產前O型血孕婦抗體效價及IgG亞型分型聯合檢測對ABO-HDN診斷價值研究

錢永生 楊 勁 何安華

ABO血型抗體效價是指自身為O型血其丈夫為非O型血的孕婦，在孕期16周以上針對預防新生兒ABO新生兒溶血病（ABO-HDN）發生的一種檢測，可以用標準紅細胞或者丈夫的紅細胞進行檢測。大多數文獻[1-2]認為產前抗體效價≥1:64為異常，異常的產前抗體效價可能對胎兒造成傷害[3-4]。國內外均有文獻[5-6]報道IgG亞型分型中的IgG1和IgG3抗體存在抗體依賴的細胞介導的細胞毒性效應（ADCC）與IgG2和IgG4存在補體依賴的細胞介導細胞毒性效應（CDC）新生兒溶血病發生上有明顯的差異，可能是因為IgG1和IgG3可以通過胎盤進入胎兒體內，發揮ADCC導致紅細胞破裂溶血。本次研究通過用微柱凝膠法檢測IgG1和IgG3抗體聯合 ABO血型抗體效價進行綜合分析，為臨床預防、診治ABO-HDN提供參考依據，現將結果報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年5月-2019年4月在本醫院產科門診檢測產前抗體效價O型血其丈夫為非O型血孕婦388例（本次研究使用的是丈夫紅細胞），符合入組標準的84例。84例孕婦年齡21~40歲，檢測時孕期16~30周，胎次1~2次，孕次1~4次。

1.2 入組標準 ①孕婦16~30周在我院門診產科檢測抗丈夫紅細胞抗體效價，同時檢測IgG1、IgG3抗體。②在我院產科住院生育新生兒。③孕婦在孕產期無重大疾病（如腫瘤、自身免疫性疾病等），新生兒無早產或其他遺傳疾病。④孕婦RhD抗原為陽性，其不規則抗體為陰性。⑤孕婦產前24 h檢測抗丈夫效價與孕期效價變化不大于2個滴度。⑥孕期內無服用降效價中藥。

1.3 試劑與儀器 ①試劑：抗A抗B血型正定型試劑、人ABO血型反定型紅細胞、抗體篩查紅細胞、RhD-IgM定型試劑和樣品釋放劑（2-巰基乙醇）來自上海血液生物醫藥有限公司；IgG1、IgG3抗體微柱凝膠法檢測卡、新生兒溶血檢測試劑、HDN母體IgG效價檢測卡和相關檢測質控試劑來自長春博迅生物技術有限公司。所有試劑均在生產效期內使用。②儀器：LC-10C型血庫專用離心機來自于安徽中科中佳醫用儀器公司；TD-A型卡式醫用離心機和FYQ型試劑卡孵育器來自于長春博研科學儀器有限責任公司。

1.4 方法

1.4.1 ABO血型正反定型、RhD抗原檢測、不規則抗體檢測、新生兒溶血病檢測（直接抗人球蛋白試驗、游離抗體試驗和抗體釋放試驗）均嚴格按照說明書與相關規范和文獻進行[7]。

1.4.2 抗丈夫紅細胞效價檢測 首先用樣本釋放劑對孕婦血漿進行IgM滅活，滅活后用中性膠檢測IgM是否被完全滅活。再用生理鹽水將丈夫紅細胞稀釋到0.8%取50 μL，與滅活后的孕婦血漿（1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128及1:256）50 μL，加入到HDN母體IgG效價檢測卡中孵育15分鐘，離心判讀結果。

1.4.3 孕婦IgG1、IgG3抗體檢測 首先用樣本釋放劑對孕婦血漿進行IgM滅活，滅活后用中性膠檢測IgM是否被完全滅活。在IgG分型卡中每孔分別加入濃度0.8%父親或與父親同型紅細胞懸液50 μL，再每孔分別加入滅活后血漿50 μL，用微柱凝膠孵育器37 ℃孵育15分鐘，孵育完成后用血型血清學專用離心機離心，判讀結果。

1.5 結果判讀 上述試驗按照《免疫血液學》[8]、《全國臨床檢驗操作規程》[9]進行判讀結果。

1.6 統計學方法 采用SPSS17.0統計學軟件（中文版）進行數據處理，計數資料采用卡方檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 孕婦IgG1、IgG3抗體同時存在在診斷新生兒ABO-HDN的診斷價值 以孕婦IgG1、IgG3抗體同時存在分組：同時存在組47例重發生ABOHDN17例，發生率為36.2%；剩余組37例重發生ABO-HDN 3例，發生率為8.1%，兩組間差異有統計學意義（χ2=8.987，P=0.003），見表1。

