邁瑞B(yǎng)C6800-PLUS血液分析儀8倍光學模式在低值血小板計數檢測中的臨床應用價值

郭浩翔，李濤，許穎（浙江省臺州醫(yī)院.檢驗科，.心內科，浙江臺州 371000）

低值血小板計數（PLT）是臨床疾病診斷的重要依據，也是血小板輸注的重要指標。國外輸血指南推薦，預防性的血小板輸注閾值為10×109／L［1］；國內輸血指南推薦，當PLT在（10～50）×109時，需要根據臨床出血情況來輸注血小板，當PLT低于5×109／L時，應立即給予血小板輸注［2］。目前，全自動血液分析儀的普及和應用大大提高了PLT 檢測的效率，但仍存在一定的局限性。常用的電阻抗法受到大血小板、小紅細胞、紅細胞碎片、血小板聚集等諸多因素的干擾，影響PLT。邁瑞B(yǎng)C6800-PLUS血液分析儀除用電阻抗通道和光學通道檢測PLT外，還裝載了其特有的8 倍倍增模式，即8 倍光學法，在檢測過程中，儀器將獲取較光學法模式下的8倍PLT統(tǒng)計量，來提高低值PLT 檢測的準確性。本研究將對該模式進行臨床應用的評價。

1 材料與方法

1.1 主要儀器與試劑 邁瑞B(yǎng)C6800-PLUS血液分析儀、SC-120自動血涂片制備儀（深圳邁瑞公司），BA53F顯微鏡（日本Olympus公司），XB-K-25 血細胞計數板（上海安信光學儀器制造公司），按《全國臨床檢驗操作規(guī)程（第3版）》配制PLT稀釋液（草酸銨法稀釋液）［3］。

1.2 標本來源與分組 收集本院2020 年1 月至2021 年1 月PLT≤50×109／L 的全血標本共335例，其中男176 例，女159 例，年齡2～87 歲。335例標本中，按濃度梯度挑選5例（經鏡檢無干擾）檢測重復性，其余330例標本根據有無血小板干擾分成無干擾組120 例，有干擾組210 例，其中有干擾組分成假性增高120例，假性減低90例。330例按PLT（×109／L）分為0～10、10～30、30～50組。

1.3 檢測方法

1.3.1 儀器檢測法 335 例標本用邁瑞B(yǎng)C6800-PLUS血細胞分析儀的電阻抗法、光學法、8 倍光學法檢測PLT，分別記為PLT-I、PLT-O、PLT-O8。

1.3.2 手工法 由2 名技術熟練的主管技師采用雙盲法嚴格按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程（第3版）》［3］手工計數PLT，取2次計數結果的平均值（2次誤差控制在5%以內），記為PLT-M。

1.3.3 染色鏡檢法 將335 例標本用血涂片制備儀制成血涂片，高倍鏡下觀察血小板干擾情況，并用油鏡確認，分類并記錄，有紅細胞碎片和小紅細胞干擾的歸為假性增高組，有大血小板和血小板聚集干擾的歸為假性減低組。

1.4 統(tǒng)計學分析 用SPSS 19.0 和Excel 2007 軟件對數據進行分析。用Excel 2007 對儀器進行重復性評價，用SPSS 19.0 對3 種儀器方法和手工法檢測結果進行配對樣本的t檢驗；以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 重復性 結果見表1。比較5 例標本PLT-I、PLT-O、PLT-O8 結果可見，PLT-O8 的CV和s均小于PLT-I、PLT-O的CV和s，說明PLT-O8 的重復性結果最好，精密度高。

表1 5例低值PLT標本重復性檢測結果

2.2 無干擾組3 種儀器方法與手工法比較 結果見表2。PLT-I、PLT-O、PLT-O8 分別與PLT-M 比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P均＞0.05）；說明PLT無干擾時，PLT-I、PLT-O、PLT-O8結果可靠。

表2 120例無干擾組3種儀器方法與手工法比較結果

2.3 假性增高組3 種儀器方法與手工法比較 結果見表3。120例假性增高標本，經鏡檢，有小紅細胞干擾者28 例，有紅細胞碎片干擾者43 例，上述干擾均存在者49 例。將PLT-I、PLT-O、PLT-O8 分別與PLT-M比較發(fā)現，PLT-I與PLT-M差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；當PLT 在0～10×109／L 時，PLT-O與PLT-M 差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而PLT-O8與PLT-M差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；表明PLT在0～10×109／L 且有紅細胞碎片和小紅細胞干擾時，PLT-O8準確性更好。

