lncRNA HNF1A-AS1通過miR-320d/SOX4軸調節宮頸癌的發展

謝錦霞 ，劉晶晶

宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤，早期癥狀不明顯，晚期出現陰道出血等癥狀[1]。近些年，宮頸細胞學篩查的普遍應用使宮頸癌的發病率和死亡率已有明顯下降，但癌細胞生物學特性多種多樣，導致宮頸癌易發生轉移，并對治療產生不同的反應。因此進一步了解宮頸癌的發展機制能為早期診斷和晚期預后提供新的分子理論基礎。長鏈非編碼RNA(long noncoding，lncRNA)是一類非編碼RNA，含有200個核苷酸，翻譯潛力有限[2-3]，研究發現lncRNAs參與細胞內外的多種活動，包括基因轉錄、mRNA剪接和腫瘤發生等[4-6]。HNF1A AS1是一種新鑒定的lncRNA，自鑒定以來，HNF1A AS1已被證明在人類腫瘤發生中起關鍵作用，如在口腔鱗癌和膠質瘤細胞中，HNF1A AS1表達上調，促進癌細胞的存活和轉移，提示HNF1A AS1可能作為癌基因促進癌癥發展[7-8]。然而，HNF1A AS1是否對宮頸癌細胞具有強大的促癌作用還沒有深入的研究。本研究擬探究HNF1A AS1在宮頸癌發展過程中的作用及機制，為治療宮頸癌患者提供新的理論基礎。

1 材料與方法

1.1 主要材料

人宮頸癌細胞C33A和人宮頸上皮永生化細胞株H8細胞來自上海生物細胞研究所；DMEM(Dulbecco's-modified Eagle's medium)培養基和胎牛血清來自美國Gibco公司；CCK-8試劑盒、點突變試劑盒和雙熒光素酶活性檢測試劑盒購自上海碧云天生物科技有限公司；PrimeScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser(Perfect Real Time)、LipofectamineTM2000購于美國Invitrogen公司；鈣粘附蛋白E(epithelial-cadherin，E-cadherin)、鈣粘附蛋白N(N-cadherin)、B淋巴細胞瘤-2(B-cell lymphoma-2，Bcl-2)、Bcl-2相關蛋白X(Bcl-2-Associated X，Bax)和GAPDH多克隆抗體購于上海圣克魯斯生物科技有限公司；模擬物對照(mimics NC)、miR-320d 模擬物(miR-320d mimics)、抑制劑對照(inhibitor NC)、miR-320d抑制劑(miR-320d inhibitor)、干擾對照(siRNA NC)、HNF1A-AS1干擾(HNF1A-AS1 siRNA)、SOX4干擾(SOX4 siRNA)質粒由廣州銳博生物科技有限公司合成。……