表1 孕婦16~30周IgG1、IgG3抗體與ABO-HDN發生關系

2.2 孕婦IgG1、IgG3抗體同時存在聯合紅細胞抗體效價在新生兒ABO-HDN的診斷價值 ①以孕婦IgG1、IgG3抗體同時存在且紅細胞效價≥1:64分組，同時存在且效價≥1:64組40例發生ABOHDN 14例，發生率35%；剩余組44例，發生ABOHDN 6例，發生率13.6%，兩組間差異有統計學意義（χ2=5.271，P=0.022）。②以孕婦IgG1、IgG3抗體同時存在且抗丈夫紅細胞效價≥1:128分組，同時存在且效價≥1:128組27例中發生ABO-HDN 7例，發生率為25.9%；剩余組57例中發生ABOHDN 13例，發生率為22.8%，兩組間差異無統計學意義（χ2=0.098，P=0.754），見表2和表3。

表2 孕婦16~30周IgG1、IgG3抗體聯合紅細胞抗體效價≥1:64與ABO-HDN發生關系

表3 孕婦16~30周IgG1、IgG3抗體聯合紅細胞抗體效價≥1:128與ABO-HDN發生關系

3 討 論

ABO-HDN是一種母嬰不合發生的胎兒或新生兒的疾病，可以導致新生兒黃疸、貧血及水腫，嚴重時可以發展為核黃疸、死胎或者新生兒死亡[10-11]。新生兒溶血病的發生與許多因素有關，如新生兒紅細胞抗原的強弱；孕婦抗A(B)或丈夫紅細胞抗體效價；血型物質通過胎膜屏障的能力；孕婦IgG亞型等。目前在新生兒溶血病的預估中最多使用的是檢測孕婦抗A（B）或抗丈夫紅細胞抗體效價[12]，但在2018年7月第八版的婦產科學[13]的孕婦產前檢查已經不在提及孕婦抗A(B)效價，所以孕婦產前檢出高效價未必導致ABO-HDN的發生。

有文獻報道[14-15]Rh新生兒溶血病（Rh-HDN）的發生與IgG亞型IgG1、IgG3抗體含量有關，IgG1和IgG3容易通過胎膜屏障，進入胎兒血液循環與胎兒的紅細胞上抗原發生反應，導致Rh-HDN并且新生兒病情與IgG1和IgG3抗體的含量呈正相關。但ABO-HDN發生與IgG1和IgG3抗體有關的文獻較少，本次研究使用微柱凝膠法檢測IgG1和IgG3抗體聯合抗丈夫紅細胞效價按三種不同的分析方法與ABO-HDN的關系。

本次研究的84例孕婦中IgG1和IgG3抗體同時存在的48例，發生ABO-HDN 16例與其他IgG1抗體單獨存在和無IgG1和IgG3抗體存在有明顯的差異。說明IgG1和IgG3抗體同時存在與ABOHDN密切相關與馬印圖等[16]報道用微柱凝膠法檢測IgG亞型結論一致。本次研究發現發生新生兒高膽紅素血癥在與IgG1單獨存在沒有差別（共發生18例其中IgG1和IgG3抗體同時存在9例，發生率為18.8%；IgG1單獨存在10例，發生率為28.6%，與夏愛軍等[17]報道不相符，說明IgG1和IgG3抗體同時存在在診斷ABO-HDN的特異性高于新生兒高膽紅素血癥。

綜上所述，在孕婦產前用微柱凝膠法檢測IgG1和IgG3抗體在預估ABO-HDN發生的特異性是產前檢測方法上最高的。IgG1抗體單獨存在在84例孕婦中有83例，發病率為24.1%。如果IgG3同時存在發病率可以增加到36.2%，但IgG3單獨存在沒有發現，可能IgG3單獨存在不會發生ABO-HDN，致病關系還是與IgG1有關，IgG3可以起到介導和遞進效應。建議ABO血型效價異常的孕婦進行IgG1、IgG3抗體檢測，二胎及多胎的孕婦也應完善IgG1、IgG3抗體檢測，早發現早預防，從而可以減少ABO-HDN的發生。