表3 120例假性增高標本3種儀器方法與手工法比較結果

2.4 假性減低組3 種儀器方法與手工法比較 結果見表4。90 例假性減低標本中，經鏡檢，血小板聚集者57 例，大血小板干擾者33 例。PLT-I、PLT-O、PLT-O8 分別與PLT-M 比較發(fā)現，PLT-I 與PLT-M 差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），PLT-O、PLT-O8與PLT-M 比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；表明血小板在有大血小板和血小板聚集干擾時，PLT-O和PLT-O8可靠。

表4 90例假性減低組3種儀器方法與手工法比較結果

3 討論

隨著科技的進步，市面上出現了很多型號的全自動血液分析儀，PLT的檢測方法也由過去的電阻抗法發(fā)展到現在的光學法、熒光法等，大大提高了臨床實驗室PLT 檢測的效率［4］。有研究報道，當PLT＜80×109／L時，與電阻抗法和光學法相比，熒光法檢測PLT具有更好的精密度和準確性［5］，但對于當PLT低于10×109／L時抗干擾檢測的報道并不多見。本研究數據顯示，當PLT＜10×109／L 且有紅細胞碎片或小紅細胞干擾時，邁瑞B(yǎng)C6800-PLUS 血液分析儀的8倍光學法準確性和精密度較高，可應用于臨床。

邁瑞B(yǎng)C6800-PLUS 血液分析儀的8 倍倍增模式是利用光學法原理，結合半導體激光和RNA 核酸熒光染色法，用前向散射光反映細胞大小，側向散射光的熒光強度反映細胞內核酸物質含量，在一定程度上檢測顆粒細胞內部結構和形態(tài)，分辨不同性質的顆粒細胞，由于小紅細胞、紅細胞碎片等沒有RNA不會被熒光染色，因此有效地消除了小紅細胞、紅細胞碎片等帶來的干擾。此光學通道還利用了PLT解聚技術，在恒定的溫度和pH 下加入解聚劑，再通過速度達到1 400 r／min 的物理攪拌，有效地解離聚集的血小板，能基本解決由于EDTA抵抗造成的血小板聚集問題。另外其8 倍倍增模式在以上原理基礎上獲取了對低值PLT 8 倍的粒子統(tǒng)計量，大大提高了低值PLT檢測的準確性。

臨床上，紅細胞碎片、白細胞碎片、小紅細胞是引起PLT假性增高常見的干擾成分［6］。有研究表明［7］，由于紅細胞和血小板是同一個計數通道，當紅細胞體積＜70 fL 時，會對PLT 產生干擾，而本研究的假性增高組只統(tǒng)計了小紅細胞和紅細胞碎片兩項干擾因素，對于其他白細胞碎片、未成熟紅細胞的干擾因素尚未可知。當外周血出現體積＜70 fL的真菌、有核紅細胞等干擾時，該模式是否適用需要作進一步研究。大血小板、血小板聚集（以EDTA 抗凝劑依賴常見）［8］常引起臨床上的PLT假性減低。本研究數據顯示，假性減低組中的57例血小板聚集標本有2 例標本并不能利用光學通道有效解決也無法手工計數，這可能與EDTA誘發(fā)血小板膜蛋白與GPⅡb／Ⅲa抗體反應，結合后的抗體Fc 端與單核細胞或者淋巴細胞膜上的Fc 受體牢固結合而產生的聚集現象有關，此時無法用光學法解聚血小板，而需要重新采集并用枸櫞酸鈉抗凝或者末梢血來糾正。另外，全血標本若采集后立即檢測PLT也會假性減低，這可能與血小板的可逆性聚集有關，此時需要標本靜置30 min 后重新檢測［9］。

綜上所述，當PLT用電阻抗法檢測出現低值報警時，如血小板聚集報警、直方圖、散點圖等，應該首先涂片復檢，以觀察到血小板的數量、大小、形態(tài)、有無聚集、聚集多少等。若鏡檢有血小板聚集、大血小板、紅細胞碎片、小紅細胞等干擾存在時，可選用光學法和8倍光學倍增模式檢測，若有紅細胞碎片和小紅細胞干擾存在且PLT＜10×109／L 時可選用8倍光學倍增模式。若遇到PLT其他干擾時，比如大塊血液凝固、白細胞碎片、真菌、有核紅細胞等，此時尚未有研究表明該8 倍光學模式可靠，這時還需要結合手工法和血涂片鏡檢法，才能保證PLT檢測的準確和質量，為臨床提供更可靠的檢驗信息。