Six1在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系

王春俠 門(mén) 翔 鄭大煒 段秋立 周小果 董萬(wàn)里 李 展

肺癌是常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其中多數(shù)為非小細(xì)胞肺癌[1]。現(xiàn)代研究表明上皮性腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移進(jìn)展的關(guān)鍵步驟是細(xì)胞從原發(fā)腫瘤部位脫落下來(lái)，然后侵襲到周?chē)|(zhì)、淋巴系統(tǒng)、血管中，這一過(guò)程涉及到上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial to mesenchymal transition，EMT)[2]。Six1 基因?yàn)閰⑴c調(diào)控EMT的重要轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，屬于Six 家族，在多種物種間保持著高度保守性。Six1在正常組織中的表達(dá)量少，但是在乳腺癌、結(jié)直腸癌、卵巢癌中呈現(xiàn)異常高表達(dá)狀況，可促進(jìn)惡性腫瘤細(xì)胞增殖并減少其凋亡[3-4]。有研究顯示Six1在早期肺腺癌中表達(dá)上升[5]，但是對(duì)肺癌的具體作用機(jī)制還不明確。本文具體探討了Six1在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系，目的是為肺癌患者提供簡(jiǎn)單、易操作且準(zhǔn)確性高的病情與預(yù)后判斷指標(biāo)。現(xiàn)總結(jié)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年1月1日至2019年12月31日就診于本院接受根治性手術(shù)治療的早中期非小細(xì)胞肺癌患者127例作為研究對(duì)象，納入標(biāo)準(zhǔn)：臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期；所有患者具有完整的臨床、病理資料；均經(jīng)病理確診為非小細(xì)胞肺癌；具有完整的隨訪資料；手術(shù)根治前未行放療、化療；年齡20～80歲；無(wú)其他腫瘤；首次診治。排除標(biāo)準(zhǔn)：妊娠或哺乳期婦女；合并嚴(yán)重心、腦、腎疾病患者；合并其他腫瘤者；臨床資料缺乏者；妊娠或哺乳期婦女。所有患者都在自愿條件下簽署了知情同意書(shū)，本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)了此次研究。

在127例患者中，男性65例，女性62例；年齡最小23歲，最大78歲，平均年齡(62.82±1.21)年；組織學(xué)分化：高分化43例，中分化57例，低分化27例；臨床分期：Ⅰ期76例，Ⅱ期51例；腫瘤最大直徑：≥5 cm 78例，<5 cm 49例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移42例。

1.2 Six1的免疫組化檢測(cè)

取所有患者的癌灶組織標(biāo)本(病灶組)與距離腫瘤邊緣≥5 cm的癌旁正常肺部組織標(biāo)本(癌旁組)，采用免疫組化法檢測(cè)Six1表達(dá)水平，兔抗人Six1單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。由兩名病理科資深醫(yī)師進(jìn)行評(píng)估，在高倍顯微鏡下(×400)每個(gè)染色切片隨機(jī)選取2～3個(gè)觀測(cè)細(xì)胞較清晰的視野，Six1主要在胞質(zhì)染色，按照半定量積分方法行結(jié)果判定，根據(jù)細(xì)胞比例和染色強(qiáng)度兩項(xiàng)積分相乘判定3～9分為陽(yáng)性。

1.3 預(yù)后調(diào)查

所有患者隨訪到2020年11月1日，調(diào)查與記錄患者的生存時(shí)間；同時(shí)調(diào)查患者的臨床病理特征，包括淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、組織學(xué)分化、腫瘤最大直徑等指標(biāo)。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS20.00軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，計(jì)數(shù)資料采用百分比表示，計(jì)量數(shù)據(jù)與計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)的兩兩對(duì)比方法為t檢驗(yàn)與卡方χ2分析，通過(guò)多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型篩選影響因素，采用ROC曲線進(jìn)行預(yù)測(cè)價(jià)值分析，相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 Six1表達(dá)陽(yáng)性率對(duì)比

病灶組的Six1表達(dá)陽(yáng)性率為73.2%(93/127)，高于癌旁組的26.0%(33/127)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=56.696，P=0.000)。

2.2 不同病理特征肺癌患者的Six1表達(dá)陽(yáng)性率對(duì)比

不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、組織學(xué)分化、腫瘤最大直徑的肺癌患者Six1表達(dá)陽(yáng)性率對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 不同病理特征肺癌患者的Six1表達(dá)陽(yáng)性率對(duì)比(例，%)

2.3 Six1在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其與臨床病理特征的相關(guān)性

Pearson相關(guān)分析顯示肺癌的臨床分期、腫瘤最大直徑、組織學(xué)分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與Six1表達(dá)陽(yáng)性率都存在相關(guān)性(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 Six1在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其與臨床病理特征的相關(guān)性(n=127)

