梅毒血清固定患者淋巴細胞亞群的表達及臨床意義

龔愛紅，王繪翔，李彩虹，張振國（大連市皮膚病醫院檢驗科，遼寧大連 116021）

梅毒血清固定的定義目前國際上仍無統一認識。一般認為，梅毒患者經正規治療后，臨床癥狀消失，且無新發感染，亦無神經梅毒發生，但梅毒螺旋體非特異性抗體滴度下降至一定程度后即不再下降，而長期維持在低滴度水平，此現象稱為梅毒血清固定［1］。淋巴細胞是機體細胞免疫和體液免疫應答功能的重要細胞成分。機體正常情況下，各種淋巴細胞亞群（T 淋巴細胞、B 淋巴細胞、NK 細胞）保持一定的數量和比例，相互作用，穩定調節，維持著機體正常的免疫功能；當不同的淋巴細胞亞群的數量及功能發生異常改變時，機體免疫平衡遭到破壞，甚至導致疾病的發生。本研究主要觀察梅毒血清固定型的發生與機體免疫狀態的關系。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2019年5月至2020年11月在大連市皮膚病醫院接受治療的梅毒血清固定患者48例，其中男性29例、女性19例，平均年齡55.0歲；快速血漿反應素試驗（RPR）滴度轉為陰性的治療有效的梅毒患者29 例，其中男性18 例、女性11例，平均年齡51.3歲；體檢健康者30 例，其中男性13例、女性17例，平均年齡51.7歲；梅毒血清固定患者和治療有效的梅毒患者腦脊液性病研究實驗室試驗（VDRL）、梅毒螺旋體顆粒凝集試驗（TPPA）均呈陰性，血清人免疫缺陷病毒抗體（HIV-Ab）檢測均呈陰性。體檢健康者外周血VDRL、TPPA和HIV-Ab均呈陰性。各組年齡和性別差異均無統計學意義（P均＞0.05）。

1.2 主要試劑及儀器 BriCyte E6 流式細胞分析儀（深圳邁瑞公司），旋渦震蕩混勻器（江蘇天翎儀器公司），流式管（浙江拱東醫療器械公司）。CD3／CD4／CD8／CD45 四色抗體、CD3／CD19／CD16＋56／CD45四色抗體、溶血素（深圳邁瑞公司）等。

1.3 實驗方法

1.3.1 標本采集 通過靜脈穿刺采集外周血液，EDTA-K2抗凝，室溫（20～25 ℃）保存，4 h 內完成淋巴細胞亞群檢測。

1.3.2 標本處理與檢測 吸取20 μL 四色試劑加入試管底部；吸取50 μL EDTA-K2抗凝靜脈血加入試管底部（避免將血樣沾到試管壁上）；試管在旋渦混勻器上輕旋混勻，室溫（20～25 ℃）避光溫育15 min；向試管中加入450 μL 稀釋后的溶血劑，在旋渦混勻器上輕旋混勻，室溫（20～25 ℃）避光溫育15 min。觀察CD45／SSC 散點圖、CD3／CD19 散點圖、CD3／CD16＋56 散點圖及CD45／SSC 散點圖、CD3／CD4散點圖、CD3／CD8散點圖并設門，混合標本并用流式細胞儀檢測外周血各群淋巴細胞的表達情況。

1.4 統計學分析 用SPSS13.0統計軟件進行。正態分布的計量資料用表示，3 組間比較用方差分析，組間兩兩比較用LSD-t檢驗；以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

通過對梅毒血清固定型患者、梅毒治療有效患者和體檢健康者外周血淋巴細胞相對計數和絕對計數比較（表1、表2）發現，血清固定組、梅毒治療有效組外周血中的B 淋巴細胞相對計數和絕對計數較健康對照組少，差異有統計學意義（P＜0.05）；與健康對照組比較，梅毒血清固定患者淋巴細胞計數、CD4＋T 淋巴細胞計數及B 細胞計數均較少，差異均有統計學意義（P均＜0.05）；而血清固定組與梅毒治療有效組各細胞相對計數及絕對計數差異均無統計學意義（P均＞0.05）。

表1 梅毒血清固定患者與健康人對照組外周血淋巴細胞相對計數比較（）

表1 梅毒血清固定患者與健康人對照組外周血淋巴細胞相對計數比較（）

注：*，與健康對照組比，P＜0.05。

表2 梅毒血清固定患者與健康人對照組外周血淋巴細胞絕對計數比較（／μL，）

表2 梅毒血清固定患者與健康人對照組外周血淋巴細胞絕對計數比較（／μL，）

注：*，與健康對照組比較，P＜0.05。

3 討論

目前血清固定發生的原因尚不明確，其機制研究主要集中于3個方面：一是血清固定患者的細胞免疫異常，出現嚴重的免疫失衡及細胞免疫抑制導致清除梅毒螺旋體的能力減弱；二是梅毒螺旋體能夠逃避機體免疫反應，造成慢性感染；三是血清固定的判斷依賴于梅毒螺旋體非特異性抗體（即抗心磷脂抗體），該抗體可能是針對受損組織釋放的心磷脂而產生的。有學者認為，梅毒血清固定可能是機體的一種特定免疫狀態而非梅毒螺旋體的持續存在［2］。

本研究結果顯示，與健康人對照組相比，梅毒血清固定患者淋巴細胞計數、CD4＋T 細胞計數及B細胞計數均減少，差異均有統計學意義（P均＜0.05），表明梅毒血清固定患者存在免疫失衡。CD4＋T淋巴細胞中TH1 細胞介導的遲發型超敏反應為清除體內梅毒的主要機制［3］，隨著病情的發展，CD4＋T 細胞減少，使皮損內螺旋體不能完全被殺滅，造成梅毒螺旋體在體內殘留、擴散，并長期持續刺激機體發生變態反應，導致機體對病原體清除困難而造成疾病的持久活動性，進而表現為血清固定現象或進一步發展成晚期梅毒的組織損害。血清固定組、梅毒治療有效組外周血中的B淋巴細胞絕對計數較健康對照組減少（P＜0.05）。B 細胞是體液免疫的主要成員，在免疫中有雙向調節作用，并與T細胞介導的細胞免疫密切相關，但參與免疫失衡及免疫抑制的具體作用機制尚不明確。研究表明CD19＋CD24intCD38int成熟型B 細胞在治療前的梅毒患者及血清固定者體內的比例降低，而在血清轉陰者中無明顯變化，且在血清固定組及血清轉陰組間差異有統計學意義（P均＜0.05）；推測血清固定患者B細胞分化異常，成熟型B細胞減少而記憶性B細胞增多，可能與持續分泌梅毒螺旋體非特異性抗體有關［4-5］。