高血壓患者血管內皮功能障礙的影響因素分析及血清miR-297a、miR-143水平對其的預測價值*

王偉英，任 娜

河北醫科大學附屬人民醫院/石家莊市人民醫院全科，河北石家莊 050031

高血壓可導致患者全身小靜脈發生痙攣，使血管內血流灌注量減少，損傷血管內皮功能，增加血管內皮功能障礙發生風險[1]。血管內皮功能障礙不僅會增加患者病死風險，還不利于患者身心健康。因此，在早期準確評估高血壓患者血管內皮功能障礙發生風險并進行干預尤為關鍵。微小RNA(miRNA)對特異基因的表達具有一定的調節能力[2]。miRNA可參與細胞生長、分化、凋亡等多種生物過程[3]，與機體的多種生理、病理過程密切相關，是多種心肌疾病的生物標志物[4]。miR-297a、miR-143是兩種常見的miRNA，是調節生物體生命活動的主要分子。許多miRNA有利于機體創傷的愈合及血管生成[5-6]。筆者推測miR-297a、miR-143表達可能參與了高血壓患者血管內皮功能障礙的發生、發展，而相關研究較少。本研究探討了高血壓患者血管內皮功能障礙發生的影響因素，旨在將影響因素的相關指標用于對高血壓患者血管內皮功能障礙的早期風險評估，從而指導早期臨床干預，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 本研究最終納入了2018年3月至2020年1月于本院接受治療的69例高血壓患者。其中男31例，女38例；年齡55～67歲，平均(61.32±2.01)歲；高血壓病程3～10年，平均(6.03±1.11)年。納入標準：(1)符合《中國高血壓防治指南(2010)》[7]中的高血壓診斷標準；(2)均為原發性高血壓；(3)生命體征平穩且意識清楚。排除標準：(1)伴有精神障礙影響檢查配合度；(2)合并病理性認知功能障礙；(3)合并惡性腫瘤；(4)合并其他重要臟器相關疾病或病變。患者及家屬均知曉本次研究內容且簽署了知情同意書。

1.2方法

1.2.1血管內皮功能障礙的評估及分組 參照文獻[8]，依據治療期間血管內皮功能障礙發生情況，將發生血管內皮功能障礙的患者納入發生組，剩余患者納入未發生組。

1.2.2基線資料收集 使用本院自制基線資料調查量表調查兩組患者基線資料，克朗巴哈系數(Cronbach′s α)為0.86，重測效度為0.88，主要內容包括年齡、性別、高血壓家族史、吸煙史(吸煙指數≥400為有吸煙史，吸煙指數=每天吸煙支數×吸煙年數)、酗酒史(1次喝5瓶或5瓶以上啤酒或血液中的乙醇濃度≥0.08 g/dL為有酗酒史)、合并糖尿病(糖尿病診斷標準：空腹血糖≥7.0 mmol/L，和/或餐后2 h血糖≥11.1 mmol/L)。

1.2.3實驗室指標檢測 (1)三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、尿酸(UA)、脂蛋白a(Lp-a)、載脂蛋白A(ApoA)、載脂蛋白B(ApoB)、載脂蛋白E(ApoE)、磷脂(PLIP)：在患者開始接受治療當天早晨抽取外周肘靜脈血5 mL，使用TD5A型自動脫蓋離心機(長沙英泰儀器有限公司)，以3 000 r/min的速度離心10 min后取血清，使用美國貝克曼庫爾特有限公司AU5800型全自動生化分析儀進行檢測。(2)纖維蛋白原(FIB)：于患者開始接受治療當天早晨抽取外周肘靜脈血4 mL置于含有枸櫞酸鈉的試管中，使用自動脫蓋離心機，以3 000 r/min的速度離心10 min后取血清，采用全自動凝血分析儀[企晟(上海)醫療器械有限公司，SF-8000型]檢測。(3)成纖維細胞生長因子23(FGF23)、基質金屬蛋白酶-14(MMP-14)：于患者開始接受治療當天早晨抽取外周肘靜脈血5 mL，使用自動脫蓋離心機，以5 000 r/min離心5 min后取血清，用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測，試劑盒由合肥萊爾生物科技有限公司提供。(4)miR-297a、miR-143：于患者開始接受治療當天早晨抽取外周肘靜脈血10 mL，以3 500 r/min的速度離心10 min后取血清，采用賽默飛世爾公司TRIzol Plus RNA純化試劑盒提取RNA；使用ABI公司TaqMan檢測試劑盒對miR-297a、miR-143進行反轉錄和擴增；使用熒光實時定量PCR進行檢測，在待檢樣品中額外加入5 nmol/L的cel-miR-39作為內參，采用2-ΔΔCt方法分別計算miR-297a、miR-143的相對表達量[9]。

2 結 果

2.1血管內皮功能障礙發生情況 69例高血壓患者中，發生血管內皮功能障礙的有18例(納入發生組)，發生率為26.09%(18/69)，未發生血管內皮功能障礙的有51例(納入未發生組)。

2.2兩組間基線資料、實驗室指標的比較 兩組間年齡、性別、高血壓家族史、吸煙史、合并糖尿病的情況、酗酒史、TC、TG、HDL-C、LDL-C、UA、FIB、Lp-a、ApoA、ApoB、ApoE、PLIP比較，差異均無統計學意義(P>0.05)；發生組血清FGF23、MMP-14水平高于未發生組，miR-297a、miR-143水平低于未發生組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 發生組與未發生組基線資料、實驗室指標比較

續表1 發生組與未發生組基線資料、實驗室指標比較

2.3高血壓患者血清miR-297水平與miR-143水平的相關性分析 高血壓患者血清miR-297a水平與miR-143水平呈正相關(r=0.548，P<0.05),見圖1。

