高分辨CT三維重建聯合肺泡灌洗液中SHOX2和RASSF1A基因甲基化檢測診斷早期肺結節的效能分析

劉家杰 肖澤林 莊仕龍

目前肺癌發病率與病死率占全球惡性腫瘤發病率和病死率的第1 位,而且隨著人們生活水平的提高,肺癌患者年齡日趨年輕化,因此該疾病已成為廣大醫生及患者較為重視的問題。通?？煞譃榉切〖毎伟┖托〖毎伟? 種類型,但由于肺泡沒有感覺神經,無法感受到疼痛,因此早期肺癌沒有較典型的臨床癥狀,多數患者難以及時確診,當出現咳嗽咳痰、咳血、胸痛時可能已發展到晚期［1］。肺結節作為肺癌早期主要臨床表現之一,一般可通過穿刺病理活檢進行確診,但對于較小的肺結節,其診斷率會受到實質成分、結節結構、技術要求等因素的影響。據相關數據顯示,高分辨CT 三維重建聯合肺泡灌洗液中SHOX2 和RASSF1A基因甲基化檢測在診斷早期肺結節與早期肺癌中的應用價值較好,尤其是較小的單發性肺結節的檢出率較高,能減少早期肺癌的漏診及誤診率［2,3］。基于此,本研究將本院60 例小細胞肺癌患者及100 例良性肺結節患者作為觀察對象,進一步分析高分辨CT 三維重建聯合肺泡灌洗液中SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化檢測的診斷優勢,以期為早期肺癌臨床診斷提供科學的理論依據與實踐依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2019 年1 月～2020 年12 月收治的160 例肺結節患者為研究對象,后期經CT 引導下經皮肺部病理穿刺活檢確診的小細胞肺癌(肺惡性腫瘤直徑≤3 cm)患者60 例,良性肺結節患者100 例。小細胞肺癌患者男43 例,女17 例；年齡30～65 歲,平均年齡(52.76±11.53)歲。良性肺結節患者男69 例,女31 例；年齡25～68 歲,平均年齡(51.89±12.68)歲。兩種疾病患者的一般資料比較,差異無統計學意義(P>0.05),具有可比性。

1.2 納入及排除標準

1.2.1 納入標準 ①均符合肺結節相關診斷標準［4］,且臨床資料完整詳實；②視覺、聽覺等功能正常；③患者及其家屬對本研究知情同意。

1.2.2 排除標準 ①非肺部腫瘤患者；②嚴重傳染病患者；③依從性較差的患者；④嚴重精神障礙患者。

1.3 方法 所有患者先后進行高分辨CT 聯合肺泡灌洗液細胞學檢測,肺泡灌洗液中SHOX2 和RASSF1A基因甲基化檢測,高分辨CT 三維重建聯合肺泡灌洗液中SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化檢測。

1.3.1 高分辨CT 聯合肺泡灌洗液細胞學檢測 高分辨螺旋CT 常規胸部掃描,參數分別為層距10 mm、層厚10 mm、矩陣512×512、螺距1.0～1.1 mmm、時間1 s、電流140 mA、電壓120 kV,在標準圖像重建算法的基礎上對患者病灶區域進行高分辨CT 掃描,設置層距1.0～3.0 mm,層厚1.0～1.5 mm,掃描視野為24～35 cm,高分辨精細算法條件為電流170 mA、電壓140 kV；然后于局部麻醉狀態下根據影像學定位將支氣管鏡放置于患者病灶部位,應用生理鹽水反復灌洗,回收灌洗液50 ml,除去雜質與黏液后1500 r/min 離心10 min,應用BP-MI1640 培養液與10%小牛血清培養液于37℃培養箱中培養1 h 后采集細胞,并應用抗CD3+、抗CD4+、抗CD8+、單克隆抗體染色后對T 淋巴細胞亞群進行檢測。

1.3.2 肺泡灌洗液中SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化檢測 取患者肺泡灌洗液10 ml,行10000 r/min離心5 min,除去上清液,將剩余沉淀用于提取DNA,提取DNA 結束后應用亞硫酸鹽進行修飾；應用Primer 5.0 設計引物,SHOX2 的正向引物序列為：5’-GGTGTTGTGTCGTATAGGGAGT-3’,反向引物序列為：5’-TCCGCCTCCTACCTTCTAAC-3’；RASSF1A 的正向引物序列為：5’-GAGGGAAGGAAGGGTAAGG-3’,反向引物序列為：5’-GAGGGAAGGAAGGGTAAGG-3’。測序聚合酶鏈式反應(PCR)體系(40 μl)：將修飾后的DNA 5 μl,上游引物(10 μmol/L)0.8 μl,下游引物(10 μmol/L)0.8 μl,2×Taq 緩沖液(含有Taq 酶與dNTPs)加水13.4 μl；PCR 擴增：PCR 預變性95℃ 10 min,循環95 ℃ 30 s,58 ℃ 35 s,72 ℃ 30 s,45 個 循環。延 伸72℃ 8 min,上述PCR 產物經檢測合格后送生物工程有限公司測序。

