DNA倍體分析聯合血清腫瘤標志物篩查宮頸癌價值研究

梁 媛，蔡江義，謝 云，蔡 娜

(1.西北婦女兒童醫院醫學遺傳中心，陜西 西安 710061；2.西安航天總醫院病理科，陜西 西安710010； 3.西北婦女兒童醫院醫學檢驗中心，陜西 西安 710061)

宮頸癌是女性常見惡性腫瘤之一，具有高發病率及病死率[1]。相關數據統計[2]，全球范圍內每年宮頸癌新發病例約50萬例，年死亡例數約20萬，中國約占10.00%。宮頸癌早期治愈率高達90.00%～92.00%，故而宮頸癌早期篩查工作的開展十分重要[3]。目前臨床多采用液基薄層細胞學(Thinprep cytologic test，TCT)檢查篩查宮頸癌，該項技術具有操作簡單特點，故而得到臨床廣泛運用[4-5]。但在早期宮頸癌篩查過程中，TCT診斷準確性易受到諸多因素影響(如染色技術、取材及制片方法等)[6-7]。脫氧核糖核酸倍體分析檢查是一種篩查宮頸癌的新型手段，通過對細胞遺傳基因變異過程的觀察，來區分異常增生細胞，判斷癌前病變[8]。糖類抗原125(Carbohydrate antigen 125，CA125)、糖類抗原19-9(Carbohydrate antigen 19-9，CA19-9)、癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen，CEA)是臨床常用血清腫瘤標志物，可為宮頸癌篩查提供參考[9-10]。為明確在宮頸癌篩查中血清腫瘤標志物和倍體分析的聯用價值，本文對420例行宮頸癌篩查患者展開探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2019年12月至2020年12月到醫院行宮頸癌篩查的患者420例作為研究對象。420例患者年齡24～75歲，平均(38.42±5.39)歲；手術病理檢查顯：正常或宮頸炎癥208例，宮頸上皮內瘤變(Cervical intraepithelial neoplasia，CIN)Ⅰ級72例，CINⅡ級56例，CINⅢ級43例，宮頸癌41例。病例納入標準：自愿進行宮頸癌篩查者；非經期女性；了解且知情研究內容，自愿加入研究。排除標準：具有盆腔放療、子宮切除史者；無法配合檢查或不適宜檢查者；精神疾病者。本研究已經醫院醫學倫理委員會批準。

1.2 實驗方法

1.2.1 DNA倍體分析：檢查前，提醒患者樣本收集前24 h禁止陰道灌腸、性交及陰道檢查，且避開經期。通過窺陰器顯露子宮頸，以消毒棉簽收集分泌物，利用宮腔刷在子宮頸口沿著順時針方向轉4～6圈，取出宮頸刷并脫去刷頭，將刷頭尖放于含有細胞保存液的樣本管內。制取細胞學薄片，行Feulgen染色。通過全自動細胞DNA倍體分析儀，檢測DNA倍體。

1.2.2 血清標志物檢測：收集患者清晨狀態下空腹靜脈血5 ml，在3000 r/min條件下離心約15 min，留取上清液。通過化學發光免疫分析法，檢測CA125、CA19-9；借助酶聯免疫吸附法，檢測CEA水平。

1.3 判定標準 將DNA指數2.5作為臨界值用于評估細胞狀態。分析結果提示主要為2C細胞，未見異倍體細胞、DNA指數未超過2.5細胞為陰性；細胞增生超過5%，或可見1個及以上DNA指數高于2.5細胞，需實施組織活檢為可疑；4倍體細胞增生超過10%，或有3個及以上DNA指數高于2.5的細胞為陽性。CA19-9陽性>40 μg/L，CA19-9陽性>35 kU/L,CEA陽性>5 μg/L。

1.4 觀察指標 觀察DNA倍體分析與血清腫瘤標志物檢測結果，分析以上兩種檢測方式單獨及聯合篩查宮頸癌價值。敏感性=真陽例數÷(真陽例數+假陰例數)×100%，特異性=真陰例數÷(真陰例數+假陽例數)×100%，準確性=(真陽例數+真陰例數)÷總例數×100%。

2 結 果

2.1 病理學檢測結果分析 病理學檢查顯示，陽性檢出率為9.76%(41/420)。其中檢出陰性、宮頸炎208例(49.52%)，宮頸癌41例(9.76%)，CINⅠ72例(17.14%)、CINⅡ56例(13.33%)、CINⅢ43例(10.24%)。

2.2 DNA倍體與病理學檢測陽性比較 DNA倍體檢查顯示：陰性275例，可疑81例，陽性64例，見表1。DNA倍體陽性檢出率15.24%(64/420)和病理學檢查9.76%(41/420)比較有統計學差異(χ2=5.758，P=0.016)，見表1。

表1 DNA倍體與病理學檢測陽性比較(例)

2.3 血清腫瘤標志物檢測結果 正常或宮頸炎、CIN Ⅰ、CINⅡ、CINⅢ、宮頸癌組CA125、CA19-9、CEA水平比較，差異有統計學意義(均P<0.05)，見表2。

