活動(dòng)期肺結(jié)核患者血清淀粉樣蛋白4、凝溶膠蛋白檢測(cè)及臨床意義

龐 暉，王 麗，李 娜，孫宏磊

(陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，陜西 咸陽(yáng)712000)

肺結(jié)核是經(jīng)呼吸道傳播的慢性傳染性疾病，曾被稱為“白色瘟疫”。今年來(lái)，隨著居住環(huán)境的破壞，結(jié)核病發(fā)病率居高不下，仍是危害人類(lèi)健康的公共衛(wèi)生和社會(huì)問(wèn)題。2017年，我國(guó)得到確診結(jié)核病患者達(dá)88.9萬(wàn)名。世界衛(wèi)生組織指出，雖然全球在預(yù)防減少肺結(jié)核病發(fā)生方面取得重大進(jìn)展，但仍有部分患者未得到有效診斷，最終導(dǎo)致的疾病快速傳播[1]。由此可見(jiàn)，提高肺結(jié)核臨床診斷效率，對(duì)于實(shí)現(xiàn)肺結(jié)核控制的全球性戰(zhàn)略目標(biāo)，降低其發(fā)病率至關(guān)重要。痰涂片操作快速簡(jiǎn)單，檢測(cè)價(jià)格低廉，是肺結(jié)核臨床診斷的傳統(tǒng)方法，但越來(lái)越多的研究證實(shí)，其對(duì)患者體內(nèi)病原菌數(shù)量有一定要求，特異性和敏感性均較差，容易出現(xiàn)漏診[2]。T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)(T cell spot test，T-STOP.TB)雖相對(duì)靈敏度較高，但價(jià)格昂貴，限制了其臨床推廣應(yīng)用。近年來(lái)，血清蛋白組技術(shù)的快速發(fā)展為各類(lèi)復(fù)雜性疾病的診斷提供了許多新的契機(jī)。血清淀粉樣蛋白4(Serum amyloid A4，SAA4)是肝臟組織內(nèi)產(chǎn)生的急性期相蛋白，在機(jī)體遭受感染或發(fā)生炎癥時(shí)，其表達(dá)水平可升高千倍，故可用于多種疾病的臨床診斷中。以往有研究顯示，肺損傷患者體內(nèi)SAA4水平明顯升高[3]。凝溶膠蛋白(Gelsolin)是機(jī)體內(nèi)重要肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白，具有在控制肌動(dòng)蛋白結(jié)構(gòu)、細(xì)胞程序性死亡等方面發(fā)揮重要作用。以往重癥肺炎預(yù)后診斷中的研究證實(shí)，重癥肺炎死亡患者體內(nèi)Gelsolin水平相較于存活者顯著下降[4]。提示，Gelsolin可作為肺部疾病診斷的潛在血清標(biāo)志物。本研究對(duì)SAA4和Gelsolin兩種潛在血清標(biāo)志物在肺結(jié)核患者中表達(dá)水平及臨床意義進(jìn)行了測(cè)定分析。現(xiàn)將分析結(jié)果總結(jié)如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2018年5月至2020年5月本院收治的結(jié)核病患者89例為研究對(duì)象。病例納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《肺結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)(WS 288-2017)》[5]和《結(jié)核病分類(lèi)》[6]中相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)；②年齡≥18歲；③漢族；④初次診斷。排除標(biāo)準(zhǔn)：①入院前使用過(guò)抗生素、激素和免疫制劑治療；②合并肺炎、矽肺、惡性腫瘤等非肺結(jié)核性肺部病變；③合并糖尿病或其他免疫性疾病；④?chē)?yán)重肝腎功能障礙。選擇同期進(jìn)行健康體檢者50例為對(duì)照組。研究組男52例，女47例；年齡26～65歲，平均(45.49±10.68)歲。對(duì)照組男30例，女20例；年齡28～63歲，平均(45.66±10.61)歲。兩組性別、年齡等一般資料比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 研究方法

1.2.1 血清指標(biāo)測(cè)定:兩組受試者在入組后次日清晨空腹?fàn)顟B(tài)下，采集其時(shí)靜脈血液5 ml，離心，分離血清，-80 ℃保存。免疫透射比濁法測(cè)定血清C反應(yīng)蛋白(C reactive protein，CRP，試劑盒由合肥萊爾生物科技有限公司提供)；酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定紅細(xì)胞沉降率(Erythrocyte sedimentation rate，ESR，試劑盒由武漢博士康生物工程有限公司提供)；雙抗夾心法測(cè)定兩組受試者血清SAA4水平(試劑盒由武漢博士康生物工程有限公司)；酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血清Gelsolin水平(試劑盒由江蘇江萊生物技術(shù)有限公司提供)；儀器選擇Siemens-ADVIA 2400型全自動(dòng)生化分析儀。