1.3.3 高分辨CT 三維重建 行高分辨CT 常規掃描后,將二維圖像傳入工作站,應用Hitachi 3D Display 軟件進行三維容積處理：確定上閾值為-250～350 Hu 和下閾值為-650～800 Hu,劃出興趣區,選擇參與重建的斷層圖像(參與重建的斷層圖像應當是同一掃描序列的連續層面,包括患者病灶每一個病變的層面與上下2～4 層),三維圖像顯示只有根據具體需要行進一步調整,最大程度地顯示病灶處病變狀況及病灶周圍支氣管與肺血管狀況,三維圖像顯示之后對圖像的亮度和對比度進行適當調節,使其達到最佳的視覺效果。同時對病灶進行旋轉、切割,進一步觀察病灶內部的邊緣、結構以及相鄰的血管及支氣管的狀況。

1.4 觀察指標 以CT 引導下經皮肺部病理穿刺活檢為金標準,對比三種檢測方式診斷早期肺結節的效能。

1.5 統計學方法 采用SPSS21.0 統計學軟件進行統計分析。計量資料以均數±標準差()表示,采用t 檢驗；計數資料以率(%)表示,采用χ2檢驗。P<0.05 表示差異具有統計學意義。

2 結果

高分辨CT 三維重建聯合肺泡灌洗液中SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化檢測的靈敏度、準確率高于高分辨CT 聯合肺泡灌洗液細胞學檢測、肺泡灌洗液中SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化檢測,高分辨CT 三維重建聯合肺泡灌洗液中SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化檢測的特異度高于高分辨CT 聯合肺泡灌洗液細胞學檢測,差異具有統計學意義 (P<0.05)。高分辨CT 聯合肺泡灌洗液細胞學檢測、肺泡灌洗液中SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化檢測的靈敏度、準確率比較,差異無統計學意義(P>0.05)；肺泡灌洗液中SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化檢測、高分辨CT 三維重建聯合肺泡灌洗液中SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化檢測的特異度比較,差異無統計學意義(P>0.05)。見表1,表2。

表1 不同檢測方式的診斷結果(n)

表2 不同檢測方式的靈敏度、特異度及準確率比較(%)

3 討論

據臨床數據顯示,肺癌患者5 年存活率<12.00%,若早期及時給予準確診斷及治療措施,其存活率可提升至70.00%,因此近幾年肺小結節與早期肺癌的診斷備受臨床醫師關注,隨著我國醫學影像技術的不斷發展以及CT 在臨床的廣泛應用,加上高分辨CT 三維重建技術能更細膩地顯示出肺結節征象,從多方位角度對患者病變部位進行形態學分析,從而使得肺結節的檢出率愈來愈高,即便如此CT 檢測在早期肺癌診斷中依然存在某些不足之處,就算是高分辨CT 在圖像顯示中也僅見縱隔創傷病灶結節中的實性成分,在一定程度上會直接影響肺結節診斷準確率［5］。此外,林列坤等［6］的研究結果顯示,等電子纖維支氣管鏡取樣后的肺泡灌洗液進行基因甲基化檢測能夠減少惡性腫瘤患者的機體損傷,不僅能改善肺癌患者早期診斷準確率,還能進一步提高其生存率。但迄今為止,鮮有高分辨CT 三維重建聯合肺泡灌洗液中SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化檢測診斷分辨早期肺結節與早期肺癌相關的研究,因此本研究將高分辨CT 聯合肺泡灌洗液細胞學檢測與高分辨CT 三維重建聯合肺泡灌洗液中SHOX2和RASSF1A 基因甲基化檢測用于早期肺結節診斷中。

本研究診斷結果顯示,高分辨CT 三維重建聯合肺泡灌洗液中SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化檢測的靈敏度96.67%、準確率96.25%高于高分辨CT 聯合肺泡灌洗液細胞學檢測(靈敏度83.33%、準確率84.38%)、肺泡灌洗液中SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化檢測(靈敏度86.67%、準確率88.75%),高分辨CT 三維重建聯合肺泡灌洗液中SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化檢測的特異度96.00%高于高分辨CT 聯合肺泡灌洗液細胞學檢測的85.00%,差異具有統計學意義 (P<0.05)。表明高分辨CT 三維重建聯合肺泡灌洗液中SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化檢測方式在早期肺結節中的診斷效能更高,分析原因可能是首先通過多方位多層面的高分辨CT 三維重建技術顯示肺部結節征象,清楚地顯示支氣管、胸膜、血管等與肺部結節的關系,以便于早期惡性結節的診斷［7］；而肺泡灌洗液檢測是指通過微生物學及化學方法對肺泡灌洗液進行分析,利用纖維支氣管鏡對支氣管以下肺段和亞肺段進行灌洗后,采集肺泡表面襯液可獲得肺泡灌洗液,對其進行實驗室檢查；而DNA 甲基化分子標志物SHOX2 對小細胞肺癌和肺鱗癌的診斷敏感性較高；RASSF1A 在腫瘤發生發展過程中有著重要的作用,在肺癌中有著較高的表達,尤其與肺腺癌的發生有著密切的關聯性,因此SHOX2 和RASSF1A 基因亦可作為早期肺結節鑒別條件之一,這與田祺等［8］的研究結果具有一致性。

綜上所述,高分辨CT 三維重建聯合肺泡灌洗液中SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化檢測用于早期肺結節診斷中,可有效提高其準確率,以減少誤診率和漏診率,值得推廣。