圖1 高血壓患者血清miR-297a水平與miR-143水平相關性的散點圖

2.4Logistic回歸分析高血壓患者發生血管內皮功能障礙的危險因素 將高血壓患者血清FGF23、MMP-14、miR-297a、miR-143水平分別作為自變量，血管內皮功能障礙發生情況作為因變量(1=發生，0=未發生)，Logistic回歸分析顯示，血清FGF23、MMP-14是高血壓患者發生血管內皮功能障礙的危險因素(OR>1，P<0.05)，血清miR-297a、miR-143是高血壓患者發生血管內皮功能障礙的保護因素(OR<1，P<0.05)。見表2。

表2 Logistic回歸分析高血壓患者發生血管內皮功能障礙的危險因素

2.5血清miR-297a、miR-143水平用于預測高血壓患者發生血管內皮功能障礙的效能分析 繪制ROC曲線，見圖2，血清miR-297a、miR-143水平單獨及聯合檢測預測高血壓患者發生血管內皮功能障礙的AUC均大于0.80，預測價值較理想，聯合預測的AUC最大。依據ROC曲線，血清miR-297a、miR-143的cut-off值分別為0.585、1.045，并計算得到特異度、靈敏度，見表3。

圖2 血清miR-297a、miR-143水平預測高血壓患者發生血管內皮功能障礙的ROC曲線

表3 血清miR-297a、miR-143水平預測高血壓患者發生血管內皮功能障礙的效能

3 討 論

血管內皮功能障礙是高血壓患者的常見并發癥，不僅是動脈粥樣硬化的早期表現，也是原發性高血壓患者心血管事件的高危因素，后者是導致患者死亡的主要原因，嚴重影響患者生命安全[10-11]。因此，對高血壓患者發生血管內皮功能障礙的風險進行評估并擬定合理干預方案對改善患者預后非常重要。

有研究報道，高血壓患者發生血管內皮功能障礙的風險約為25%[12]。本研究中，血管內皮功能障礙的發生率為26.09%(18/69)，與上述研究結果相近。可見高血壓患者血管內皮功能障礙的發生風險較高。高血壓的發病受多種因素影響，有研究指出，細胞生長因子及基質金屬蛋白酶(MMPs)參與了高血壓的發生、發展，而FGF23、MMP-14分別是常見的細胞生長因子和MMPs[13-14]。FGF23主要是由成骨細胞產生，能夠有效調節維生素D及鈣磷代謝，FGF23釋放入血后可激活蛋白激酶，進而參與多種臟器功能調節[15]。MMP-14是MMPs家族中常見的蛋白酶，MMPs家族在細胞外基質的降解及重構中起重要作用，與多種病理過程的發生發展有關[16]。FGF23、MMP-14可能受基礎合并癥、糖脂代謝紊亂等其他因素影響，致使水平異常升高，故單獨依靠這兩項指標的水平來評估高血壓患者發生血管內皮功能障礙的風險有較大的局限性。

miR-297a、miR-143作為miRNA主要存在于外泌體中，被機體組織細胞攝取后產生調節能力，且具有特異性[17]。外泌體已被證實是一種新的細胞通訊介質，具有傳遞miRNA的作用，可介導miRNA的轉導及免疫調節[18]。當機體心肌細胞缺氧、缺血時不利于外泌體的產生，進而釋放大量腫瘤壞死因子-α，進一步加重炎性反應，加速心肌細胞凋亡，不利于預后[19-20]。本研究中，發生組血清miR-297a、miR-143水平低于未發生組，初步表明血清miR-297a、miR-143與高血壓患者血管內皮功能障礙的發生、發展相關。某些血清miRNA已被發現可在急性心肌梗死患者中呈低水平狀態，是急性心肌梗死的潛在生物標記物[21]。正常情況下，某些miRNA對組織、細胞均有一定的保護作用，當組織、細胞發生缺血、缺氧時，miRNA的表達受到抑制，不僅進一步加重機體受損程度，且可與Beclin-Ⅰ結合，產生大量血管緊張素Ⅱ，引發心肌肥厚，加速右心衰竭的發生、發展[22-23]。為了更進一步明確血清miR-297a、miR-143水平與高血壓患者血管內皮功能障礙發生的關系，本研究采用了Logistic回歸分析，結果顯示miR-297a、miR-143均是高血壓患者發生血管內皮功能障礙的保護因素。ROC曲線顯示，血清miR-297a、miR-143水平單獨及聯合檢測預測高血壓患者發生血管內皮功能障礙的AUC>0.80，預測價值較理想。血清miR-297a、miR-143低水平與高血壓患者血管內皮功能障礙的發生、發展有關，可作為高血壓患者血管內皮功能障礙發生的預測指標。此外，本研究還對miR-297a、miR-143水平的相關性進行了分析，結果顯示高血壓患者血清miR-297a水平與miR-143水平呈正相關，提示高血壓患者血清miR-297a水平與miR-143水平可能相互影響、相互作用，共同參與了高血壓患者血管內皮功能障礙發生的調節，但二者的具體關系、相互影響的機制，以及參與疾病病理過程的機制仍未明確，需在未來進行更為深入的研究。

綜上所述，高血壓患者發生血管內皮功能障礙可能與血清miR-297a、miR-143低水平有關，臨床可考慮通過檢測高血壓患者血清miR-297a、miR-143水平來預測血管內皮功能障礙的發生，以指導臨床早期干預，改善預后。

志謝：河北醫科大學公共衛生學院張磊老師在統計學分析中提供的幫助。