原發性肝癌組織中FAM96A表達及意義

李國濤 朱豫萌 張 盼 張國強

原發性肝癌的發病率較高，在具有肝硬化或者病毒感染的患者中，原發性肝癌的發病率可持續上升[1]。臨床上原發性肝癌的發生，能夠導致患者整體病死率的提高，增加了原發性肝癌患者遠期病情惡化的風險[2]。96序列相似的家庭成員A(FAM96A)是腫瘤相關調控基因，其能夠通過抑制腫瘤細胞癌基因的激活，降低癌細胞內下游效應因子的釋放速度，最終影響到腫瘤細胞的增殖過程[3]。部分研究者探討了FAM96A在消化系統惡性腫瘤患者中的表達情況，認為在消化系統惡性腫瘤中，FAM96A的表達濃度明顯下降[4-5]，但缺乏對于FAM96A的表達與肝癌患者臨床預后的關系研究。為了揭示FAM96A的表達與肝癌患者臨床預后的病情關系，從而為臨床上原發性肝癌的診療提供參考，本次研究選取2017年2月至2019年3月我院保存的原發性肝癌組織標本87例，探討了FAM96A的表達情況，報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2017年2月至2019年3月我院保存的原發性肝癌組織標本87例，同時選取癌旁組織(距癌邊緣>2 cm)作為對照，納入標準：①均經病理學確診；②臨床資料保存完整；③術前未行放化療等治療；④患者及家屬知情同意。排除標準：①合并有其他系統惡性腫瘤；②有內分泌疾病、免疫系統疾病、HIV感染。

1.2 實驗方法

搜集的標本組織采用液氮保存，采用蛋白提取試劑盒進行蛋白提取，BCA法調整蛋白濃度，提取的蛋白與SDS緩沖液混合10 min，SDS-PAGE電泳分離檢測蛋白，醋酸纖維膜進行蛋白的轉移，清洗膜后采用5%的血清蛋白進行封閉，TBST清洗3次，每次5 min，加入一抗(鼠抗人 濃度：1∶1000)5 ml，4 ℃冰箱過夜，TBST清洗3次，每次5 min，加入二抗(羊抗鼠 濃度：1∶2000)3 ml，TBST清洗3次，每次5 min，加入DAB顯影液(北京索萊寶科技有限公司)，以GADPH蛋白為內參，采用GSG2000核酸/蛋白凝膠圖像分析管理軟件掃描分析蛋白條帶。

1.3 隨訪方法

采用電話隨訪的方式進行出院后隨訪，其中隨訪時間節點為2020年5月，共有3例患者失訪，24例死亡，60例存活。

1.4 統計學處理

2 結果

2.1 原發性肝癌和癌旁組織FAM96A蛋白表達比較

原發性肝癌組織FAM96A蛋白相對表達量明顯低于癌旁組織，差異比較有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 原發性肝癌和癌旁組織FAM96A蛋白表達比較

2.2 FAM96A蛋白表達與肝癌臨床病理特征的關系

腫瘤直徑≥5 cm、有門靜脈癌栓、Ⅲ～Ⅳ期患者FAM96A蛋白相對表達量明顯低于腫瘤直徑<5 cm、無門靜脈癌栓，Ⅰ～Ⅱ期患者(P<0.05)，見表2。

表2 FAM96A蛋白表達與臨床病理關系

2.3 FAM96A蛋白表達與患者預后的關系

截止2020年5月，共有患者24例死亡，60例存活；死亡患者FAM96A蛋白相對表達量(0.610±0.100)明顯低于存活患者(0.709±0.097)(P<0.05)。