表2 血清腫瘤標志物檢測結果

2.4 DNA倍體分析、血清腫瘤標志物篩查的敏感度及特異度 DNA倍體分析篩查宮頸癌敏感性92.68%(38/41)，特異性93.14%(353/379)，準確性93.10%(391/420)；CA125篩查宮頸癌敏感性73.17%(30/41)，特異性50.13%(190/379)，準確性52.38%(220/420)；CA19-9篩查宮頸癌敏感性78.05%(32/41)，特異性56.99%(216/379)，準確性59.05%(248/420)；CEA篩查宮頸癌敏感性60.98%(25/41)，特異性60.16%(228/379)，準確性60.24%(253/420)。DNA倍體分析+CA125+CA19-9+CEA篩查宮頸癌敏感性、特異性及準確性高于DNA倍體分析、CA125、CA19-9、CEA(χ2=5.145、7.405、5.145、12.030，10.162、13.439、11.263、12.864，8.462、13.854、12.463、10.934；P=0.023、0.007、0.023、0.001，0.006、0.001、0.004、0.005，0.016、0.007、0.006、0.004)。見表3。

表3 DNA倍體分析、血清腫瘤標志物篩查的敏感度及特異度(例)

3 討 論

以往臨床多采用宮頸細胞學涂片檢查進行宮頸癌早期篩查，該種檢查方法具有費用少、成本低、運用范圍廣泛等優勢，但在收集、制作樣本過程中，易出現涂片不均勻、上皮細胞重疊，造成病變細胞無法被及時發現，促使宮頸癌篩查假陰性顯著增加[11-12]。

近年來相關研究發現[13-14]，正常人體細胞內DNA數量處于穩定狀態，在出現腫瘤時，病變宮頸上皮細胞核中DNA含量及染色體發生改變，此種現象改變遠早于病理學改變，多是因基因突變而致?；蛲蛔兛稍斐扇旧w重組，致使染色體片段增多或丟失，DNA含量也隨之發生相應改變[15]。故而通過DNA倍體分析，可客觀反映細胞遺傳基因改變過程，區分異常增生細胞，為癌前病變提供可靠依據。DNA為細胞生長、繁殖及分化基礎，屬于遺傳物質，其功能與結構異常與細胞癌變存在密切關系[16]。非整倍體染色的形成是腫瘤發生的重要標志之一，相關研究表示[17]，在諸多高度鱗狀上皮內病變(HSIL)、宮頸癌患者體內均可發現DNA倍體異常細胞。DNA倍體分析技術通過將病變組織細胞放于細胞培養液內，經過離心及分層等操作，獲取所需成分，從而減少雜質對檢查結果的干擾，促使細胞結構和形態更加清晰。在此條件下，采用全自動細胞DNA倍體分析儀技術，可有效避免人為觀察所造成的誤差，從而增加臨床診斷結果的準確性及客觀性。本研究中，DNA倍體分析發現隨著患者宮頸病變嚴重程度的增加，DNA指數高于2.5的細胞檢出例數也隨之增加，尤其是宮頸癌患者。可見通過DNA倍體分析能為宮頸癌早期篩查提供科學依據。

血清腫瘤標志物是一種反映腫瘤細胞存在及生長的化學類物質，由宿主和腫瘤間相互作用生成，或單由腫瘤細胞生成，廣泛存在于腫瘤組織、組織液及血液內。于腫瘤形成早期腫瘤標志物便會出現[18]。CA125屬于臨床常用腫瘤標志物之一，利用CA125單克隆抗體區分高分子糖蛋白，多見于卵巢癌患者宮頸內膜、子宮內膜及輸卵管內。當患者體內出現癌變細胞時，CA125水平會出現顯著增高。本研究中，宮頸癌組CA125水平和正?；蜓装Y、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ組比較，均顯著較高，同樣提示了在宮頸癌篩查中CA125可起到良好作用。但值得注意的是，CA125水平異常增高也可見于部分良性病變，如卵巢囊腫、盆腔炎、肝炎等，因此還應將其和其他檢驗方式進行聯合運用，以提升臨床診斷準確性。CA19-9為細胞膜上脂質，于血清內呈糖蛋白方式存在，由消化道癌變細胞分泌合成，因此被臨床廣泛用于消化道部位惡性腫瘤鑒別診斷及療效評估。本研究中，宮頸癌組CA19-9水平較正?；蜓装Y、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ組高，提示CA19-9可指導宮頸癌篩查工作的進行。CEA為一種含多糖蛋白復合物，屬于非特異性血清腫瘤標志物，其水平顯著增加多見于乳腺癌、肺癌及胰腺癌。CEA多存在于腫瘤細胞表面，結構十分復雜，可在多種惡性病變中表達，和腫瘤組織大小、浸潤程度及轉移存在密切關系。

本研究中，宮頸癌組CEA水平與正常或炎癥、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ組比，顯著較高，說明在宮頸癌篩查中CEA可起到良好參考作用。無論是DNA倍體分析還是血清腫瘤標志物檢查均存在一定局限性，為保證宮頸癌篩查質量，本研究提出將以上兩種檢測技術進行聯合運用。本研究結果顯示：DNA倍體分析+CA125+CA19-9+CEA篩查宮頸癌敏感性、特異性及準確性與DNA倍體分析、CA125、CA19-9、CEA比較，均明顯較高，提示DNA倍體分析結合血清腫瘤標志物篩查宮頸癌的價值更高。雖然本項研究已經初步得出在宮頸癌早期篩查中DNA倍體分析與血清腫瘤標志物具有良好聯合運用價值，但本次研究還存在一定局限性，如未充分驗證不同腫瘤標志物和DNA倍體分析的聯用價值、腫瘤標志物指標減少等，后期還應明確不同腫瘤標志物與DNA倍體檢查的不同價值，尋求一種經濟且準確性較高的聯合檢測方式，以減輕患者經濟負擔。

綜上所述，宮頸癌對女性身體健康危害性較為顯著，早期診斷工作的開展十分必要。DNA倍體分析、血清腫瘤標志物檢測均能在早期發現細胞癌變，促進臨床診療工作的開展，尤其是兩種檢測方式聯合運用價值更高。