1.2.2 分析方法:①依據(jù)研究組患者是否并發(fā)肺外結(jié)核、是否合并糖尿病，將入選者分為單純肺結(jié)核、合并肺外結(jié)核[7]和合并糖尿病者[8]，對(duì)比分析不同病癥患者血清CRP、ESR、SAA4和Gelsolin水平變化趨勢(shì)；②依據(jù)患者入院時(shí)病情嚴(yán)重程度將研究組入選者分為輕癥(52例，結(jié)核病灶呈點(diǎn)狀或索條狀，未形成空洞，病灶≤2個(gè)肺野)和重癥(37例，結(jié)核病灶片狀，存在壞死、空洞等病變，病灶≥3個(gè)肺野)[9]，對(duì)比分析不同病情患者血清CRP、ESR、SAA4和Gelsolin水平。

2 結(jié) 果

2.1 兩組血清CRP、ESR、SAA4和Gelsolin水平比較 見(jiàn)表1。與對(duì)照組比較，研究組患者血清CRP、ESR、SAA4水平明顯升高，Gelsolin水平明顯下降(均P<0.05)。

表1 兩組血清CRP、ESR、SAA4和Gelsolin水平比較

2.2 不同病癥肺結(jié)核患者血清CRP、ESR、SAA4和Gelsolin水平比較 見(jiàn)表2。單純肺結(jié)核、合并肺外結(jié)核和合并糖尿病患者血清CRP、ESR、SAA4和Gelsolin間差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)，研究組合并肺外結(jié)核和合并糖尿病患者血清CRP、ESR、SAA4水平明顯高于單純肺結(jié)核患者，Gelsolin水平明顯低于單純肺結(jié)核患者(均P<0.05)；但合并肺外結(jié)核、合并糖尿病患者血清各指標(biāo)間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。

表2 不同病癥肺結(jié)核患者血清CRP、ESR、SAA4和Gelsolin水平比較

2.3 不同病情肺結(jié)核患者血清CRP、ESR、SAA4和Gelsolin水平比較 見(jiàn)表3。肺結(jié)核重癥患者血清CRP、ESR、SAA4水平明顯高于輕癥患者，Gelsolin水平明顯低于輕癥患者(均P<0.05)。

表3 不同病情肺結(jié)核患者血清CRP、ESR、SAA4和Gelsolin水平比較

2.4 血清SAA4、Gelsolin水平與CRP、ESR相關(guān)性 見(jiàn)表4。Pearson相關(guān)系數(shù)分析顯示，肺結(jié)核患者血清SAA4與血清CRP、ESR水平顯著正相關(guān)，Gelsolin則與之顯著負(fù)相關(guān)(均P<0.01)。

表4 血清SAA4、Gelsolin水平與CRP、ESR相關(guān)性

2.5 血清SAA4和Gelsolin水平診斷肺結(jié)核的效能分析 見(jiàn)表5。ROC曲線分析顯示，血清SAA4和Gelsolin診斷肺結(jié)核的AUC均大于血清CRP和ESR，而SAA4與Gelsolin聯(lián)合診斷的效能明顯高于單一指標(biāo)。

表5 血清SAA4和Gelsolin水平診斷肺結(jié)核的效能分析

3 討 論

肺結(jié)核是結(jié)核分枝桿菌感染所致的呼吸系統(tǒng)傳染性疾病，活動(dòng)期傳染性最強(qiáng)。因此，及時(shí)發(fā)現(xiàn)并治療對(duì)于控制疾病傳播具有重要臨床意義。傳統(tǒng)的依靠痰培養(yǎng)診斷肺結(jié)核的周期較長(zhǎng)，通常需要2～8周，診斷時(shí)效性較差。結(jié)核分枝桿菌侵入人體呼吸系統(tǒng)，刺激宿主細(xì)胞發(fā)生復(fù)雜性生化反應(yīng)，影響機(jī)體內(nèi)穩(wěn)態(tài)和對(duì)病原菌的清除功效。越來(lái)越多研究證實(shí)，在感染性疾病診斷中可依靠宿主體內(nèi)細(xì)胞因子表達(dá)水平變化進(jìn)行判斷[10-11]。