3 討論

在長期肝臟上皮細胞損傷的過程中，部分癌細胞的早期形成，能夠誘導癌信號通路的激活，最終增加早期原位癌或者浸潤癌的發生風險[6]。在高齡、長期吸煙或者過度飲酒的人群中，原發性肝癌的基礎發病率或者遠期病死率均可顯著上升[7]。臨床上的觀察發現，原發性肝癌患者的無瘤生存時間不超過40個月，其遠期無進展生存期也明顯的縮短[8-9]。而通過對于原發性肝癌臨床預后的評估，能夠在肝癌患者的早期治療方案的制定或者出院后隨訪方面發揮作用。甲胎蛋白能夠在原發性肝癌的診療及預后評估中發揮作用，但單純依靠甲胎蛋白評估肝癌患者臨床預后的靈敏度及可靠性仍然存在一定的局限。影像學檢查能夠在原發性肝癌的診療中發揮作用，但CT或者肝臟超聲檢查對于肝癌患者臨床轉歸評估的符合率較低。本次研究通過對于肝癌患者體內腫瘤調控因子或者腫瘤相關蛋白的分析，旨在為臨床上原發性肝癌的預后評估提供新的參考依據。

FAM96A主要存在于細胞質及細胞核周邊，其蛋白結構上包含有多個絲氨酸及巰基結構。FAM96A是轉錄調控相關序列因子，其能夠通過結合轉錄上游啟動子，降低癌基因的激活程度，最終抑制腫瘤細胞的過度增殖。FAM96A作為腫瘤癌細胞周期的調控因子，其能夠通過干預癌細胞周期G1/S期的比例，降低癌細胞自我增殖的活性，從而降低腫瘤細胞復發的風險[10]。相關臨床方面的研究已經證實，FAM96A能夠在肝癌的早期發生過程中發揮作用[11]，但缺乏對于FAM96A的表達與肝癌臨床病理特征及臨床預后的分析。

本次研究發現，在原發性肝癌患者病灶組織中，FAM96A蛋白的表達濃度水平明顯低于癌旁組織，統計學差異明顯，表明FAM96A蛋白的表達缺失能夠顯著影響到肝癌的病情進展。之所以存在FAM96A蛋白的低表達，主要由于肝癌細胞內癌細胞腫瘤微環境的改變，降低了正常上皮細胞對于FAM96A的分泌，抑制了FAM96A對于早期腫瘤發生的保護作用。有其他研究者也認為，在肝癌患者病灶組織中，FAM96A蛋白的表達濃度可隨著患者腫瘤轉移的發生而下降，而具有腹腔淋巴結轉移或者肺部轉移的患者中，FAM96A蛋白的表達濃度可持續下降，并能夠顯著影響到肝癌患的臨床結局[12]。在探討FAM96A蛋白的表達與肝癌患者臨床病理特征的關系過程中，可以發現在臨床分期較晚或者合并門靜脈轉移、腫瘤較大的患者中，FAM96A蛋白的表達濃度較低，提示FAM96A的表達缺失能夠顯著影響到肝癌患者臨床病理特征的進展。FAM96A的表達下降，失去了其對于肝癌上皮細胞生物學特征的穩定作用，導致癌細胞浸潤能力的上升，促進了腫瘤細胞浸潤深度和范圍的增加，從而提高了臨床分期；而FAM96A對于腫瘤門靜脈血栓或者腫瘤大小的影響，主要在于其能夠影響到腫瘤細胞粘附能力，促進了其對于鄰近正常組織及門靜脈內皮組織的粘附。在不同臨床預后的患者中，可以發現在死亡組患者中，FAM96A蛋白的表達陽性率明顯低于存活組，統計學差異顯著，表明FAM96A的低表達能夠影響到肝癌患者的臨床預后。這主要由于FAM96A的表達下降，影響到了肝癌細胞遠期復發的風險，從而影響到了臨床結局[13-15]。臨床上可以通過檢測FAM96A蛋白水平，進而協助評估肝癌的臨床預后。

原發性肝癌組織FAM96A表達下調，與腫瘤直徑、門靜脈癌栓和TNM分期有一定關系，同時可能與患者預后有關，值得進一步研究。