基于SPR技術定量檢測腎透明細胞癌組織中NHERF3蛋白水平

楊 穎,胡 家,張 悅

(1首都醫科大學中心實驗室,北京 100069;2首都醫科大學基礎醫學院生物化學與分子生物學系;*通訊作者,E-mail:yy9358@qq.com)

腎癌(RCC)是最常見的腎臟惡性腫瘤,約占成人惡性腫瘤的2%。其中,腎透明細胞癌(ccRCC)是最常見的亞型,占所有腎癌病例的75%[1]。20%-30%的患者在初診時就被診斷為局部進展性或轉移性ccRCC。雖然外科切除術是局限性ccRCC患者的有效治療手段,約30%的患者仍然會在術后15-18個月出現遠處轉移,進展性ccRCC患者的5年生存率低于10%[2,3]。近年多項研究表明ccRCC的發生與酪氨酸激酶受體和mTOR信號通路的過度激活相關聯,相應的靶向治療雖然提高了晚期患者的生存率,但是療效有限,僅有10%-30%的患者達到完全或部分緩解[4]。因此,尋找和發現有預測價值的生物標記物對于指導ccRCC的精準治療具有重要的意義。

我們前期研究發現PDZ蛋白NHERF3在ccRCC組織中表達水平明顯下調,并且多因素分析結果提示NHERF3可以作為ccRCC患者生存的獨立預后因子[5]。在研究過程中,我們采用了iTRAQ定量蛋白質組學、免疫組化和Western blot等技術對ccRCC組織中的NHERF3蛋白進行定量分析,這些方法均需要對樣品進行直接或間接標記,操作步驟繁瑣,實驗周期長,并且無法實現對腫瘤組織樣品中NHERF3濃度的定量分析。表面等離子共振(SPR)是無標記定量分析生物分子間相互作用的技術,近年來,SPR技術也應用于復雜樣品成分的定量研究[6-8],為此,本次實驗擬采用SPR技術建立無標記定量檢測ccRCC組織中NHERF3蛋白濃度的方法。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 試劑 CM5傳感芯片、HBS-EP+、氨基偶聯試……