丙型肝炎臨床檢驗技術現狀及研究進展

諶敦建

摘要：丙型肝炎（Hepatitis C）是一種傳染病，病因指感染丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV），以血液傳播為主，HCV是RNA病毒，具有高度異質性特點，感染初期多具有隱匿性，在全世界范圍內HCV感染率均較高，嚴重威脅人類生命安全，隨著臨床檢驗技術的不斷發展進步，臨床在診治丙型肝炎疾病中也越來越重視實驗室檢驗技術。文章就Hepatitis C臨床檢驗技術現狀及研究進展做一綜述報道如下：

關鍵詞：丙型肝炎;檢驗;感染;傳播;傳染病

【中圖分類號】R512.6+3 ?【文獻標識碼】A ?【文章編號】1673-9026（2021）06-366-01

丙型肝炎（以下簡稱丙肝，Hepatitis C）疾病特點以肝臟損害為主，具有多種傳播途徑，如血液、母嬰、家庭內接觸等，但仍然存在部分病例無法明確傳播途徑的情況，由此可見Hepatitis C的傳播途徑具有隱匿性與綜合性特點[1-2]。臨床認為Hepatitis C患者中70%可能發展為慢性Hepatitis C，20%患者可能隨著病情進展最終出現慢性肝病、肝硬化、肝細胞癌等。目前臨床尚未研發出治療Hepatitis C的有效疫苗，因此積極尋求檢驗HCV途徑，積極防治Hepatitis C疾病，做到早期治療，可在一定程度上避免Hepatitis C發病，保護全人類健康[3-4]。

1.Hepatitis C臨床檢驗技術現狀

1.1在目前臨床抗-HCV檢驗技術中，按照時間、抗原類型可分為3代，第一代指通過病毒基因組非結構區進而獲取抗原，應用IgG試劑盒檢測，臨床應用第一代檢驗技術可明顯降低HCV輸血感染率;但同時發現在檢驗中檢出抗體需要花費較長時間、且具有較高的假陽性率，同時檢測靈敏度相對較低[5]。第二代試劑中囊括C100抗原與HCV核心區多肽C22-3，檢驗技術優勢包括較高的特異性與敏感性，一般可在HCV感染8-12周左右即可檢測發現;第三代HCV抗體為ELISA試劑，其中重組NSS多肽成分可降低核心區抗原比例，并將非結構區NSS區C33C抗原占比數據，進而明顯提高檢測敏感性與特異性[6-7]。

抗-HCV檢驗技術分析：該技術是臨床最早應用、且應用時間最長的檢驗方法，因HC V感染后機體外周血中HCV含量與病毒抗原含量均較低，一般情況下直接檢測疾病難度高，臨床經過不斷研究、嘗試改良后最終發現抗-HCV檢測方法有效，同時也逐漸演變出酶聯免疫吸附試驗（ ELISA ）、重組免疫印跡法等可靠的檢驗方法[8]。臨床提出重組免疫印跡法特點包括靈敏度極高，臨床逐漸將其作為檢驗抗體的最佳標準，而正確使用蛋白芯片可更準確的表現抗-HCV分型;臨床認為ELISA檢測優勢包括操作步驟簡單、檢測成本低下等，該方式已經成為臨床應用最廣泛的檢測技術之一[9-10]。

1.2 HCV抗原檢測技術：當前臨床檢驗技術不斷發展進步，也在不斷革新HCV抗原檢測技術，以西方國家為例也在不斷嘗試研發定量、定性法相關的雙抗體夾心法檢測血清標本中的游離HCV，與其他RT-PCR技術比較發現[11]，新技術的出現簡化實際檢驗操作步驟，提高環境適應性，縮短檢驗時間，有效降低假陽性情況，也就意味著新的檢驗技術較大程度上克服了原有技術的弊端，因HCV核心抗原僅可在機體內存在27-70d，進而測定HCV核心抗原是無法脫離抗-HCV檢測結果而單獨開展的[12]。

1.3 HCV-RNA 核酸擴增檢測技術（NAT）：臨床認為感染途徑確認的主要工具即為NAT檢測技術，隨著機體不同飲食狀態，機體HCV-RNA水平也隨之變化，如患者攝入高脂肪、高蛋白飲食，則檢查結果提示明顯上升，進而出現不一致的檢測結果;此外NAT檢測技術操作難度較高，對設備要求高，檢測花費時間長、步驟繁瑣，臨床可行性相對較差，此外檢查結果可能因意外情況影響準確度，無法在全國范圍普及。

1.4同時檢測抗-HCV與HCV核心抗原技術：聯合檢驗抗原抗體技術是臨床專家經過漫長時間反復實踐獲得，該技術分析發現HCV篩查試劑盒、血清學聯合檢測新技術，目前主要成果便是HCV核心抗原結合外周蛋白抗體與部分核心抗體的檢測試劑盒，此外感染體內最早會出現的感染指標即為HCV核心抗原，幾乎可與HCV RNA同一時間出現，進而發現HCV-RNA的動力學變化與核心抗原關聯密切。在未來臨床上也會實施越來越多的聯合檢測方法，通過2步檢測篩查、診治疾病，可實現縮短檢驗時間。

1.5 電化學發光法 （ECL）采用全自動免疫分析儀（美國雅培C16000）檢測，試劑均由雅培貿易有限公司提供;檢測方法：采集5ml外周靜脈血標本，將血液樣本放入離心機中以3000r/min的轉速離心處理10分鐘，取上層血清作為檢測樣本，采取ECL檢測，按照規定的操作步驟檢測樣本。臨床提出ECL判定標準：陽性反應：標本A值≥Cut-Off（臨界值）、陰性：標本A值

2.小結

臨床有數據統計結果顯示，全球HCV感染人數高達1.85億，感染率約占全世界人口的3%，此外Hepatitis C疾病仍然以每年300-400萬例左右的例數不斷上升，在我國HCV患病率約為3.2%，在全世界范圍均處于靠前水平。我國HCV發病率高，感染的重要途徑包括輸血、經血制品傳播等，HCV隱匿性強，大部分患者感染病毒后初期無明顯癥狀，疾病早期難以被發現，因此大部分患者在確診時多錯失最佳治療時機，一般情況下Hepatitis C患者5年內治愈率較高，5-10年治愈率相對低下。就檢測方法而言，抗-HCV檢驗、ELISA、NAT等檢測方法在臨床應用各有優勢，同時也各有局限性，隨著臨床不斷發展新的醫學技術與實驗室檢驗技術，HCV檢測技術也不斷發展進步，但無論是哪一種檢測方法均需要滿足高靈敏度、快速獲得檢測結果、早期診斷等原則，HCV抗體檢測在臨床獲得廣泛應用，且檢測靈敏度也越來越高，不斷縮短HCV感染窗口期，目前臨床仍未應用HCV抗原直接檢測方法，而HCV RNA檢測技術已經發展成熟，但因條件限制無法在基層醫院普及應用，因此臨床可選擇聯合檢測儀降低假陰性率，達到早期診治初期HCV感染的目標。

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