PinX1調(diào)控PI3K/Akt信號(hào)通路影響口腔鱗癌HSC6細(xì)胞的增殖、侵襲和凋亡

鄧璐 曾利偉 焦紀(jì)蘭 江輝

口腔鱗癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)是常見(jiàn)的頭頸部惡性腫瘤之一，居全球惡性腫瘤的第八位，具有快速增長(zhǎng)、侵襲性強(qiáng)和易轉(zhuǎn)移等特性[1]；臨床上，手術(shù)、放療和化療是口腔鱗癌的主要治療手段，但患者5年生存率僅在65%左右[2]。因此，深入探討口腔鱗癌的發(fā)病機(jī)制尋找新的治療策略是有必要的。人Pin2結(jié)合蛋白X1(PIN2-interacting protein X1，PinX1)是一種端粒調(diào)控基因，定位于人8p23染色體上[3]。研究[4-6]顯示，PinX1在非小細(xì)胞肺癌、肝癌和乳腺癌等多種腫瘤中常見(jiàn)低表達(dá)，與腫瘤臨床病理特征和不良預(yù)后密切相關(guān)。且PinX1可影響細(xì)胞增殖、侵襲能力和凋亡水平發(fā)揮抑癌作用。口腔鱗癌組織PinX1表達(dá)降低與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[7]。然而，PinX1在口腔鱗癌中的調(diào)控作用未見(jiàn)報(bào)道。因此，本研究通過(guò)開(kāi)展體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，通過(guò)觀察PinX1對(duì)口腔鱗癌HSC6細(xì)胞功能的影響及調(diào)控機(jī)制以揭示PinX1在口腔鱗癌發(fā)生發(fā)展中的作用。

1 材料與方法

1.1 主要試劑、材料和儀器

人正常口腔上皮細(xì)胞株HOEC(上海雅吉生物公司)；口腔鱗癌細(xì)胞株HSC6(上海通派生物公司)；胎牛血清、青鏈霉素混合液(大連寶生物公司)；低糖改良Eagle培養(yǎng)基(dulbecco's modified eagle medium，DMEM)、高糖培養(yǎng)基(roswell park memorial institute，RPMI)-1640培養(yǎng)基(Hyclone公司，美國(guó))；PinX1、增殖核抗原Ki67、基質(zhì)金屬蛋白酶9(matrix metalloprotein 9，MMP-9)、B淋巴細(xì)胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2，Bcl-2)、磷酸化的磷脂酰肌醇-3-羥激酶(phosphorylation phosphatidylinositol-3-hydroxykinase,p-PI3K)、磷酸化的蛋白激酶B(protein kinase B,p-Akt)、PI3K、AKT和甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)抗體(Santa Cruz公司，美國(guó))；辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗(北京中杉金橋公司)。脂質(zhì)體2000(廣州銳博生物公司)；BCA蛋白定量試劑盒(Pierce公司，美國(guó))；胰蛋白酶、蛋白提取試劑盒、細(xì)胞計(jì)數(shù)(cell counting kit-8，CCK-8)試劑盒、膜聯(lián)蛋白 V-FITC(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(propidium iodide，PI)凋亡檢測(cè)試劑盒(上海碧云天公司)；……