2.4 預(yù)后情況

所有患者隨訪到2020年11月1日，生存106例，死亡21例，死亡率為16.5%，平均生存時(shí)間為(16.21±4.24)個(gè)月。

2.5 影響因素分析

單因素與多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析顯示Six1表達(dá)陽(yáng)性率都為影響患者預(yù)后死亡的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 影響肺癌患者預(yù)后的單因素與多因素分析(n=127)

3 討論

現(xiàn)代研究表明腫瘤的發(fā)生與轉(zhuǎn)移是涉及到多種因素、多種基因表達(dá)變化與多種細(xì)胞因子參與的過(guò)程[6]，肺癌的早期診斷與檢測(cè)有助于早期發(fā)現(xiàn)肺癌高危人群，也可對(duì)已有肺癌患者進(jìn)行病情判斷與預(yù)后預(yù)測(cè)。隨著分子生物學(xué)技術(shù)不斷發(fā)展，腫瘤標(biāo)志物在臨床診斷上的應(yīng)用越來(lái)越廣泛。

Six1是一種在多種生物中廣泛表達(dá)但高度保守的特異性轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，參與調(diào)控機(jī)體組織器官形成、細(xì)胞周期進(jìn)程、胚胎細(xì)胞分化發(fā)育等。Six1位于人第14號(hào)染色體，基因表達(dá)產(chǎn)物是含有283個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)，可與DNA特異性結(jié)合，從而調(diào)節(jié)下游靶基因的表達(dá)。高表達(dá)的Six1能通過(guò)促進(jìn)惡性腫瘤細(xì)胞增殖，也可激活細(xì)胞周期蛋白D1、細(xì)胞周期蛋白A1的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[7]。本研究顯示病灶組的Six1表達(dá)陽(yáng)性率為73.2%，高于癌旁組的26.0%(P<0.05)。

由于肺癌發(fā)病具有隱匿、侵襲性強(qiáng)、復(fù)發(fā)率高等特點(diǎn)，臨床治療有極大困難[8]。浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移是肺癌在內(nèi)的幾乎所有惡性腫瘤的主要特性，也是肺癌難以根治、死亡率高的重要原因。Six1在腫瘤細(xì)胞中可呈現(xiàn)過(guò)表達(dá)狀況，可促進(jìn)上皮性腫瘤細(xì)胞發(fā)生EMT[9]。本研究顯示不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、組織學(xué)分化、腫瘤最大直徑的肺癌患者Six1表達(dá)陽(yáng)性率對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；Pearson相關(guān)分析顯示肺癌的臨床分期、腫瘤最大直徑、組織學(xué)分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與Six1表達(dá)陽(yáng)性率都存在相關(guān)性(P<0.05)。當(dāng)前也有研究表明Six1 基因?yàn)镋2F1 的轉(zhuǎn)錄靶基因，屬于轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，Six1可經(jīng)激活細(xì)胞周期靶基因開(kāi)啟靶基因轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)錄激活于G1-S 期，轉(zhuǎn)錄水平增加于S 期，進(jìn)而抑制其結(jié)合DNA[10]。不過(guò)在酪蛋白激酶Ⅱ作用下，磷酸化的Six1 可喪失活性，致使G1-M 期轉(zhuǎn)變，從而喪失發(fā)揮抑制DNA的作用。

肺癌是具有高發(fā)病率和高死亡率的惡性腫瘤之一，且當(dāng)前的發(fā)病年均增長(zhǎng)率顯著高于其他惡性腫瘤，且有年輕化的趨勢(shì)[11]。根治性手術(shù)治療仍然是肺癌的主要治療方式，雖然近年來(lái)肺癌的診療技術(shù)取得了很大進(jìn)步，但肺癌患者5年生存率仍然較低[12-14]。因此如何對(duì)肺癌術(shù)后患者的預(yù)后進(jìn)行準(zhǔn)確判斷，對(duì)延長(zhǎng)患者生存時(shí)間及制定治療方案均具有重要意義。本研究顯示所有患者隨訪到2020年11月1日，生存106例，死亡21例，死亡率為16.5%，平均生存時(shí)間為(16.21±4.24)個(gè)月；單因素與多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析顯示Six1表達(dá)陽(yáng)性率都為影響患者預(yù)后死亡的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。本研究也存在一定的不足，納入的患者數(shù)量比較少，單一的指標(biāo)對(duì)肺癌的診斷與預(yù)測(cè)效果也都有一定的誤差，將在后續(xù)研究中進(jìn)行探討。

總之，Six1在肺癌中呈現(xiàn)高表達(dá)狀況，與患者的臨床病理特征顯著相關(guān)，是影響肺癌患者預(yù)后的重要危險(xiǎn)因素。