部鈣質分泌，導致腫瘤內發生鈣化，腫塊硬度增大[16]；同時有研究證實，HER-2過表達能上調乳腺細胞血管生成相關因子表達，促進乳腺腫塊內新生血管生成和腫瘤細胞增殖，從而增加腫塊硬度[17]。Ki-67可表達于細胞增殖的各個時期，但在細胞靜止期G0期不表達，故其高表達則表示局部細胞處于增殖活躍期，局部細胞快速增殖，并持續向胞外基質侵襲黏附，導致胞外基質黏連蛋白結構、功能異常，促使腫塊與周圍組織黏連，最終導致腫塊彈性下降[18-19]。本研究通過單因素對比和多元線性回歸分析顯示，免疫組化PR陰性、HER-2陰性和Ki-67抗原高表達惡性腫瘤病灶的超聲彈性成像評分顯著高于PR陽性、HER-2陽性和Ki-67抗原低表達，超聲彈性成像評分與HER-2和Ki-67抗原表達情況間存在線性相關性(β=0.345、0.376、0.316)，提示乳腺組織中PR、HER-2和Ki-67抗原表達均會對超聲彈性成像評分造成影響。

綜上所述，超聲彈性成像評分與乳腺癌免疫組化指標HER-2和Ki-67抗原表達情況存在相關性，故一定程度上可作為反映乳腺癌病灶生物學特性的影像學指標，為乳腺癌診治及預后判斷提供參考。