CRP是肝臟組織釋放的急性時(shí)相蛋白，機(jī)體受炎癥刺激4～6 h后其表達(dá)水平顯著升高，是臨床診斷感染性疾病的常用生化指標(biāo)。ESR是指紅細(xì)胞在靜止?fàn)顟B(tài)下的下沉速率。正常情況下，紅細(xì)胞膜表面因負(fù)電荷存在而分散懸浮下降；但在機(jī)體發(fā)生感染或其他器質(zhì)性變化時(shí)，紅細(xì)胞表面帶電情況發(fā)生變化，導(dǎo)致細(xì)胞間排斥作用減弱，ESR增大。以往報(bào)道顯示，活動(dòng)期肺結(jié)核患者體內(nèi)CRP和ESR水平顯著升高[12]；但ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)，兩者用于肺結(jié)核診斷的特異性較差[13]。SAA4是屬于載脂蛋白家族內(nèi)的急性時(shí)相蛋白，可與機(jī)體內(nèi)高密度脂蛋白結(jié)合，促進(jìn)淀粉樣纖維原形成，促進(jìn)細(xì)胞粘附。與CRP一樣，SAA4亦是臨床常用的早期感染性炎癥反應(yīng)水平監(jiān)測(cè)的敏感性指標(biāo)。黃琪淋等研究顯示，涂陰肺結(jié)核患者體內(nèi)SAA4顯著高表達(dá)[14]，與本研究活動(dòng)期肺結(jié)核患者測(cè)定結(jié)果相一致。表明，結(jié)核分枝桿菌感染可刺激機(jī)體內(nèi)急性時(shí)相蛋白SAA4高表達(dá)。進(jìn)一步分析顯示，合并肺外結(jié)核和合并糖尿病的肺結(jié)核患者血清SAA4水平明顯高于單純肺結(jié)核，重癥肺結(jié)核患者血清水平顯著高于輕癥患者。表明，并發(fā)肺外結(jié)核和糖尿病等病癥，或隨著患者病情加重，其血清SAA4表達(dá)呈現(xiàn)顯著增強(qiáng)趨勢(shì)。提示，臨床可通過(guò)監(jiān)測(cè)肺結(jié)核患者血清SAA4水平變化預(yù)測(cè)患者病情發(fā)展。Pearson相關(guān)系數(shù)和ROC曲線分析顯示，肺結(jié)核患者血清SAA4表達(dá)水平與血清CRP和ESR顯著正相關(guān)，其在肺結(jié)核診斷中的AUC面積大于CRP和ESR，靈敏度高于CRP和ESR。進(jìn)一步證實(shí)，血清SAA4水平測(cè)定可用于活動(dòng)期肺結(jié)核臨床診斷中。Gelsolin是調(diào)節(jié)控制細(xì)胞移動(dòng)、凋亡、細(xì)胞骨架重排中信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等重要結(jié)合肌動(dòng)蛋白分子，其N(xiāo)端存在Ca2+不敏感性結(jié)構(gòu)域，C端存在Ca2+敏感性結(jié)構(gòu)域，確保其既能清除機(jī)體內(nèi)循環(huán)中肌動(dòng)蛋白，又可中和機(jī)體炎癥因子，維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定；此外，其還具有保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能，抑制肺內(nèi)毛細(xì)血管通透性增加，減輕急性肺損傷患者體內(nèi)氧化應(yīng)激性損傷等功效[4]。以往報(bào)道顯示，臨床可通過(guò)降低血液中Gelsolin水平，改善患者預(yù)后[16-18]。本研究測(cè)定分析顯示，研究組血清Gelsolin水平明顯低于對(duì)照組。提示，結(jié)核分枝桿菌感染可抑制Gelsolin表達(dá)。進(jìn)一步分析顯示，合并肺外結(jié)核和合并糖尿病的肺結(jié)核患者血清Gelsolin水平明顯低于單純肺結(jié)核，重癥肺結(jié)核患者血清水平低于輕癥患者。表明，并發(fā)肺外結(jié)核和糖尿病等病癥，或隨著患者病情加重，其血清Gelsolin表達(dá)受抑制狀態(tài)越明顯。提示，臨床可通過(guò)監(jiān)測(cè)肺結(jié)核患者血清Gelsolin水平變化預(yù)測(cè)患者病情發(fā)展。Pearson相關(guān)系數(shù)和ROC曲線分析顯示，患者血清Gelsolin水平表達(dá)狀態(tài)與CRP和ESR顯著負(fù)相關(guān)，在肺結(jié)核診斷中的AUC面積同樣大于CRP和ESR，靈敏度高于CRP和ESR。證實(shí)，血清Gelsolin水平測(cè)定可用于活動(dòng)期肺結(jié)核臨床診斷。且兩種指標(biāo)聯(lián)合測(cè)定，對(duì)于活動(dòng)期肺結(jié)核的診斷效能強(qiáng)于其單一診斷[19-20]。

綜上所述，肺結(jié)核患者活動(dòng)期血清SAA4高表達(dá)，Gelsolin低表達(dá)，且不同類(lèi)型和不同病情活動(dòng)期患者血清SAA4和Gelsolin表達(dá)水平存在差異，可作為肺結(jié)核診斷和病情判斷的潛在血清學(xué)指標(biāo)，兩者聯(lián)合有助于提高肺結(jié)核診斷效能。